На главную
На главную

Измерение массовых концентраций 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в крови методом капиллярной газовой хроматографии

Методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газовой хроматографии для измерения массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробах крови в диапазоне концентрации для 2,4-дихлорфенола от 0,05 до 0,8 мг/дм3 и для 2,4,6-трихлорфенола от 0,05 до 0,9 мг/дм3. Методические указания по измерению массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробах крови предназначены для использования в санитарно-гигиенических, экологических, лечебных и научных организациях, осуществляющих деятельность в области профпатологии и экологии человека.

Обозначение: МУК 4.1.3233-14
Название рус.: Измерение массовых концентраций 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в крови методом капиллярной газовой хроматографии
Статус: введен впервые
Дата актуализации текста: 05.05.2017
Дата добавления в базу: 12.02.2016
Дата введения в действие: 19.12.2014
Утвержден: 19.12.2014 Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Опубликован: Роспотребнадзор (2015 г. )
Ссылки для скачивания:

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение химических соединений и
элементов в биологических средах

Сборник методических указаний
МУК 4.1.3056-13, 4.1.3057-13
МУК 4.1.3158 - 4.1.3161-14
МУК 4.1.3230 - 4.1.3233-14

Москва 2015

1. Сборник подготовлен творческим коллективом авторов в составе: д.б.н., проф. А.Г. Малышева (руководитель), к.б.н. А.А. Ермаков, В.А. Шохин (ФГБУ «Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина» Минздрава России).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Методические указания утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Назначение и область применения. 3

2. Физико-химические и токсикологические свойства. 3

3. Метрологические характеристики методики выполнения измерений. 3

4. Метод измерения. 4

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.. 4

5.1 Средства измерений. 4

5.2. Реактивы.. 5

5.3. Вспомогательные устройства, материалы.. 5

6. Требования безопасности и охраны окружающей среды.. 6

7. Требования к квалификации операторов. 6

8. Условия измерений. 6

9. Подготовка к выполнению измерений. 6

9.1. Подготовка посуды.. 6

9.2. Подготовка хроматографической системы.. 7

9.3. Приготовление растворов для градуировки. 7

9.4. Построение градуировочной характеристики. 8

9.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики. 9

9.6. Отбор проб. 9

10. Выполнение измерений. 9

11. Обработка результатов измерений. 10

12. Оформление результатов измерений. 11

13. Процедуры обеспечения достоверности измерений. 11

 

Введение

Включенные в сборник 10 методических указаний по определению химических соединений в биологических средах предназначены для использования в химико-аналитических исследованиях при проведении биомониторинга состояния здоровья населения, для практического использования в рамках социально-гигиенического мониторинга на территориях с высокой антропогенной нагрузкой, а также могут быть использованы для диагностических целей в рамках осуществления государственного санитарного надзора, контроля, экспертизы, расследований. Методические указания предназначены для специалистов химико-аналитических лабораторий системы Роспотребнадзора, научно-исследовательских институтов, работающих в области экологии человека, гигиены окружающей среды и защиты прав потребителей.

Методические указания, включенные в сборник, разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений», ГОСТ Р 1.5-92 «ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов», МИ 2335-95 «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа», МИ 2336-95 «Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритм оценивания».

Все методики измерения прошли метрологическую аттестацию в соответствии с правилами ПР 50.2.002-94 «ГСИ. Порядок осуществления государственного метрологического надзора за выпуском, состоянием и применением средств измерений, аттестованными методиками выполнения измерений, эталонами и соблюдением метрологических правил и норм».

В методических указаниях, включенных в сборник, приведены методы определения 15 органических соединений и 15 тяжелых металлов и элементов в биологических средах, в том числе 9 веществ и 15 элементов - в крови, 3 вещества и 12 элементов - в моче и 5 веществ - в молоке. Определение токсичных веществ и элементов основано на использовании современных высокочувствительных методов физико-химического анализа - капиллярной газовой хроматографии и газохроматографическом анализе равновесного пара, высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой.

