4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение
остаточных количеств циантранилипрола
в воде, почве, капусте, плодах томата
и томатном соке, в луке-пере и луке-репке
методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3207-14

Москва 2015

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (В.А. Калинин, Е.В. Довгилевич, А.В. Довгилевич, Н.В. Устименко).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол № 1 от 26 июня 2014 г.).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 30 июля 2014 г.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
циантранилипрола в воде, почве, капусте, плодах
томата и томатном соке, в луке-пере и луке-репке
методом высокоэффективной жидкостной
хроматографии

Свидетельство о метрологической аттестации № 01.00282-2008/0169.27.05.13 от 27.05.2013 г.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций циантранилипрола в воде в диапазоне 0,005 - 0,05 мг/дм³ и в почве в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг, а также уровня его остаточных количеств в капусте, в плодах томата и томатном соке, в луке-репке и зеленом луке в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Циантранилипрол.

3-бромо-1-(3-хлоро-2-пиридил)-4ʹ-циано-2ʹ-метил-6ʹ-(метилкарбомоил)пиразол-5-карбоксанилид (IUPAC).

Эмпирическая формула: C₁₉H₁₄BrClN₆O₂.

Молекулярная масса: 473,72.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белое кристаллическое вещество без запаха.

Температура плавления: 224 °С.

Давление паров: 5,13×10^-15 Па (при 20 °С).

Структурная формула:

Коэффициент распределения октанол-вода (20 °С): K_owlogP = 1,97 (при pH 4); 2,02 (при pH 7) 1,74 (при pH 9)

Растворимость в воде, мг/дм³ (20 °С): 17,43 при pH 4; 12,33 при pH 7 и 5,94 при pH 9.

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, 20 °С): ацетон - 6,54: ацетонитрил - 2,45; н-гексан - 6,7×10^-5; дихлорметан - 5,05; метанол - 4,73; н-октанол - 0,79; этилацетат - 1,96.

В водных растворах период полураспада циантранилипрола (DT₅₀) при 25 °С составляет 212 дней (pH 4), 30,3 дня (pH 7) и 0,85 дня (pH 9).

Краткая токсикологическая характеристика. Циантранилипрол относится к мало опасным веществам по острой пероральной (ЛД₅₀ Для крыс и мышей составляет более 5000 мг/кг) и дермальной (ЛД₅₀ для крыс и мышей составляет более 2000 мг/кг) токсичности, но к умеренно опасным по ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ для крыс (4 часа) - более 5200 мг/м³ воздуха). Не вызывает раздражения кожи и глаз у кроликов. Не является мутагеном и канцерогеном. Не является тератогеном и эмбриотоксином для крыс и кроликов, не обладает репродуктивной токсичностью.

Область применения. Циантранилипрол - инсектицид системно-контактного действия, воздействующий на нервную систему насекомых. Усиливает высвобождение кальция из арсеналов путем активации ринидиновых рецепторов. Исчерпание кальциевых арсеналов приводит к ингибированию сокращения мышц. Рекомендуется к применению для борьбы с грызущими и сосущими насекомыми на капусте, луке, томатах.

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические параметры для циантранилипрола

Таблица 2

Полнота извлечения вещества,
стандартное отклонение, доверительный интервал
среднего результата для циантранилипрола

2. Метод измерений

Метод основан на определении циантранилипрола с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с окисью алюминия и на концентрирующих патронах № 1, 2 и 3.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные
устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-91.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С, относительной влажности не более 80 % и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению определений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия для очистки экстракта, подготовка концентрирующих патронов № 1, 2 и 3 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия и концентрирующих патронах № 1, 2 и 3, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.

7.1.2. Очистка ацетона.

Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцово-кислый калий из расчета 100 мг/дм³. Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.

7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды.

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ.

Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и воду.

В плоскодонную колбу объемом 1 дм³ помешают 450 см³ ацетонитрила, 500 см³ очищенной воды и 1 см³ муравьиной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 см³/мин в течение 5 мин, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.

7.2.2. Приготовление смеси для растворения проб.

В плоскодонную колбу объемом 100 см³ помещают 70 см³ ацетонитрила и 30 см³ очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают и используют для растворения проб и приготовления градуировочных растворов.

7.2.3. Приготовление градуировочных растворов.

7.2.3.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией циантранилипрола 100,0 мкг/см³.

