На главную
На главную

Определение остаточных количеств тиофанат-метила и карбендазима в зеленой массе, соломе и зерне хлебных злаков, ботве и корнеплодах сахарной свеклы, яблоках и яблочном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации тиофанат-метила в зеленой массе и соломе в диапазоне концентраций 0,5 - 5,0 мг/кг, в зерне, корнеплодах, ботве, яблоках и яблочном соке - 0,1 - 1,0 мг/кг; карбендазима в зеленой массе и соломе в диапазоне концентраций 0,5 - 5,0 мг/кг, в зерне, яблоках и яблочном соке - 0,1 - 1,0 мг/кг, в корнеплодах и ботве - 0,05 - 0,50 мг/кг.

Обозначение: МУК 4.1.3189-14
Название рус.: Определение остаточных количеств тиофанат-метила и карбендазима в зеленой массе, соломе и зерне хлебных злаков, ботве и корнеплодах сахарной свеклы, яблоках и яблочном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Статус: введен впервые
Дата актуализации текста: 05.05.2017
Дата добавления в базу: 12.02.2016
Утвержден: 24.07.2014 Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач РФ
Опубликован: Роспотребнадзор (2015 г. )
Ссылки для скачивания:

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном
сырье и объектах окружающей среды

Сборник методических указаний
МУК 4.1.3182 - 4.1.3189-14

Москва 2015

1. Разработаны сотрудниками ГНУ «Всероссийский НИИ защиты растений» Россельхозакадемии.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 26.06.2014 № 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 24 июля 2014 г.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Погрешность измерений. 3

2. Метод измерений. 4

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы.. 5

4. Требования безопасности. 6

5. Требования к квалификации операторов. 6

6. Условия измерений. 6

7. Подготовка к определению.. 6

8. Отбор проб и хранение. 8

9. Проведение определения. 8

10. Обработка результатов анализа. 9

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений. 10

12. Оформление результатов. 10

13. Контроль качества результатов измерений. 10

 

 

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

______________________ А.Ю. Попова

24 июля 2014 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств тиофанат-метила и
карбендазима в зеленой массе, соломе и зерне хлебных
злаков, ботве и корнеплодах сахарной свеклы, яблоках и
яблочном соке методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3189-14

Свидетельство о метрологической аттестации № 01.5.04.173/01.00043/2014.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации тиофанат-метила в зеленой массе и соломе в диапазоне концентраций 0,5 - 5,0 мг/кг, в зерне, корнеплодах, ботве, яблоках и яблочном соке - 0,1 - 1,0 мг/кг; карбендазима в зеленой массе и соломе в диапазоне концентраций 0,5 - 5,0 мг/кг, в зерне, яблоках и яблочном соке - 0,1 - 1,0 мг/кг, в корнеплодах и ботве - 0,05 - 0,50 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: тиофанат-метил.

Название действующего вещества по ИЮПАК: Dimethyl 4,4’-(о-phenylene)bis(3-thioallophanate).

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C12H14N4O4S2.

Молекулярная масса: 342,39.

Химически чистое вещество представляет собой белое кристаллическое вещество.

Температура плавления: разлагается до плавления.

Давление пара при 25 °С: 8,8×10-3 МПа.

Растворимость (в мг/дм3 при 20 °С): вода - 20, гексан - 0,47, ксилол - 110, метанол - 7800, этилацетат - 8400.

Константа диссоциации (рКа) при 25 °С: 7,28 (слабая кислота).

Стабильность к гидролизу при 20 °С: DT50 = 867 дней (pH 5), 36 дней (pH 7), 0,7 дней (pH 9). Период полураспада в почве: DT50 = 0,6 дня.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность LD50 для крыс более 5000 мг/кг, острая дермальная токсичность LD50 для крыс превышает 2000 мг/кг.

Оказывает раздражающее действие на дыхательные пути, обладает репродуктивной токсичностью и мутагенностью.

Умеренно токсичен для пчел и дождевых червей.