Методические указания одобрены и рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации.

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

______________________ А.Ю. Попова

19 декабря 2014 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение массовых концентраций 2,4-дихлорфенола
и 2,4,6-трихлорфенола в крови
методом капиллярной газовой хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3233-14

Свидетельство о метрологической аттестации № 88-16374-241-01.00076-2012 от 26.11.2013.

1. Назначение и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газовой хроматографии для измерения массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробах крови в диапазоне концентрации для 2,4-дихлорфенола от 0,05 до 0,8 мг/дм3 и для 2,4,6-трихлорфенола от 0,05 до 0,9 мг/дм3.

1.2. Методические указания по измерению массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробах крови предназначены для использования в санитарно-гигиенических, экологических, лечебных и научных организациях, осуществляющих деятельность в области профпатологии и экологии человека.

1.3. Методические указания носят рекомендательный характер.

2. Физико-химические и токсикологические свойства

2,4-дихлорфенол - бесцветные игольчатые кристаллы. Относится к опасным веществам.

2,4,6-трихлорфенол - ромбические кристаллы. Относится к опасным веществам.

2,4-дихлорфенол и 2,4,6-трихлорфенол оказывают эмбриотоксическое, тератогенное и мутагенное действие, вызывают поражение верхних дыхательных путей, легких, печени, почек, миокарда, селезенки.

2,4-дихлорфенол

Регистрационный номер CAS

120-83-2

Формула

C6H4C12O

Молекулярная масса

163

Тпл., °С

45 ± 1

Ткип., °С

210

Растворимость в воде, г/100 мл при 20 °С

0,5

Давление паров, кПа при 53 °С

133

Класс опасности

4

2,4,6-трихлорфенол

Регистрационный номер CAS

88-06-2

Формула

С6Н3С13О

Молекулярная масса

197,44

Тпл., °С

68 ± 1

Ткип., °С

244,5

Растворимость в воде

не растворим

Давление паров, Па при 76,5 °С

133

Класс опасности

4

3. Метрологические характеристики методики
выполнения измерений

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значения погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышают значений, приведённых в табл. 1.

Таблица 1

Диапазон измерений, значения точности
(правильности и прецизионности) методики

Объект измерения

Диапазон измерений массовой концентрации мг/дм3

Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности, Р = 0,95), ±δ, %

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), σr, %

Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), σR, %

Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории), r, %

2,4-дихлорфенол

Кровь

от 0,05 до 0,8 вкл.

24

в

12

17

2,4,6-трихлорфенол

Кровь

от 0,05 до 0,9 вкл.

22

5

11

14

Значения показателя точности используют:

- при оформлении результатов измерений, выдаваемых лабораторией;

- при оценке деятельности лабораторий на качество проведения измерений;

- при оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики измерений в конкретной лаборатории.

4. Метод измерения

Выполнение измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробе крови проводят методом капиллярной газовой хроматографии с использованием детектора электронного захвата и применением химической модификации. Методика модификации и количественного определения 2,4-дихлорфенола в крови основана на экстракционном концентрировании 2,4-дихлорфенола из крови методом жидкостной экстракции в кислой среде, бромировании органического экстракта, содержащего 2,4-дихлорфенол, бромной водой и проведении этерификации трифторуксусным ангидридом в среде пиридина.

Методика количественного определения 2,4,6-трихлорфенола в крови основана на экстракционном концентрировании 2,4,6-трихлорфенола из крови методом жидкостной экстракции в кислой среде и проведении этерификации в органическом экстракте трифторуксусным ангидридом при добавлении пиридина.

Определению не мешают хлороформ, тетрахлорметан и другие хлорфенолы в количествах, не превышающих установленную величину.