Взвешивают 10 мг циантранилипрола в мерной колбе объемом 100 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике не более 2-х месяцев.

7.2.3.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией циантранилипрола 10,0 мкг/см³

Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 50 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 2-х месяцев.

7.2.3.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией циантранилипрола 1,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 7:3. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 2-х месяцев.

7.2.3.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией циантранилипрола 0,5 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 7:3. Стандартный раствор № 4 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 2-х месяцев.

7.2.3.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией циантранилипрола 0,2 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 50 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 7:3. Стандартный раствор № 5 используется для приготовления стандартных растворов и для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 2-х месяцев.

7.2.3.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией циантранилипрола 0,1 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 7:3. Стандартный раствор № 6 используется для приготовления стандартных растворов и для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 2-х месяцев.

7.2.3.7. Стандартные растворы циантранилипрола в ацетонитриле с концентрациями 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/см³ для внесения в образцы.

Из стандартного раствора № 2 методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/см³ и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы. Стандартные растворы для внесения хранят в холодильнике не более 2-х месяцев.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации циантранилипрола в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.7. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки
экстракта и проверка хроматографического поведения
циантранилипрола на ней

7.4.1. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта.

В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш. и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см³ ацетонитрила.

7.4.2. Проверка хроматографического поведения циантранилипрола на колонке с окисью алюминия.

В концентратор объемом 100 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора циантранилипрола в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см³ и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 10 см³ ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходный концентратор последовательно обмывают 10 см³ ацетонитрила, затем двумя порциями по 10 см³ каждая 0,1 %-го раствора уксусной кислоты в ацетонитриле и тремя порциями по 10 см³ 0,5 %-го раствора уксусной кислоты в ацетонитриле. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 см³ и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие циантранилипрол, полноту смывания с колонки и необходимый объём элюента.

Изучение поведения циантранилипрола на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.

7.5. Подготовка концентрирующих патронов № 3 для очистки
экстракта и проверка хроматографического поведения
циантранилипрола на них

7.5.1. Подготовка концентрирующих патронов № 3 для очистки экстракта.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон № 3 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 5 см³ ацетона и 5 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.5.2. Проверка хроматографического поведения циантранилипрола на концентрирующем патроне № 3.

Из стандартного раствора циантранилипрола в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/см³, отбирают 1 см³, помещают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 см³ гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходный концентратор обмывают 10 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 2:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие циантранилипрол, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.

Изучение поведения циантранилипрола на концентрирующих патронах № 3 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

7.6. Подготовка концентрирующих патронов № 1
для очистки экстракта и проверка хроматографического
поведения циантранилипрола на них

7.6.1. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 5 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 10 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.6.2. Проверка хроматографического поведения циантранилипрола на концентрирующем патроне № 1.

Из стандартного раствора циантранилипрола в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/см³, отбирают 1 см³, помещают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 см³ воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходный концентратор обмывают последовательно 10 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:9, 10 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:5 и 10 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие циантранилипрол, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения циантранилипрола на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

7.7. Подготовка концентрирующих патронов № 2
для очистки экстракта и проверка хроматографического
поведения циантранилипрола на них с использованием
водно-органических смесей

7.7.1. Подготовка концентрирующих патронов № 2 для очистки экстракта.

Все процедуры происходите использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон № 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:5. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.7.2. Проверка хроматографического поведения циантранилипрола на концентрирующем патроне № 2.

Из стандартного раствора циантранилипрола в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/см³, отбирают 1 см³, помещают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 5 см³ воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходный концентратор обмывают последовательно двумя порциями по 5 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:5. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие циантранилипрол, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.

Изучение поведения циантранилипрола на концентрирующих патронах № 2 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

7.8. Подготовка концентрирующих патронов № 2
для очистки экстракта и проверка хроматографического
поведения циантранилипрола на них с использованием
органических растворителей

7.8.1. Подготовка концентрирующих патронов № 2 для очистки экстракта.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон № 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см³ гексана. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.8.2. Проверка хроматографического поведения циантранилипрола на концентрирующем патроне № 2.

Из стандартного раствора циантранилипрола в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/см³, отбирают 1 см³, помещают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 5 см³ хлористого метилена, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 5 см³ гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходный концентратор обмывают последовательно 20 см³ смеси гексана с хлористым метиленом в соотношении 1:1, 20 см³ смеси гексана с хлористым метиленом в соотношении 1:2, 20 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие циантранилипрол, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.

