На главную
На главную

Определение остаточных количеств тиаклоприда в зеленой массе, зерне и масле кукурузы, в ботве и корнеплодах сахарной свеклы, зеленой массе и зерне гороха, в плодах томатов и томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств тиаклоприда в зеленой массе кукурузы, зеленой массе гороха и в ботве сахарной свеклы в диапазоне 0,1—1,0 мг/кг; в зерне и масле кукурузы в диапазоне 0,02 — 0,2 мг/кг; в зерне гороха в диапазоне 0,05—0,5 мг/кг; в корнеплодах сахарной свеклы в диапазоне 0,01— 0,1 мг/кг; в плодах томатов и томатном соке в диапазоне 0,25 — 2,5 мг/кг

Обозначение: МУК 4.1.3209-14
Название рус.: Определение остаточных количеств тиаклоприда в зеленой массе, зерне и масле кукурузы, в ботве и корнеплодах сахарной свеклы, зеленой массе и зерне гороха, в плодах томатов и томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Статус: введен впервые
Дата актуализации текста: 05.05.2017
Дата добавления в базу: 12.02.2016
Дата введения в действие: 30.07.2014
Утвержден: 30.07.2014 Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Опубликован: Роспотребнадзор (2015 г. )
Ссылки для скачивания:

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
тиаклоприда в зеленой массе, зерне и
масле кукурузы, в ботве и корнеплодах
сахарной свеклы, зеленой массе и зерне
гороха, в плодах томатов и томатном соке
методом высокоэффективной жидкостной
хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3209-14

Москва 2015

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов», Минсельхоза России (В.А. Калинин, Е.В. Довгилевич, А.В. Довгилевич, Е.Н. Тестова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол № 1 от 26 июня 2014 г.).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 30 июля 2014 г.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Погрешность измерения. 3

2. Метод измерений. 4

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы.. 5

3.1. Средства измерений. 5

3.2. Реактивы.. 5

3.3. Вспомогательные устройства и материалы.. 6

4. Требования безопасности. 6

5. Требования к квалификации операторов. 7

6. Условия измерений. 7

7. Подготовка к выполнению определений. 7

7.1. Подготовка органических растворителей. 7

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа. 8

7.3. Установление градуировочной характеристики. 9

7.4. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения тиаклоприда на ней. 9

7.5. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения тиаклоприда на них. 9

7.6. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии. 10

8. Отбор проб и хранение. 10

9. Выполнение определения. 11

9.1. Зеленая масса гороха, зеленая масса кукурузы и ботва сахарной свеклы.. 11

9.2. Корнеплоды сахарной свеклы.. 11

9.3. Зерно гороха и кукурузы.. 12

9.4. Плоды томатов. 12

9.5. Томатный сок. 12

9.6. Масло кукурузы.. 13

9.7. Условия хроматографирования. 13

10. Обработка результатов. 13

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений. 14

12. Оформление результатов. 14

13. Контроль качества результатов измерений. 14

Приложение 1. 16

Полнота извлечения тиаклоприда из зеленой массы и зерна гороха, кукурузы, масла кукурузы, из ботвы и корнеплодов сахарной свеклы, плодов томатов, томатного сока (5 повторностей для каждой концентрации, Р = 0,95) 16

 

 

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

______________________ А.Ю. Попова

30 июля 2014 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств тиаклоприда
в зеленой массе, зерне и масле кукурузы, в ботве и
корнеплодах сахарной свеклы, зеленой массе и зерне
гороха, в плодах томатов и томатном соке методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3209-14

Свидетельство о метрологической аттестации № 01.00282-2008/0189.19.12.13 от 19.12.2013.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств тиаклоприда в зеленой массе кукурузы, зеленой массе гороха и в ботве сахарной свеклы в диапазоне 0,1 - 1,0 мг/кг; в зерне и масле кукурузы в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг; в зерне гороха в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг; в корнеплодах сахарной свеклы в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг; в плодах томатов и томатном соке в диапазоне 0,25 - 2,5 мг/кг. Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: тиаклоприд.

Название действующего вещества по ИЮПАК: (Z)-3-(6-хлор-3-пиридилметил)-1,3-тиазолидин-2-илиденцианамид.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C10H9ClN4S.

Молекулярная масса: 252,7.

Цвет, запах: кристаллическое вещество желтоватого цвета без запаха.

Температура плавления: 136 °С.

Давление паров: 3,0×10-7 мПа (при 20 °С).