Область применения препарата. Контактно-системный фунгицид с защитными и лечебными свойствами.

Механизм действия. В грибах, растениях и других биологических средах вещество превращается в карбендазим, поэтому считается, что по механизму действия тиофанат-метил аналогичен бензимидазолам.

Название действующего вещества по ИСО: карбендазим.

Название действующего вещества по ИЮПАК: Метилбензимидазол-2-илкарбамат.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C9H9N3O2.

Молекулярная масса: 191,2.

Химически чистое вещество представляет собой кристаллический порошок без цвета и запаха.

Температура плавления: 302 - 307 °С (с разложением).

Давление пара: 0,09 мПа (20 °С); 0,15 мПа (25 °С); 1,3 мПа (50 °С).

Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода Kow lgP = 1,38 (pH 5); 1,51 (pH 7); 1,49 (pH 9).

Растворимость в воде (мг/дм3, 24 °С): 29 (pH 4); 8 (pH 7); 7 (pH 8).

Растворимость в органических растворителях (г/дм3, 24 °С): диметилформамид - 5; ацетон - 0,3, этанол - 0,3; хлороформ - 0,1; этилацетат - 0,135; дихлорметан - 0,068; бензол - 0,036; циклогексан и диэтиловый эфир - < 0,01; н-гексан - 0,0005.

Субстанция карбендазима стабильна по крайней мере в течение 2 лет при температуре хранения ниже 50 °С, а также после 7 дней интенсивного облучения светом (20000 люкс). В щелочных растворах медленно разлагается. При 22 °С DT50 превышает 350 дней (pH 5 и 7) и равен 124 дням (pH 9). Будучи слабым основанием (рКа 4,2), в кислых растворах образует стабильные водорастворимые соли.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая оральная токсичность - LD50 для крыс - 6400 мг/кг; для собак - более 2500 мг/кг; дермальная - LD50 для кроликов более 10000 мг/кг; для крыс - более 2000 мг/кг; не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз; ингаляционная - при использовании водной суспензии 10 г/л эффект не обнаружен для крыс, кроликов, морских свинок и кошек. Период наблюдения 4 ч.

Область применения. Фунгицид системного действия с длительным защитным и целебным эффектом. Эффективно подавляет развитие заболеваний растений, вызываемых грибами из родов Septoria, Fusarium, Erysiphe и Pseudocercosprella на зерновых культурах; Sclerotinia, Alternaria и Cylindrosporium на семенах рапса.

Гигиенические нормативы для карбендазима, установленные в России: МДУ в сахарной свекле - 0,1 мг/кг; в зерне хлебных злаков - 0,5 мг/кг; в плодовых семечковых - 0,2 мг/кг.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Объект анализа

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), σл, %

Показатель внутрилабораторной прецизионности, σRл, %

Показатель воспроизводимости, σR, %

Показатель точности* (границы относительной погрешности), ±δ, %

Тиофанат-метил

Зеленая масса

0,5 - 5,0

7

9

12

23

Солома

0,5 - 5,0

7

9

12

23

Зерно

0,1 - 1,0

8

9

11

22

Корнеплоды

0,1 - 1,0

8

9

11

22

Ботва

0,1 - 1,0

8

9

11

22

Яблоки

0,1 - 1,0

8

9

11

22

Яблочный сок

0,1 - 1,0

8

9

11

22

Карбендазим

Зеленая масса

0,5 - 5,0

7

9

12

23

Солома

0,5 - 5,0

7

9

12

23

Зерно

0,1 - 1,0

8

9

11

22

Корнеплоды

0,05 - 0,5

9

11

12

24

Ботва

0,05 - 0,5

9

11

12

24

Яблоки

0,1 - 1,0

8

9

11

22

Яблочный сок

0,1 - 1,0

8

9

11

22

*Соответствует расширенной неопределенности Uотн. (в относительных единицах) при коэффициенте охвата k = 2

Таблица 2

Полнота извлечения тиофанат-метила, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата для n = 20, Р = 0,95

