4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение фосфатов в пищевых
продуктах и продовольственном сырье

Методические указания

МУК 4.1.3217-14

Москва 2014

1. Разработаны: ФГБУН «НИИ питания» (В.А. Тутельян, Л.В. Шевякова); ФБУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора (В.Г. Сенникова, В.В. Мордвинова, Е.С. Шальнова, А.А. Гарбузова, В.Н. Малхожева); ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Минздрава России (М.С. Орлов).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 22 августа 2014 г.

3. Аттестованы ФБУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора в соответствии с ГОСТ Р 8.563-2009, свидетельство об аттестации № РОСС RU.0001.310430/0203.14.07.14 от 14.07.2014.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение фосфатов в пищевых продуктах и
продовольственном сырье

Настоящие методические указания распространяются на сырье и продукты пищевые и устанавливают метод определения фосфора с последующим пересчетом на фосфаты (Р₂О₅).

Методические указания носят рекомендательный характер.

1. Метод измерений

Метод заключается в сухой минерализации пробы, растворении золы, проведении цветной реакции с молибден-ванадиевым реактивом и измерении интенсивности желтого окрашивания раствора на спектрофотометре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при длине волны λ_max = 436 нм или с помощью фотоэлектроколориметра в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 20 мм со светофильтром λ_max = 440,5 нм.

Присутствие макро- и микроэлементов не мешает определению.

2. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы

2.1. Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

2.2. Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

2.3. Вспомогательные устройства, материалы

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

3. Требования техники безопасности

3.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на фотоэлектроколориметр и спектрофотометр.

3.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда -по ГОСТ 12.0.004-90.

4. Требования к квалификации персонала

К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение, освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на фотоколориметре, спектрофотометре.

5. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на фотоколориметре, спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к приборам.

6. Метод отбора и подготовки проб

6.1. Отбор проб проводят в соответствии с ГОСТ 26313.

6.2. Подготовка проб проводится способом сухой минерализации в соответствии с ГОСТ 26929-94.

Рекомендуемые величины массы навески указаны в табл. 1.

Таблица 1

Масса навески продукта

7. Подготовка к испытанию

7.1. Приготовление раствора соляной кислоты
массовой концентрации 25 г/дм³

В мерную колбу вместимостью 1 дм³ вносят 67,4 см³ концентрированной соляной кислоты и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.2. Приготовление основного стандартного раствора фосфора массовой концентрации 1 г/дм³

Раствор готовят из фосфорно-кислого однозамещенного калия, предварительно высушенного до постоянной массы в сушильном шкафу при 104 °С или в эксикаторе над концентрированной серной кислотой. Навеску 4,3930 г KН₂РO₄, взвешенную с погрешностью не более 0,0001 г, растворяют в 1 дм³ дистиллированной воды.

7.3. Приготовление раствора аммония ванадиево-кислого массовой
концентрации 2,5 г/дм³ (раствор А)

В 500 см³ кипящей воды растворяют 2,5 г ванадиево-кислого аммония. После охлаждения раствора в него вносят 20 см³ концентрированной азотной кислоты. Объем раствора доводят до 1 дм³ дистиллированной водой, перемешивают.

7.4. Приготовление раствора аммония молибденово-кислого
массовой концентрации 100 г/дм³ (раствор Б)

В 500 см³ воды, подогретой до 50 °С, растворяют 100 г молибденово-кислого аммония. Раствор охлаждают до комнатной температуры, затем осторожно при перемешивании стеклянной палочкой вносят 100 см³ концентрированной серной кислоты. Перемешивание продолжают до достижения раствором комнатной температуры, доводят его объем до 1 дм³ дистиллированной водой, перемешивают.

7.5. Приготовление молибден-ванадиевого раствора

Реактив готовят смешиванием равных объемов растворов А и Б. Полученный реактив годен в течение месяца.

7.6. Приготовление контрольного раствора и
построение градуировочного графика

7.6.1. В мерную колбу вместимостью 50 см³ вносят 5 см³ основного стандартного раствора фосфора массовой концентрации 1 г/дм³, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают. Рабочий раствор готовят в день построения градуировочного графика.

7.6.2. При проведении испытаний на спектрофотометре в мерные колбы вместимостью 50 см³ вносят 1, 2, 3, 4, 5, 6 см³ рабочего стандартного раствора фосфора, приготовленного по п. 7.6.1, что соответствует 100, 200, 300, 400, 500, 600 мкг фосфора, добавляют воду до 10 см³. В каждую колбу вносят по 10 см³ молибден-ванадиевого раствора, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают.

При проведении изменений на фотоэлектроколориметре в мерные колбы вместимостью 50 см³ вносят 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0 см³ рабочего стандартного раствора фосфора, приготовленного по п. 7.6.1, что соответствует 50, 100, 150, 200, 250, 300 мкг фосфора, и далее проводят испытания по п. 7.6.2.