Коэффициент распределения октанол- вода: KowlogP = 1,26 (при 22 °С).

Растворимость в воде: 185 мг/дм3 (при 20 °С).

Растворимость в органических растворителях (г/дм3, при 20 °С): ацетон - 64, ацетонитрил - более 52, дихлорметан - 160, n-гексан - менее 0,1, диметилсульфоксид - 150.

Вещество устойчиво к гидролизу при pH от 5 до 9 (при 25 °С) и относительно стабильно на свету - ДТ50 составляет более 100 дней.

Тиаклоприд относительно слабо передвигается по почвенному профилю и достаточно быстро разрушается в почве в аэробных условиях (ДТ50 = 7 - 21 день).

Краткая токсикологическая характеристика. Тиаклоприд относится к умеренно опасным по острой оральной (ЛД50 для крыс 396 - 836 мг/кг), к мало опасным по дермальной (ЛД50 для крыс более 2000 мг/кг) токсичности, к опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 ч) от 1223 до 2535 мг/м3). Не вызывает раздражения слизистых оболочек глаз и кожи у кроликов. Тиаклоприд практически нетоксичен для пчел, птиц, дождевых червей и водорослей.

Область применения. Тиаклоприд - инсектицид нервно-паралитического действия, эффективно уничтожает тлю, цветоеда, минеров, трипсов, плодожорку, колорадского жука на хлопчатнике, табаке, картофеле, рисе, овощных культурах, цитрусовых, косточковых и семечковых плодовых в течение вегетационного периода. Применяется в России в качестве инсектицида для обработки яблоневых садов при норме расхода до 200 г д.в./га и одно- и двукратной обработке за сезон.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,01 мг/кг массы человека; ПДК в воде водоемов - 0,004 мг/дм3; ОДК в почве - 0,07 мг/кг; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,4 мг/м3; в атмосферном воздухе - 0,002 мг/м3; МДУ в продукции (мг/кг): виноград, картофель - 0,02; плодовые (семечковые) - 0,7; рапс (семена) - 0,5; рапс (масло) - 0,3.

МДУ тиаклоприда (в импортируемой продукции, мг/кг): зерно и масло кукурузы - 0,05; горох - 0,1; сахарная свекла - 0,02; томаты - 0,5 мг/кг.

1. Погрешность измерения

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические параметры для тиаклоприда

Анализируемый объект

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг

Показатель точности (граница относительной погрешности), ±δ, %, Р = 0,95

Стандартное отклонение повторяемости, σr, %

Предел повторяемости, σR, %

Предел воспроизводимости, R, %

Зеленая масса кукурузы

0,1 - 1,0 вкл.

25

2,02

5,62

7,86

Зерно кукурузы

0,02 - 0,1 вкл.

50

1,01

2,81

3,93

0,1 - 0,2 вкл.

25

0,98

2,72

3,82

Масло кукурузы

0,02 - 0,1 вкл.

50

0,95

2,64

3,70

0,1 - 0,2 вкл.

25

1,36

3,78

5,29

Зеленая масса гороха

0,1 - 1,0 вкл.

25

1,50

4,17

5,84

Зерно гороха

0,05 - 0,1 вкл.

50

1,67

4,64

6,50

0,1 - 0,5 вкл.

25

0,99

2,75

3,85

Ботва сахарной свеклы

0,1 - 1,0 вкл.

25

1,88

5,23

7,32

Корнеплоды сахарной свеклы

0,01 - 0,1 вкл.

50

1,29

3,59

5,02

Плоды томатов

0,25 - 2,5 вкл.

25

1,34

3,73

5,22

Томатный сок

0,25 - 2,5 вкл.

25

1,77

4,92

6,89

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата для тиаклоприда

Анализируемый объект

Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20

Предел обнаружения, мг/кг

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг

Полнота извлечения вещества, %

Стандартное отклонение, S, %

Доверительный интервал среднего результата, ±, %

Зеленая масса кукурузы

0,1

0,1 - 1,0

80,10

3,65

1,37

Зерно кукурузы

0,02

0,02 - 0,2

88,32

4,79

1,98

Масло кукурузы

0,02

0,02 - 0,2

89,84

1,82

0,77

Зеленая масса гороха

0,1

0,1 - 1,0

84,26

4,91

1,94

Зерно гороха

0,05

0,05 - 0,5

79,48

6,50

2,42

Ботва сахарной свеклы

0,1

0,1 - 1,0

81,50

6,03

2,30

Корнеплоды сахарной свеклы

0,01

0,01 - 0,1

82,16

4,19

1,61

Плоды томатов

0,25

0,25 - 2,5

87,64

5,16

2,12

Томатный сок

0,25

0,25 - 2,5

90,43

3,18

1,34

2. Метод измерений

Метод основан на определении тиаклоприда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием диодно-матричного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с окисью алюминия и на концентрирующих патронах № 1.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные
устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Весы аналитические класса точности по ГОСТ Р 53228-08 - специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г