Длительность анализа, включая экстракцию, бромирование и этерификацию биопробы, - 3 часа.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
материалы и реактивы

5.1 Средства измерений

Хроматограф газовый с детектором электронного захвата и капиллярной колонкой

 

Термометр жидкостной стеклянный

ГОСТ 28498

Секундомер 60-минутный счетчик с ценой деления 0,2 мин. Диапазон рабочих температур от -20 до +40 °С

ТУ 25-1894.003-90

Микрошприцы, диапазон дозируемого объема 1 - 10 мкл с ценой деления 0,2 мкл, погрешность 1 %

ТУ 2.833.106-2000

Весы лабораторные равноплечие 2-го класса точности; наибольший предел взвешивания 200 г, диапазон взвешивания по шкале мг от 0 до 100 мг, цена деления делительного устройства - 0,05 мг. Погрешность взвешивания по шкале мг ±0,15 мг

ГОСТ Р 53228-08

Меры массы

ГОСТ 7328-01

Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 см3

ГОСТ 1770-74

Пипетки градуированные 1-го класса точности вместимостью 1-2-1-1, 1-2-1-2, 1-2-2-5 см3

ГОСТ 29227-91

Мерный стакан вместимостью 1 дм3

ГОСТ 23932-90

Воронка делительная

ГОСТ 23932-90

Дозаторы жидкости механические с погрешностью ±0,1 мм3, объемом дозирования 1 - 5 см3, 100 - 1000 мм3, 20 - 200 мм3 с одноразовыми наконечниками

ГОСТ 28311-89

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

5.2. Реактивы

Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная)

ГОСТ 52501-05

Спирт этиловый ректифицированный

ГОСТ Р 51652-2000

Калий двухромовокислый, чда

ГОСТ 4220-75

Серная кислота концентрированная, осч

ГОСТ 14262-78

Щавелевая кислота, х

ГОСТ 22180-76

Толуол, осч 22-5

ТУ 263106544493179-01

Трифторуксусный ангидрид

 

Пиридин, чда

ГОСТ 13647-78

Натрий сернисто-кислый, чда

ГОСТ 195-77

Натрий серно-кислый безводный, чда

ГОСТ 4166-76

Калий бромистый, хч

ГОСТ 4160-74

Бром, хч

ГОСТ 4109-79

Стандартный образец 2,4-дихлорфенола высокой чистоты

ГСО 7198-95

Стандартный образец 2,4,6-трихлорфенола высокой чистоты

ГСО 7103-94

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

5.3. Вспомогательные устройства, материалы

Хроматографическая капиллярная колонка из кварцевого стекла с внутренним диаметром 0,32 мм длиной 30 м и толщиной пленки 1,8 мкм

 

Редуктор кислородный

ТУ 3645-032-00220531-97

Сушильный шкаф, обеспечивающий нагрев до 150 °С с погрешностью ±5 °С

ТУ 16.531.743-83

Центрифуга лабораторная медицинская с частотой вращения от 1000 до 8000 об./мин

ГОСТ 12.2.025-76

Азот газообразный

ГОСТ 9293-74

Водород технический

ГОСТ 3022-80

Бумага фильтровальная лабораторная

 

Пробирки вакуумные для забора крови с напылением гепарина вместимостью 6 см3

 

Пробирки из полипропилена конические градуированные на 15 см3, ТС 15А

 

Примечание. Допускается использование вспомогательных устройств и материалов аналогичного назначения, технические характеристики которых не уступают указанным.

6. Требования безопасности и охраны окружающей среды

6.1. При выполнении работ необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76.

6.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.

6.3. При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. При работе с сосудами, работающими под давлением, необходимо соблюдать правила их устройства и безопасной эксплуатации в соответствии с ПБ 03-576-03.

6.5. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать допустимых значений по ГОСТ 12.1.005-88, ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.

6.6. Организуют обучение работающих безопасности труда по ГОСТ 12.0.004-90.

6.7. При работе с биологическими средами соблюдают санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения работ на газовом хроматографе.