Растворы выдерживают 30 мин при температуре 20 - 30 °С и измеряют оптическую плотность по отношению к контрольному раствору, который готовят по п. 7.6.2, но без добавления раствора фосфора.

Измерения проводят на спектрофотометре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при λ_max = 436 нм или на фотоэлектроколориметре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 20 мм со светофильтром с λ_max = 440,5 нм.

7.6.3. Построение градуировочного графика.

Градуировочный график строят, откладывая по оси абсцисс значения концентрации фосфора в мкг, по оси ординат - соответствующее им значение оптической плотности.

8. Проведение испытания

8.1. Золу, полученную по п. 6.2, растворяют в 5 см³ раствора соляной кислоты (1:1) при нагревании на кипящей водяной бане и раствор упаривают до влажных солей, к осадку в чашке добавляют 20 см³ раствора соляной кислоты массовой концентрации 25 г/дм³ и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 - 10 мин, После охлаждения содержимое чашки количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см³ и доводят до метки раствором соляной кислоты массовой концентрации 25 г/дм³.

Аналогично готовят контрольную пробу, используя те же объемы растворов и последовательность их добавления, что и при растворении золы.

Раствор перемешивают.

8.2. В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают точное количество (от 1 до 4 см³) раствора, приготовленного по п. 8.1, добавляют воду до 10 см³, 10 см³ молибден-ванадиевого реактива, доводят объем до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают.

Оптическую плотность раствора измеряют по п. 7.6.2 по сравнению с контрольным раствором.

8.3. По полученному значению оптической плотности по градуировочному графику находят массу фосфора в мкг.

9. Обработка результатов

9.1. Массовую долю фосфора С, мг/100 г продукта вычисляют по формуле:

m - масса фосфора, найденная по градуировочному графику, мкг;

V - общий объем минерализата, см³;

V₁ - аликвотный объем минерализата, взятый для испытания, см³;

10 - коэффициент пересчета в мг/100 г;

М - навеска образца, г.

9.2. Массовую долю фосфатов (Р₂O₅) C₁ мг/100 г продукта вычисляют по формуле:

С - массовая доля фосфора, найденная по п. 9.1;

2,29 - коэффициент пересчета фосфора на фосфаты (Р₂O₅).

10. Оформление результатов измерений

Результаты количественного анализа в протоколах анализов представляют в виде:

Δ = δ⋅0,01⋅С₁ значение показателя точности по табл. 2.

Окончательный результат округляют до первого десятичного знака.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать Р = 0,95.

11. Приписанные характеристики погрешности
измерений и ее составляющих

11.1. Настоящая методика обеспечивает получение результатов анализа с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2.

Таблица 2

Значения характеристик погрешности и ее составляющих
при доверительной вероятности Р = 0,95

12. Контроль точности результатов измерений

12.1. Обеспечение достоверности измерений в пределах лаборатории организуют и проводят путем проведения проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях повторяемости, внутри-лабораторной прецизионности, воспроизводимости, оперативного контроля процедуры измерений и контроля стабильности результатов измерений в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6.

12.2. Проверка приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности.

Проверку приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности (в пределах одной лаборатории, разными операторами, в разное время), проводят по результатам измерений массовой концентрации определяемого элемента в образцах с одинаковым содержанием элемента.

Результаты измерений признают приемлемыми при выполнении условия:

 - результаты измерений массовой концентрации определяемого элемента, полученные в условиях внутрилабораторной прецизионности, т.е. в одной лаборатории в разное время, разными операторами, мг/100 г;

R - предел внутрилабораторной прецизионности, %.

Значения предела внутрилабораторной прецизионности приведены в табл. 3.

Таблица 3

Значения пределов повторяемости, внутрилабораторной прецизионности
при доверительной вероятности Р = 0,95

Если условие (3) не выполнено, процедуру повторяют. При повторном превышении предела внутрилабораторной прецизионности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

12.3. Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений с использованием метода добавок.

Образцами для контроля процедуры измерений являются образцы для исследования с внесенными в них добавками раствора определяемого элемента, подготовленные в соответствии с п. 7.6.2.

Оперативный контроль процедуры измерений проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры K_k с нормативом контроля K.

Результат контрольной процедуры K_k рассчитывают по формуле:

 - результат измерений массовой концентрации элемента в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, мг/100 г;

 - результат измерений массовой концентрации элемента в исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, мг/100 г;

С_∂ - величина введенной добавки, мг/100 г.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

,  - значения характеристики погрешности результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации элемента в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно, рассчитанные по формулам:

Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:

При невыполнении условия (8) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (8) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.