 

Весы лабораторные общего назначения класса точности по ГОСТ Р 53228-08 - средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности ±0,038 г

 

Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 см3

ГОСТ 1770-74

Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 см3

ГОСТ 29227-91

рН-метр/милливольтметр с диапазоном измерения 0 … 14 pH; ±1999 мВ

 

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф жидкостный с диодно-матричным детектором, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до

80 °С и стандартным автосамплером с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм3 для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ

 

Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 см3

ГОСТ 1770-74

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Тиаклоприд, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,0 %

СAS 111988-49-9

Алюминий окись для хроматографии, ч

ТУ 6-09-3916-75

Ацетон, осч

ТУ 6-09-3513-86

Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм

ТУ 6-09-2167-84

Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости)

ГОСТ 6709-72

Гелий, очищенный

ТУ 51-940-80

n-Гексан, хч

ТУ 6-09-3818-89

Калий марганцово-кислый, чда

ГОСТ 20490-75

Кальций хлористый, ч

ТУ 6-09-4711-81

Кислота уксусная, ледяная

ГОСТ 61-75

Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции с гидрофильным слабокислым сорбентом с постоянной активностью с размером частиц 63 - 200 мкм (С) (объем - 1 см3, масса сорбента - 0,6 г) (патрон № 1)

ТУ 4215-002-05451931-94

Метилен хлористый, хч

ТУ 6-09-2662-77

Натрий серно-кислый, безводный, хч

ГОСТ 4166-76

Натрий углекислый, кислый, хч

ГОСТ 4201-79

Натрий хлористый, хч

ГОСТ 4233-77

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами

ГОСТ 25336-82

Аппарат для встряхивания проб с возвратно-поступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту

 

Банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см3

 

Ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм3

 

Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная

ГОСТ 5556-81

Воронки делительные на 250 см3

ГОСТ 25336-82

Воронки лабораторные, стеклянные

ГОСТ 25336-82

Испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм3 и с диапазоном температур от 20 до 100 °С

 

Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 см3

ГОСТ 25336-82

Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 и 4000 см3

ТС ТУ 92-891.029-91

Колонка хроматографическая стальная, длиной 150 мм, с внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18

 

Насос диафрагменный, химически стойкий на 100 %, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм3/мин

 

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С8

 

Стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100 - 500 см3

ГОСТ 25336-82

Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3

 

Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г

ТУ 6-09-1678-86

Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм

 

Шприц инъекционный многократного применения объемом 10 см3

ГОСТ 22967-90

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-91.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С, относительной влажности не более 80 % и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению определений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов № 1 и колонки с окисью алюминия для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах № 1 и колонке с окисью алюминия, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.

7.1.2. Очистка ацетона

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцово-кислый калий из расчета 1 г/дм3.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.

7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

7.1.4. Очистка хлористого метилена

Хлористый метилен промывают равным объемом 5 %-го раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 ч. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0 °С, отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ

Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил, очищенную воду и ледяную уксусную кислоту.

В плоскодонную колбу объемом 1000 см3 помещают 400 см3 ацетонитрила и 600 см3 очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 см3/мин в течение 5 мин, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.

7.2.2. Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией тиаклоприда 1,0 м г/см3.

Взвешивают 50 мг тиаклоприда в мерной колбе объемом 50 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией тиаклоприда 10,0 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 2 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией тиаклоприда 1,0 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Стандартный раствор № 3 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией тиаклоприда 0,5 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией тиаклоприда 0,2 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 50 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 5 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией тиаклоприда 0,1 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Стандартный раствор №6 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 6 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.7. Стандартные растворы с концентрацией тиаклоприда 25,0; 10,0; 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4 и 0,2 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 25,0; 10,0; 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4 и 0,2 мкг/см3 и используют эти растворы с целью внесения в контрольные образцы. Стандартные растворы для внесения в контрольные образцы хранятся в холодильнике не более 30 суток.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации тиаклоприда в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3.

В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.7. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта
и проверка хроматографического поведения тиаклоприда на ней

7.4.1. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта

В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш. и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см3 ацетонитрила.