8. Условия измерений

При выполнении измерений в лаборатории соблюдают следующие условия:

- температура окружающего воздуха (20 ± 5) °С;

- атмосферное давление от 84,0 до 106,7 кПа (630 - 800 мм рт. ст.);

- относительная влажность воздуха от 30 до 80 %;

- напряжение в сети (220 ± 10) В;

- частота переменного тока (50 ± 10) Гц.

Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

При подготовке к выполнению измерений проводят следующие работы:

- подготовка стеклянной посуды;

- подготовка хроматографической системы;

- приготовление растворов для градуировки;

- построение градуировочной характеристики;

- отбор проб.

9.1. Подготовка посуды

В термостойкий стакан вместимостью 1 дм3 помещают 25 г калия двухромовокислого, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 дм3 концентрированной серной кислоты.

Используемую посуду необходимо замочить в свежеприготовленном 3 %-м растворе бихромата калия в серной кислоте, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть дистиллированной водой и высушить в сушильном шкафу при температуре 105 °С.

9.2. Подготовка хроматографической системы

Подготовку хроматографа к работе осуществляют в соответствии с

инструкцией по эксплуатации хроматографа.

9.2.1. Подготовка хроматографической колонки.

Хроматографическую колонку перед эксплуатацией устанавливают в хроматограф и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (азота) с расходом 4 см3/мин при температуре 240 °С в течение 2 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору и проверяют стабильность нулевой линии при рабочей температуре термостата колонок. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.

9.2.2. Устанавливают режим работы газового хроматографа в соответствии со следующими условиями:

- температурный режим термостата колонки: 135 °С с выдержкой 10 мин, подъём со скоростью 10 °С/мин до 250 °С;

- режим испарителя: температура 260 °С;

- режим детектора: температура 280 °С;

- режим расхода газа-носителя (азота): 20 см3/мин;

- время удерживания:

°2,4-дихлорфенола: 7,08 ± 0,05 мин;

°2,4,6-трихлорфенола: 14,08 ± 0,02.

Записывают нулевую линию при установленных режимных параметрах. При отсутствии флуктуации приступают к работе.

9.3. Приготовление растворов для градуировки

9.3.1. Приготовление исходного раствора 2,4-дихлорфенола. Используется готовый стандартный образец 2,4-дихлорфенола высокой чистоты ГСО 7198-95. Масса ГСО в ампуле составляет не менее 0,1 г. В мерной пробирке объемом 10 см3 взвешивают 5 мг сухого вещества 2,4-дихлорфенола и добавляют пипеткой 10 см3 метанола. Массовая концентрация 2,4-дихлорфенола в исходном растворе составляет 500 мкг/см3. Срок хранения раствора в течение 30 дней.

9.3.2. Приготовление рабочего раствора 2,4-дихлорфенола. В мерную пробирку объемом 2 см3, содержащую толуол в объеме 0,5 см3, вводят дозатором 0,5 см3 исходного раствора 2,4-дихлорфенола. Массовая концентрация 2,4-дихлорфенола в рабочем растворе для градуировки составляет 0,25 мг/см3. Срок хранения раствора 5 часов.

9.3.3. Приготовление исходного раствора 2,4,6-трихлорфенола. Используется готовый стандартный образец 2,4,6-трихлорфенола высокой чистоты ГСО 7103-94. Масса ГСО в ампуле составляет не менее 0,1 г. В мерную колбу объемом 25 см3, вносят навеску 2,4,6-трихлорфенола массой 0,0221 г и заполняют колбу до метки толуолом. Массовая концентрация 2,4,6-трихлорфенола в исходном растворе составляет 0,884 мг/см3. Срок хранения раствора в течение 30 дней.

9.3.4. Приготовление рабочего раствора 2,4,6-трихлорфенола. В мерную пробирку объемом 2 см3, содержащую толуол в объеме 0,5 см3, вводят дозатором 0,5 см3 исходного раствора 2,4,6-трихлорфенола. Массовая концентрация 2,4,6-трихлорфенола в рабочем растворе для градуировки составляет 0,442 мг/см3. Срок хранения раствора 5 часов.