Анализируемый объект

Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3)

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)

Полнота извлечения, %

Стандартное отклонение, S

Доверительный интервал среднего результата, ± %

Зеленая масса

0,5

0,5 - 5,0

79,0

2,59

3,63

Солома

0,5

0,5 - 5,0

84,9

3,17

4,44

Зерно

0,1

0,1 - 1,0

81,6

2,79

3,91

Корнеплоды

0,1

0,1 - 1,0

84,1

2,13

2,99

Ботва

0,1

0,1 - 1,0

87,5

3,04

4,26

Яблоки

0,1

0,1 - 1,0

77,8

1,93

2,70

Яблочный сок

0,1

0,1 - 1,0

78,1

1,52

2,13

Полнота извлечения карбендазима, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата для n = 20, Р = 0,95

Анализируемый объект

Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3)

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)

Полнота извлечения, %

Стандартное отклонение, S

Доверительный интервал среднего результата, ± %

Зеленая масса

0,5

0,5 - 5,0

80,8

2,99

4,19

Солома

0,5

0,5 - 5,0

80,7

4,08

5,72

Зерно

0,1

0,1 - 1,0

80,4

3,13

4,39

Корнеплоды

0,05

0,05 - 0,5

86,5

4,33

6,07

Ботва

0,05

0,05 - 0,5

84,9

4,62

6,48

Яблоки

0,1

0,1 - 1,0

78,9

1,54

2,16

Яблочный сок

0,1

0,1 - 1,0

82,3

5,85

8,20

2. Метод измерений

Методика основана на определении тиофанат-метила и карбендазима методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового (УФ) детектора после извлечения из образцов ацетонитрилом, последующей очистки на сорбенте и в системе несмешивающихся растворителей.

Идентификация тиофанат-метила и карбендазима проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные
устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки

 

Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допустимой погрешности 0,2 мг

ГОСТ 24104-01

Весы технические с пределом взвешивания до 400 г и допустимой погрешностью 0,1 г

ГОСТ 24104-01

Колбы мерные на 10, 100 и 250 см3

ГОСТ 23932-90

Микродозаторы одноканальные переменного объема от 100 до 1000 мм3 и от 1 до 5 см3

 

Цилиндры мерные на 10, 50 и 100 см3

ГОСТ 23932-90

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетонитрил для ВЭЖХ

ТУ 2634-002-04715285-12

Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная)

ГОСТ Р 52501-05

Динатрия цитрат сесквигидрат, 99 %

 

Карбендазим, аналитический стандарт с содержанием основного вещества 99,0 %

 

Кислота трифторуксусная, 99 %

 

Магний серно-кислый безводный, 99 %

 

Натрий серно-кислый безводный, хч

ГОСТ 4166-76

Натрий хлористый, чда

ГОСТ 4233-77

Натрия гидроксид, хч

ГОСТ 4328-77

Натрия цитрат двуводный, 99 %

 

Соляная кислота,, хч

ГОСТ 3118-77

Тиофанат-метил, аналитический стандарт с содержанием основного вещества 99,3 %

 

Этилацетат, хч

ГОСТ 22300-76

Смесь первичных и вторичных аминов, № 5982-5753.

 

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18 (100×2,1) мм, 1,7 мкм

 

Аппарат для встряхивания проб

ТУ 64-1-1081-73

Воронки делительные вместимостью 50 см3

ГОСТ 25336-82

Воронки химические конусные

ГОСТ 25336-82

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25 и 100 см3

ГОСТ 9737-93

Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см3

 

Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар

 

Центрифуга с максимальной рабочей частотой вращения 4000 об./мин.

 

Устройство перемешивающее (50 - 200 колебаний в минуту)

ТУ 4389-007-44330709-11

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

7.1. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.

7.2. Приготовление растворов

7.2.1. Раствор трифторуксусной кислоты 0,05 %-й. В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают (0,5 ± 0,01) г трифторуксусной кислоты, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.