7.4.2. Проверка хроматографического поведения тиаклоприда
на колонке с окисью алюминия

В концентратор объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора тиаклоприда в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 10 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходную колбу обмывают еще двумя порциями ацетонитрила объемом 10 см3 каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентратор объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие тиаклоприд, полноту смывания с колонки и необходимый объём элюата.

Изучение поведения тиаклоприда на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.

7.5. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки
экстрактов и проверка хроматографического поведения
тиаклоприда на них

7.5.1. Подготовка концентрирующих патронов № 1
для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, затем 10 см3 гексана. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.5.2. Проверка хроматографического поведения тиаклоприда
на концентрирующих патронах № 1

Из стандартного раствора тиаклоприда в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/см3, отбирают 1 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходный концентратор обмывают последовательно 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1,10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 и двумя порциями по 10 см3 каждая смеси гексана с ацетоном в соотношении 7:3. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие тиаклоприд, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюата.

Изучение поведения тиаклоприда на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

7.6. Подготовка и кондиционирование колонки
для жидкостной хроматографии

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °С и скорости потока подвижной фазы 0,3 см3/мин 3 - 4 ч.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ Р ИСО 6497-11 «Корма растительного происхождения. Методы отбора проб», ГОСТ Р 52647-06 «Свекла сахарная. ТУ», ГОСТ Р 52062-03 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 8808-2000 «Масло кукурузное. ТУ», ГОСТ Р 51810-01 «Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети», ГОСТ Р 52183-03 «Консервы. Соки овощные. Сок томатный. ТУ».

Отобранные пробы зерна гороха и кукурузы подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы зеленой массы кукурузы, гороха и ботвы сахарной свеклы, а также корнеплодов сахарной свеклы и плодов томатов хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С.

Пробы томатного сока, а также кукурузного масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более 5 суток.

9. Выполнение определения

9.1. Зеленая масса гороха, зеленая масса кукурузы
и ботва сахарной свеклы

9.1.1. Экстракция

Образец измельченной ботвы сахарной свеклы (зеленой массы гороха или кукурузы) массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см3 через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см3 ацетонитрила и помещая на 5 мин в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 см3 и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением
в системе несмешивающихся растворителей

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 5 см3 ацетонитрила, обмывают стенки концентратора, затем прибавляют 100 см3 дистиллированной воды, 5 г хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Тиаклоприд экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 см3, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 см3 через слой безводного сульфата натрия и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

9.1.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия

Сухой остаток, полученный по п. 9.1.2, растворяют в 10 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора, наносят на подготовленную колонку, элюат собирают в концентратор. Исходную колбу обмывают 10 см3 ацетонитрила и вносят на колонку. Элюаты объединяют и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.1.4. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1

Сухой остаток, полученный по п. 9.1.3., растворяют в 1 см3 ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят на подготовленный патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают последовательно 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1 и 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, элюаты также отбрасывают.

Тиаклоприд элюируют с патрона № 1 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 7:3, элюат собирают в концентратор объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.2. Корнеплоды сахарной свеклы

9.2.1. Экстракция

Образец измельченных корнеплодов сахарной свеклы массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см3 через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см3 ацетонитрила и помещая на 5 мин в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 см3 и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей» и п. 9.1.3 «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия».

После очистки элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.3. Зерно гороха и кукурузы

9.3.1. Экстракция

Образец измельченного зерна гороха (или зерна кукурузы) массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см3 через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см3 ацетонитрила и помещая на 5 мин в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 см3 и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей», п. 9.1.3 «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия» и п. 9.1.4 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1».

После очистки элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 5 см3 (для зерна кукурузы - в 2 см3) смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.4. Плоды томатов

9.4.1. Экстракция

Образец измельченных корнеплодов сахарной свеклы массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см3 через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см3 ацетонитрила и помещая на 5 мин в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 см3 и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей».

После очистки элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 25 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.5. Томатный сок

9.5.1. Экстракция

Навеску томатного сока массой 10 г помещают в делительную воронку объемом 250 см3, добавляют 10 см3 насыщенного раствора хлористого натрия. Тиаклоприд экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 20 см3, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (ацетонитрил) собирают в концентратор объемом 250 см3 через слой безводного сульфата натрия и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.4 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1».