9.3.5. Приготовление 10 %-го раствора щавелевой кислоты. 10 г щавелевой кислоты растворяют в небольшом количестве бидистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу на 100 см3 и заполняют колбу до метки водой.

9.3.6. Приготовление раствора серной кислоты (1:3). В термостойкий химический стакан помещают 60 см3 бидистиллированной воды, при непрерывном помешивании приливают 20 см3 концентрированной серной кислоты. Раствор охлаждают. Срок хранения неограничен.

9.3.7. Приготовление 10 %-го раствора сернисто-кислого натрия. Растворяют 10 г сернисто-кислого натрия в небольшом количестве бидистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу на 100 см3 и заполняют колбу до метки водой. Срок хранения 1 месяц.

9.3.8. Приготовление раствора бромирующего реактива. Растворяют 20 г бромистого калия в небольшом количестве бидистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу на 100 см3 и заполняют колбу до метки водой. К полученному раствору приливают 0,5 см3 брома. Раствор хранят в темной склянке. Срок хранения 1 месяц.

9.3.9. Приготовление растворов 2,4-дихлорфенола для градуировки. В пробирку объемом 13,0 см3, содержащую 5,0 см3 бидистиллированной воды, вводят микрошприцем различные объемы рабочих растворов 2,4-дихлорфенола для градуировки согласно табл. 2. Каждая серия состоит из 5 растворов для градуировки.

Таблица 2

Растворы для установления градуировочной характеристики
при определении концентраций 2,4-дихлорфенола

Номер рабочего раствора для градуировки

1

2

3

4

5

Объем рабочего раствора (с = 0,25 мг/см3), мм3

1

2

4

8

16

Массовая концентрация 2,4-дихлорфенола, мг/дм3

0,050

0,100

0,200

0,400

0,800

9.3.10. Приготовление растворов 2,4,6-трихлорфенола для градуировки. В пробирку объемом 13,0 см3, содержащую 5,0 см3 бидистилированной воды, вводят дозатором различные объемы рабочих растворов 2,4,6-трихлорфенола для градуировки согласно табл. 3. Каждая серия состоит из 5 растворов для градуировки.

Таблица 3

Растворы для установления градуировочной характеристики
при определении концентраций 2,4,6-трихлорфенола

Номер рабочего раствора для градуировки

1

2

3

4

5

Объем рабочего раствора (с = 0,442 мг/см3), мм3

0,6

1

2

6

10

Массовая концентрация 2,4,6-трихлорфенола, мг/дм3

0,053

0,088

0,117

0,530

0,884

9.4. Построение градуировочной характеристики

Перед приготовлением градуировочных растворов необходимо удостовериться, что применяемая кровь не содержит 2,4-дихлорфенол и 2,4,6-трихлорфенол.

Градуировочные характеристики устанавливают на градуировочных растворах 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола методом абсолютной градуировки. Приготовленные растворы хроматографируют на капиллярной колонке не менее 5 раз. На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам измерений по 5 концентрациям для градуировки строят градуировочную характеристику. Она выражает зависимость площади пика исследуемых веществ на хроматограмме (мВ - при автоматическом обсчете с использованием программно-аппаратного комплекса) от содержания (мг/дм3).

2,4-дихлорфенол. В пробирку объемом 13,0 см3 помещают 5,0 см3 бидистиллированной воды и градуировочный раствор 2,4-дихлорфенола (табл. 2). Затем добавляют 2,5 см3 толуола и проводят экстракционное концентрирование в течение 5 мин. К полученному экстракту добавляют раствор бромирующего реактива V = 2 см3 и 0,4 см3 разбавленной серной кислоты (1:3) и бромируют в течение 5 мин. После завершения бромирования избыток брома нейтрализуют 0,6 см3 раствора сернистокислого натрия. Для отделения органического растворителя (толуол) экстракт центрифугируют в течение 2 - 3 мин при 8000 об./мин и затем сушат сульфатом натрия массой 0,5 г.