Изучение поведения циантранилипрола на концентрирующих патронах № 2 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

7.9. Подготовка и кондиционирование
колонки для жидкостной хроматографии

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °С и скорости потока подвижной фазы 1 см³/мин 3 - 4 ч.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 17.4.3.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ Р 51810-2001 «Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети» и ГОСТ Р 52183-2003 «Консервы. Соки овощные. Сок томатный. ТУ», ГОСТ Р 51783-2001 «Лук репчатый свежий, реализуемый в розничной торговой сети. ТУ», ГОСТ Р 51809-2001 «Капуста белокочанная свежая, реализуемая в розничной торговой сети», ГОСТ 1724-85 «Капуста белокочанная свежая, заготовляемая и поставляемая. ТУ».

Пробы воды и томатного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более 10 суток.

Для длительного хранения проб почвы почву подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Пробы томатов, лука и капусты хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °С не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре (-18) °С до двух лет.

9. Выполнение определения

9.1. Вода

9.1.1. Экстракция.

Пробу воды объемом 100 см³ помещают в делительную воронку объемом 250 см³. Циантранилипрол экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 см³, встряхивая каждый разделительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) объединяют в концентраторе объемом 250 см³, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 5 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.2. Почва

9.2.1. Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

Образец почвы массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³, прибавляют 75 см³ ацетонитрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну. Затем пробу центрифугируют в течение 4 мин при скорости 4000 об./мин. Супернатант фильтруют через фильтр низкой плотности в колбу объемом 250 см³ с 10 г сухого хлористого натрия. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя по 50 см³ ацетонитрила. Ацетонитрильные экстракты объединяют в колбе объемом 250 см³ с 10 г сухого хлористого натрия, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 мин.

Объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку объемом 250 см³ (не растворившуюся соль оставляют в колбе), оставляют до полного разделения слоев и нижний (водный) слой отбрасывают.

К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 50 см³ гексана и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают выделившийся нижний водный слой и верхний гексановый слой, ацетонитрильный экстракт переносят в химический стакан объемом 200 см³. Затем ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и еще раз промывают 50 см³ гексана в тех же условиях. Верхний слой отбрасывают, а ацетонитрильный экстракт собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 см³, осушитель обмывают 10 см³ ацетинитрила, смыв объединяют с основным экстрактом и объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.2.1, прибавляют 3 см³ ацетона, обмывают стенки колбы, прибавляют 50 см³ дистиллированной воды и 10 см³ насыщенного раствора соли, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Экстракт в делительной воронке промывают двумя порциями гексана объемом по 30 см³, интенсивно встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают верхний гексановый слой, нижний водный слой возвращают в делительную воронку.

Циантранилипрол экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 20 см³, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) объединяют в концентраторе объемом 250 см³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия.

Сухой остаток, полученный в п. 9.2.2, растворяют в 10 см³ ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и вносят на подготовленную колонку, элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают последовательно 10 см³ ацетонитрила, затем двумя порциями по 10 см³ каждая 0,1 %-го раствора уксусной кислоты в ацетонитриле и вносят на колонку. Элюаты отбрасывают.

Циантранилипрол элюируют 30 см³ 0,5 %-го раствора уксусной кислоты в ацетонитриле. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.2.4. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.

Сухой остаток, полученный в п. 9.2.3., растворяют в 1 см³ ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 см³ воды, перемешивают и вносят на подготовленный патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают последовательно 10 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:9 и 10 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:5. Элюаты отбрасывают.

Циантранилипрол элюируют 10 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.2.5. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 3.

Сухой остаток, полученный в п. 9.2.3., растворяют в 2 см³ ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 см³ гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³. Исходный концентратор обмывают 10 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 2:1. Элюаты объединяют и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.3. Лук-репка и плоды томатов

9.3.1. Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

Образец измельченных плодов томата (или лука-репки) массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ ацетонитрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну. Ацетонитрильный экстракт фильтруют в плоскодонную колбу объемом 250 см³ с 10 г сухого хлористого натрия. Экстракцию повторяют двумя порциями ацетонитрила объемом по 50 см³ в тех же условиях. Ацетонитрильные экстракты объединяют в колбе объемом 250 см³ с 10 г сухого хлористого натрия, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 мин.

Объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку объемом 250 см³ (не растворившуюся соль оставляют в колбе), оставляют до полного разделения слоев и нижний (водный) слой отбрасывают.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п.п. 9.2.2. «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей», 9.2.3. «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия», 9.2.4. «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1» и 9.2.5. «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 3».

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.4. Лук-перо

9.4.1. Экстракция.

Образец измельченного пера лука массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции, прибавляют 50 см³ ацетонитрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну. Далее проводят экстракцию и очистку полученного экстракта как указано в п. 9.3.1. «Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей».

Затем проводя т очистку экстракта как указано в п.п. 9.2.2. «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей» и 9.2.3. «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия».

9.4.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2 с использованием водно-органических смесей.

Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 5 см³ воды, перемешивают и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³. Исходный концентратор обмывают 5 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:5 и вносят на патрон. Элюаты объединяют и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 9.2.5. «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 3».

Сухой остаток, полученный после очистки, растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.5. Томатный сок

9.5.1. Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

Образец томатного сока массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³, прибавляют 100 см³ ацетонитрила и интенсивно встряхивают 2 мин. Затем пробу центрифугируют в течение 4 мин при скорости 4000 об./мин. Супернатант фильтруют через фильтр низкой фильтрации в колбу объемом 250 см³ с 10 г сухого хлористого натрия и оставляют при комнатной температуре на 10 мин.

Объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку объемом 250 см³ (не растворившуюся соль оставляют в колбе), оставляют до полного разделения слоев и нижний (водный) слой отбрасывают.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п.п. 9.2.2. «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей», 9.2.3. «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия», 9.2.4. «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1» и 9.2.5. «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 3».

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрил-вода в соотношении 7:3 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.6. Капуста

9.6.1. Экстракция.

Образец измельченной капусты массой 20 г помешают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ ацетона и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну. Ацетоновый экстракт фильтруют через рыхлый ватный тампон в банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³. Экстракцию повторяют двумя порциями ацетона объемом по 50 см³ в тех же условиях. Ацетоновый экстракт объединяют и центрифугируют в течение 4 мин при скорости 4000 об./мин, а затем фильтруют через фильтр «красная лента» в концентратор объемом 250 см³ и осторожно упаривают (вскипает!) порциями по 50 см³ до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п.п. 9.2.2. «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей», 9.2.3. «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия» п. 9.2.4. «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1».

При недостаточной чистоте пробы дополнительно очищают на концентрирующем патроне № 2 по следующей схеме.

9.6.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2 с использованием органических растворителей.

Сухой остаток растворяют в 5 см³ хлористого метилена, прибавляют 5 см³ гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают последовательно 20 см³ смеси гексана с хлористым метиленом в соотношении 1:1, 20 см³ смеси гексана с хлористым метиленом в соотношении 1:2, элюаты отбрасывают. Циантранилипрол элюируют с патрона 20 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.7. Условия хроматографирования

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф жидкостный, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °С, с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18.

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 20,0 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С8.

Температура колонки: 30 °С.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода-муравьиная кислота в соотношении 450:500:1.

Длина волны: 265 нм.

Объем вводимой пробы 20 мм³.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.

10. Обработка результатов

Содержание циантранилипрола в пробах рассчитывают по формуле:

X - содержание циантранилипрола в пробе, мг/кг или мг/дм³;

S_ст. - высота (площадь) пика стандарта, мм;

S_пр. - высота (площадь) пика образца, мм;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г (см³);

Р - содержание циантранилипрола в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов
параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

Х₁, Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1), при этом r = 2,8×σ_r.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

 - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг».*

* - 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Контроль стабильности градуировочной
характеристики

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для циантранилипрола проводят при смене основных градуировочных растворов № 1, 2, 3, 4, 5 и 6 каждые 2 месяца, а также в начале и при окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание циантранилипрола в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация циантранилипрола контрольного измерения, мкг/см³;

С - известная концентрация градуировочного раствора циантранилипрола в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

3,23 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (А) превышает 3,23 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов циантранилипрола, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль
процедуры выполнения анализа проводится методом добавок

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

 - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

 - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры К_к с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений,
полученных в условиях воспроизводимости

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Х₁, Х₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Приложение 1

Полнота извлечения циантранилипрола
из воды, почвы, капусты, плодов томата и томатного сока,
лука-репки и лука-пера (5 повторностей для каждой
концентрации, Р = 0,95)