После очистки элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 25 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.6. Масло кукурузы

9.6.1. Экстракция

Из пробы кукурузного масла отбирают в стакан навеску массой 10 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 см3 тремя порциями гексана объемом по 30 см3. Тиаклоприд экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 см3, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой сливают в концентратор объемом 250 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.3 «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия» и п. 9.1.4 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1».

После очистки элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.7. Условия хроматографирования

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф жидкостный с диодно-матричным детектором, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °С и стандартным автосамплером с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм3 для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая стальная, длиной 150 мм, с внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18.

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С8.

Температура колонки: 30 °С.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода в соотношении 400:600.

Длина волны: 244 нм.

Чувствительность не менее 10 mAU (миллиединиц абсорбции) на шкалу.

Объем вводимой пробы: 5 мм3.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.

10. Обработка результатов

Содержание тиаклоприда в пробе рассчитывают по формуле:

X - содержание тиаклоприда в пробе, мг/кг;

Scm - высота (площадь) пика стандарта, мм;

Snp - высота (площадь) пика образца, мм;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см3;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

m - масса анализируемого образца, г (см3);

Р - содержание тиаклоприда в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов
параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

(1)

X1, Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг или мг/дм3;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8×σr.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

 мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

 - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг».*

_________

* - 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для тиаклоприда проводят при смене основного градуировочного раствора № 1 каждые 6 месяцев, при смене основных градуировочных растворов № 2, 3, 4, 5 и 6 - каждый месяц, а также в начале и при окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание тиаклоприда в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/см3.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация тиаклоприда контрольного измерения, мкг/см3;

С - известная концентрация градуировочного раствора тиаклоприда в смеси ацетонитрила с водой, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

2,56 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (А) превышает 2,56 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов тиаклоприда, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:

 - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

Δл = ±0,84Δ, где

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

 - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

|Кк| ≤ К,

(2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

(3)

X1, X2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Приложение 1

Полнота извлечения тиаклоприда из зеленой массы и зерна
гороха, кукурузы, масла кукурузы, из ботвы и корнеплодов
сахарной свеклы, плодов томатов, томатного сока
(5 повторностей для каждой концентрации, Р = 0,95)

Среда

Внесено тиаклоприда, мг/кг

Обнаружено тиаклоприда, мг/кг

Полнота извлечения, %

Зеленая масса кукурузы

0,10

0,0835 ± 0,0012

83,5

0,20

0,1612 ± 0,0041

80,6

0,50

0,3804 ± 0,0042

76,1

1,00

0,8021 ± 0,0162

80,2

Зерно кукурузы

0,02

0,0189 ± 0,0002

94,5

0,04

0,0332 ± 0,0004

83,1

0,10

0,0875 ± 0,0010

87,5

0,20

0,1764 ± 0,0022

88,2

Масло кукурузы

0,02

0,0181 ± 0,0002

90,5

0,04

0,0360 ± 0,0004

90,0

0,10

0,0912 ± 0,0015

91,2

0,20

0,1754 ± 0,0027

87,7

Зеленая масса гороха

0,10

0,0854 ± 0,0016

85,4

0,20

0,1718 ± 0,0032

85,9

0,50

0,4399 ± 0,0037

88,0

1,00

0,7769 ± 0,0131

77,7

Зерно гороха

0,05

0,0438 ± 0,0007

86,9

0,10

0,0804 ± 0,0017

80,4

0,20

0,1548 ± 0,0016

77,4

0,50

0,3664 ± 0,0045

73,3

Ботва сахарной свеклы

0,10

0,0894 ±0,0014

89,4

0,20

0,1592 ± 0,0030

79,6

0,50

0,3949 ± 0,0057

79,0

1,00

0,7760 ± 0,0143

77,6

Корнеплоды сахарной свеклы

0,01

0,0078 ± 0,0001

78,2

0,02

0,0160 ± 0,0002

79,9

0,05

0,0431 ± 0,0007

86,2

0,10

0,0843 ± 0,0013

84,3

Плоды томатов

0,25

0,2367 ± 0,0028

94,7

0,50

0,4388 ± 0,0057

87,8

1,00

0,8437 ± 0,0089

84,4

2,50

2,0944 ± 0,0347

83,8

Томатный сок

0,25

0,2291 ± 0,0050

91,7

0,50

0,4323 ± 0,0083

86,5

1,00

0,9344 ± 0,0140

93,4

2,50

2,2540 ± 0,0196

90,2

 

97
Мне нравится
Комментировать Добавить в закладки

Комментарии могут оставлять только зарегистрированные пользователи.

Пожалуйста зарегистрируйтесь или авторизуйтесь на сайте.