7.2.2. Раствор гидроксида натрия 2М. В мерную колбу объемом 100 см3 помещают 8,0 г гидроксида натрия, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки.

7.2.3. Раствор соляной кислоты 0,1М. В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 8,1 см3 концентрированной соляной кислоты, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки.

7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов

7.3.1. Основной раствор тиофанат-метила с концентрацией 0,5 мг/см3. Точную навеску тиофанат-метила (50 ± 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

7.3.2. Приготовление градуировочных растворов тиофанат-метила.

Градуировочные растворы с концентрациями тиофанат-метила 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя смесь ацетонитрила и 0,05 %-й трифторуксусной кислоты в соотношении 50:50.

7.3.2.1. Раствор № 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см3 основного раствора и доводят до метки смесью ацетонитрила и 0,05 %-й трифторуксусной кислоты в соотношении 50:50.

7.3.2.2. Раствор № 2 с концентрацией 0,5 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5,0 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила и 0,05 %-й трифторуксусной кислоты в соотношении 50:50.

7.3.2.3. Раствор № 3 с концентрацией 0,2 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила и 0,05 %-й трифторуксусной кислоты в соотношении 50:50.

7.3.2.4. Раствор № 4 с концентрацией 0,1 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила и 0,05 %-й трифторуксусной кислоты в соотношении 50:50.

7.3.2.5. Раствор № 5 с концентрацией 0,05 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила и 0,05 %-й трифторуксусной кислоты в соотношении 50:50.

7.3.3. Основной раствор карбендазима с концентрацией 0,5 мг/см3. Точную навеску тиофанат-метила (50,0 ± 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в метаноле и доводят объем до метки метанолом.

7.3.4. Приготовление градуировочных растворов карбендазима

Градуировочные растворы с концентрациями карбендазима 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя 0,05 %-ю трифторуксусную кислоту.

7.3.4.1. Раствор № 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см3 основного раствора и доводят до метки 0,05 %-й трифторуксусной кислотой.

7.3.4.2. Раствор № 2 с концентрацией 0,5 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5,0 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки 0,05 %-й трифторуксусной кислотой.

7.3.4.3. Раствор № 3 с концентрацией 0,2 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки 0,05 %-й трифторуксусной кислотой.

7.3.3.4. Раствор № 4 с концентрацией 0,1 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки 0,05 %-й трифторуксусной кислотой.

7.3.4.5. Раствор № 5 с концентрацией 0,05 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки 0,05 %-й трифторуксусной кислотой.

Основные растворы тиофанат-метила и карбендазима можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты определения тиофанат-метила и карбендазима используют ацетонитрильные растворы веществ, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

7.4. Построение градуировочного графика

Для установления градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация тиофанат-метила или карбендазима в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации тиофанат-метила или карбендазима в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:

С = KS, где

S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

С - аттестованное значение массовой концентрации тиофанат-метила (или карбендазима) в градуировочном растворе;

СK - результат контрольного измерения массовой концентрации тиофанат-метила (или карбендазима) в градуировочном растворе;

λконтр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, % (λконтр. = 10 % при Р = 0,95).

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79), а также в соответствии с ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые. Отбор проб зерна». Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Отбор проб свеклы производится в соответствии с ГОСТ 1722-85 «Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая». Для длительного хранения аналитические пробы свеклы (ботва и корнеплоды) помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С и хранят в герметично закрытой полиэтиленовой таре. Отбор проб яблок производят в соответствии с ГОСТ 27572-87 «Яблоки свежие для промышленной переработки». Пробы яблок и яблочного сока хранят до анализа в герметичной таре в морозильной камере при температуре не выше -18 °С, в холодильнике сок хранят при температуре 0 - 4 °С в стеклянной таре с притертой пробкой в течение недели.