Превращение бромпроизводного в эфиры осуществляют путем ацетилирования с помощью трифторуксусного ангидрида (V = 0,1 см3) в среде пиридина (V = 0,1 см3) в органическом растворителе в течение 5 мин.

Полученный эфир (трифторацетата 2,4-дихлорфенол) в объеме 1 мм3 анализируют методом ГХ/ЭЗД. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора. На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику.

2,4,6-трихлорфенол. В пробирку объемом 13,0 см3 помещают 5,0 см3 бидистиллированной воды и градуировочный раствор 2,4,6-трихлорфенола (табл. 3). Затем добавляют 2,5 см3 толуола и проводят экстракционное концентрирование в течение 5 мин.

Полученный экстракт центрифугируют в течение 2-3 мин при 8000 об./мин. и затем сушат сульфатом натрия массой 0,5 г. Превращение 2,4,6-трихлорфенола в простые эфиры осуществляют путем ацетилирования с помощью трифторуксусного ангидрида (V = 0,1 см3) в среде пиридина (V = 0,1 см3) в органическом растворителе в течение 5 мин.

Полученный эфир (2,4,6-трихлорфенилтрифторацетат) в объеме 1 мм3 анализируют методом ГХ/ЭЗД. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора. На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику.

Градуировку проводят 1 раз в месяц и при смене реактивов.

9.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:

|Cm - C| ≤ 0,10C, где

(1)

С - заданная массовая концентрация 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в градуировочном растворе;

Cm - результат измерения массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в образце для градуировки.

При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики.

9.6. Отбор проб

Отбор проб венозной крови объемом не менее 10 см3 производят в одноразовый шприц, оттуда переносят в пластмассовые пробирки с антикоагулянтом и закручивающимися крышками (использование резиновых крышек недопустимо). В качестве антикоагулянта используется гепарин (из расчета на 5 см3 крови - 0,05 см3 гепарина с концентрацией 5000 ЕД/см3). Анализ крови проводят в течение суток. Возможно хранение пробы крови в морозильной камере не более пяти дней.

10. Выполнение измерений

2,4-дихлорфенол. Анализируемую пробу крови V = 5 см3 помещают в пробирку вместимостью 13,0 см , приливают 3,0 см3 бидистиллированной воды, 1 см3 10 %-го раствора щавелевой кислоты и 2,5 см3 толуола и проводят экстракционное концентрирование в течение 5 мин. К полученному экстракту добавляют 2 см3 раствора бромирующего реактива и 0,4 см3 разбавленной (1:3) серной кислоты и бромируют в течение 5 мин. После завершения бромирования избыток брома нейтрализуют 0,6 см3 раствора сернисто-кислого натрия.

Для отделения органического растворителя (толуол) экстракт центрифугируют в течении 2 - 3 мин при 8000 об./мин и затем сушат сульфатом натрия массой 0,5 г.

Превращение бромпроизводного в простые эфиры осуществляют путем ацетилирования с помощью трифторуксусного ангидрида (0,1 см3) в среде пиридина (0,1 см3) в органическом растворителе в течение 5 мин.

Полученный эфир (трифторацетата 2,4-дихлорфенол) в объеме 1 мм3 анализируют и проводят количественное определение анализируемого соединения в подготовленной пробе. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб крови. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 9.4).

2,4,6-трихлорфенол. Анализируемую пробу крови - 5 см3 помещают в пробирку вместимостью 13,0 см3, приливают 3,0 см3 бидистиллированной воды, 1 см3 10 %-го раствора щавелевой кислоты и проводят экстракционное концентрирование 2,5 см3 толуола в течение 5 мин.

Полученный экстракт цетрифугируют в течение 2 - 3 мин при 8000 об./мин и затем сушат сульфатом натрия массой 0,5 г. Превращение 2,4,6-трихлорфенола в простые эфиры осуществляют путем ацетилирования с помощью трифторуксусного ангидрида (0,1 см3) в среде пиридина (0,1 см3) в органическом растворителе в течение 5 мин.

Полученный эфир (2,4,6-трихлорфенилтрифторацетат) в объеме 1 мм3 анализируют и проводят количественное определение анализируемого соединения в подготовленной пробе. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб крови. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 9.4).

11. Обработка результатов измерений

11.1. На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют массовую концентрацию 2,4-дихлорфенола (С, мг/дм3) и 2,4,6-трихлорфенола (С, мг/дм3) в крови.

11.2. За окончательный результат измерения принимают результат среднего арифметического значения двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости C1, С2 (параллельных определений), для которых выполняется условие:

(2)

r - предел повторяемости. Значения предела повторяемости приведены в табл. 4.

При невыполнении условия (2) получают дополнительно еще два результата измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений (C1, С2, С3, С4), полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие:

(3)

CR0,95(4) - критический диапазон. Значения критического диапазона приведены в табл. 4;

Сmax,4 - наибольший результат измерений, полученный в условиях повторяемости;

Cmin,4 - наименьший результат измерений, полученный в условиях повторяемости.

При невыполнении условия (3) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений).

Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условий (1) и (2).

Таблица 4

Значения пределов повторяемости, воспроизводимости и критического
диапазона при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений, мг/дм3

Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в условиях повторяемости), r, %

Критический диапазон (относительное значение допускаемого расхождения между наибольшим и наименьшим из четырех результатов измерений, полученных в одной лаборатории в условиях повторяемости), СR0,95(4),%

Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R,%

2,4-дихлорфенол

От 0,05 до 0,8 вкл.

17

23

34

2,4,6-трихлорфенол

От 0,05 до 0,9 вкл.

14

19

31

12. Оформление результатов измерений

Результат измерений представляют в виде  мг/дм3, где  - результат измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, полученный в соответствии с процедурами раздела 9.4, мг/дм3;

Δ - абсолютная характеристика погрешности измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, мг/дм3 при Р = 0,95, вычисляемое по формуле:

где δ - относительное значение характеристики погрешности измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, %.

13. Процедуры обеспечения достоверности измерений

13.1. Обеспечение достоверности измерений в пределах лаборатории организуют и проводят путем проведения оперативного контроля процедуры измерений и контроля стабильности результатов измерений в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6 и РМГ 76.

Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.

13.2. Контроль процедуры измерений с использованием образцов для контроля.

Оперативный контроль процедуры измерений с использованием метода добавок проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры Кк с нормативом контроля К.

Результат контрольной процедуры Кк рассчитывают по формуле:

 - результат измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1);

 - результат измерений массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1);

Сд - величина добавки.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

 - значения характеристики погрешности результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно.

Примечание. Допустимо характеристику погрешности результатов измерений при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражения: Δл = 0,84Δ с последующим уточнением по мере накопления информации в процессе контроля стабильности результатов измерений.

Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:

При невыполнении условия (4) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (4) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности.

Образцами для проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности, являются образцы крови с внесенными в них добавками аттестованных растворов 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, подготовленных в соответствии с пп. 9.3.1 - 9.3.5 и 9.3.10.

Проверку приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности (в пределах одной лаборатории, разными операторами, в разное время), проводят по результатам измерений массовых концентраций 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола в образцах крови с одинаковым содержанием 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола.

Результаты измерений признают приемлемыми при выполнении условия:

(5)

С1 и С2 - результаты измерений массовых концентраций 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, полученные в условиях внутрилабораторной прецизионности, т.е. в одной лаборатории в разное время, разными операторами;

Rл - предел внутрилабораторной прецизионности, значения предела внутрилабораторной прецизионности приведены в табл. 5.