9. Проведение определения

9.1. Экстракция тиофанат-метила и карбендазима

Навеску измельченной матрицы (10 г - зерно, корнеплоды и ботва сахарной свеклы, яблоки и яблочный сок; 2 г - зеленая масса и солома) помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3, последовательно добавляют 10 см3 ацетонитрила, 4 г безводного сульфата магния, 1 г хлористого натрия, 1 г цитрата натрия двуводного и 0,5 г динатрия цитрата сесквигидрата. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при скорости 4000 об./мин. От верхнего ацетонитрильного слоя отбирают 5 см3, переносят в центрифужную пробирку вместимостью 15 см3, содержащую 150 мг смеси первичных и вторичных аминов и 900 мг безводного сульфата магния. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при скорости 4000 об./мин.

Для определения тиофанат-метила отбирают аликвоту 0,5 см3, переносят ее в виалу для хроматографирования, добавляют 0,5 см3 0,05 %-й трифторуксусной кислоты и 10 мм3 вводят в хроматограф.

Для определения карбендазима отбирают аликвоту 1,0 см3, переносят в круглодонную колбу и быстро упаривают досуха на ротационном испарителе. К сухому остатку добавляют 5 см3 0,1 М соляной кислоты и переносят в делительную воронку. Кислый раствор промывают двумя порциями по 2 см3 этилацетата, подщелачивают 2 М раствором гидроксида натрия до pH 9 и экстрагируют карбендазим двумя порциями по 3 см3 этилацетата. Органические фракции пропускают через слой безводного сульфата натрия, собирая в круглодонную колбу, и упаривают на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1,0 см3 0,05 %-й трифторуксусной кислоты и 10 мм3 водят в хроматограф.

Примечание. Определение тиофанат-метила необходимо проводить незамедлительно после приготовления пробы, так как он быстро разрушается, частично превращаясь в карбендазим. Пробы для определения карбендазима допускается хранить в холодильнике только после очистки в системе несмешивающихся растворителей.

9.2. Условия хроматографирования

Ультраэффективный жидкостный хроматограф с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, (100×2,1) мм, 1,7 мкм. Температура колонки (30 ± 1) °С.

Тиофанат-метил. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,05 %-й трифторуксусной кислоты в соотношении 30:70. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора: 265 нм. Объем вводимой пробы: 10 мм3. Время удерживания тиофанат-метила: (5,9 ± 0,1) мин.

Карбендазим. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,05 %-й трифторуксусной кислоты в соотношении 10:90. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора: 281 нм. Объем вводимой пробы: 10 мм3. Время удерживания карбендазима: (4,3 ± 0,1) мин.

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание тиофанат-метила или карбендазима в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

Sx - площадь пика тиаофанат-метила или карбендазима на хроматограмме испытуемого образца, мм2 (AU);

K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;

V - объём пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;

Р - навеска анализируемого образца, г;

f - полнота извлечения определяемого вещества, приведенная в табл. 2, %.

Содержание остаточных количеств определяемого вещества в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор тиофанат-метила или карбендазима с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

11. Проверка приемлемости результатов
параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

(1)

X1, Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (r = 2,8σr).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

( ± Δ) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

 - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее нижней границы определения» (например: менее 0,1 мг/кг*, где * - 0,1 мг/кг - предел обнаружения тиофанат-метила в зерне).

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки С𝜕 должна удовлетворять условию:

C𝜕 = Δл, Х + Δл, Хˊ, где

±Δл, Х, (±Δл, Хˊ) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг;

при этом:

Δл = ±0,84Δ, где

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры Ккрассчитывают по формуле:

Кк= Х - Хˊ - C𝜕, где

Xˊ, X, С𝜕 - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|Кк| ≤ К,

(2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

(3)

X1, X2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Разработаны сотрудниками «Всероссийского НИИ защиты растений», С.-Петербург (Долженко В.И., Цибульская И.А., Черменская Т.Д., Комарова А.С.).

186
Мне нравится
Комментировать Добавить в закладки

Комментарии могут оставлять только зарегистрированные пользователи.

Пожалуйста зарегистрируйтесь или авторизуйтесь на сайте.