При невыполнении условия (5) процедуру повторяют. При повторном превышении предела внутрилабораторной прецизионности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

Таблица 5

Значения предела внутрилабораторной прецизионности
при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений, мг/дм3

Предел внутрилабораторной прецизионности (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в разное время, разными операторами), Rл, %

 

2,4-дихлорфенол

От 0,05 до 0,80 вкл.

22

 

2,4,6-трихлорфенол

От 0,05 до 0,9 вкл.

20

13.4. Проверка приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях воспроизводимости.

Образцами для проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях воспроизводимости, являются образцы крови с внесенными в них добавками аттестованного раствора 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола, подготовленные в соответствии с пп. 9.3.1 - 9.3.5 и 9.3.10.

Проверку приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях воспроизводимости, проводят по результатам измерений массовых концентраций 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола из образцов крови (специально подготовленные образцы крови с внесенными добавками аттестованного раствора 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола) с одинаковым содержанием 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола.

Результаты измерений признают приемлемыми при выполнении условия:

(6)

С1 и С2 - результаты измерений массовых концентраций 2,4-дихлорфенола и 2,4,6-трихлорфенола;

R - предел воспроизводимости, значения предела воспроизводимости приведены в табл. 4.

При невыполнении условия (6) процедуру повторяют. При повторном превышении предела воспроизводимости выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.5. Оперативный контроль процедуры измерений, а также реализуемые процедуры контроля стабильности результатов выполняемых измерений приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.

Список нормативно-технических документов

1. ГОСТ Р 51652-2000 «Спирт этиловый ректифицированный».

2. ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».

3. ГОСТ 12.1.004-91 «ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования».

4. ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».

5. ОСТ 12.1.007-76 «ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».

6. ГОСТ 12.1.019-09 «ССБТ. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

7. ГОСТ 12.4.009-83 «ССБТ. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».

8. ГОСТ 195-77 «Реактивы. Натрий сернисто-кислый. Технические условия».

9. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки».

10. ГОСТ 4109-79 «Реактивы. Бром. Технические условия».

11. ГОСТ 4160-74 «Реактивы. Калий бромистый. Технические условия».

12. ГОСТ 4220-75 «Реактивы. Калий двухромовокислый. Технические условия».

13. ГОСТ 7328-01 «Гири. Общие технические условия».

14. ГОСТ 9293-74 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».

15. ГОСТ 12026-76 «Бумага фильтровальная лабораторная».

16. ГОСТ 13647-78 «Реактивы. Пиридин. Технические условия».

17. ГОСТ 14262-78 «Кислота серная особой чистоты. Технические условия».

18. ГОСТ 22180-76 «Реактивы. Кислота щавелевая. Технические условия».

19. СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

20. ГОСТ Р 53228-08 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. метрологические и технические требования. Испытания».

21. ГОСТ 28311-89 «Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний».

22. ГОСТ 28498-90 «Термометр жидкостной стеклянный. Общие технические требования. Методы испытаний».

23. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».

24. ГОСТ 52501-05 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».

25. РМГ 76-04 «Государственная система обеспечения единства измерений. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».

26. ТУ 25-11.1592-81 «Бидистиллятор стеклянный типа БС».

27. Система очистки воды Milli-QIntegral.

28. ТУ 25-11.1630-84 «Шкаф вытяжной химический».

29. ТУ 3645-032-00220531-97 «Редуктор кислородный. Технические условия».

Примечание. При использовании настоящей методики измерений целесообразно проверить действие ссылочных стандартов на территории Российской Федерации по соответствующему указателю стандартов, составленному на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный документ заменен (изменен), то при пользовании настоящей методикой измерений, следует руководствоваться замененным (измененным) стандартом. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

Методические указания разработаны ФБУН «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» (авторы: Т.С. Уланова, Н.В. Зайцева, Т.В. Нурисламова, Н.А. Попова, Г.И. Терентьев).

178
Мне нравится
Комментировать Добавить в закладки

Комментарии могут оставлять только зарегистрированные пользователи.

Пожалуйста зарегистрируйтесь или авторизуйтесь на сайте.