На главную
На главную

Измерение массовых концентраций фталатов (диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата) в молоке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерения массовых концентраций фталатов (диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата) в молоке (молоко сырое, пастеризованное, ультрапастеризованное, стерилизованное, топленое, молоко цельное, обезжиренное, питьевое) в диапазоне концентраций 0,1 - 4,0 мг/дм3 для диметилфталата и ди(2-этил-гексил)фталата, 0,2 - 4,0 мг/дм3 для диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата.

Обозначение: МУК 4.1.3160-14
Название рус.: Измерение массовых концентраций фталатов (диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата) в молоке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Статус: введен впервые
Дата актуализации текста: 05.05.2017
Дата добавления в базу: 12.02.2016
Утвержден: 24.02.2014 Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач РФ
Опубликован: Роспотребнадзор (2015 г. )
Ссылки для скачивания:

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение массовых концентраций фталатов
(диметилфталата, диэтилфталата,
дибутилфталата, бензилбутилфталата,
ди(2-этилгексил)фталата) в молоке
методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3160-14

Москва 2015

1. Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» (Т.С. Уланова, Н.В. Зайцева, Т.Д. Карнажицкая, Е.О. Пшеничникова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 26 декабря 2013 г. № 4).

3. Утверждены Врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А.Ю. Поповой 24 февраля 2014 г.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Назначение и область применения. 2

2. Физико-химические и токсикологические свойства. 2

3. Метрологические характеристики методики выполнения измерений. 3

4. Метод измерения. 3

5. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы.. 4

6. Требования безопасности и охраны окружающей среды.. 5

7. Требования к квалификации оператора. 5

8. Условия измерений. 5

9. Подготовка к выполнению измерений. 5

10. Выполнение измерений. 9

11. Обработка результатов измерений. 9

12. Оформление результатов измерений. 11

13. Контроль качества результатов измерений. 11

 

 

УТВЕРЖДАЮ

Врио руководителя Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главного государственного санитарного
врача Российской Федерации

_________________________ А.Ю. Попова

24 февраля 2014 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение массовых концентраций фталатов
(диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата,
бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата) в молоке
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3160-14

Свидетельство об аттестации № 88-16374-243-01.00076-2012 от 26.11.2012.

1. Назначение и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерения массовых концентраций фталатов (диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата) в молоке (молоко сырое, пастеризованное, ультрапастеризованное, стерилизованное, топленое, молоко цельное, обезжиренное, питьевое)* в диапазоне концентраций 0,1 - 4,0 мг/дм3 для диметилфталата и ди(2-этилгексил)фталата, 0,2 - 4,0 мг/дм3 для диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата.

________

Термины и определения приведены в соответствии с ГОСТ Р 52738-2007.

1.2. Методические указания по измерению массовых концентраций фталатов в молоке предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и других служб, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также других лабораторий, аккредитованных в установленном порядке.

1.3. Методические указания носят рекомендательный характер.

2. Физико-химические и токсикологические свойства

Фталаты - диэфиры 1,2-бензолдикарбоновой кислоты (о-фталевой кислоты). Общая формула C8H4O4R1R2, где R - стартовый остаток. Фталаты добавляют в качестве пластификаторов для придания эластичности в полимерные материалы при изготовлении предметов промышленного, бытового, пищевого и медицинского назначения. Гигиенические нормативы в Российской Федерации не установлены.

Диметилфталат (ДМФ), диэтилфталат (ДЭФ), дибутилфталат (ДБФ), бензилбутилфталат (ББФ) - бесцветные маслянистые жидкости без запаха или со слабым запахом, ди(2-этилгексил)фталат (ДЭГФ) - прозрачная бесцветная жидкость со слабым запахом.

 

ДМФ

ДЭФ

ДБФ

ББФ

ДЭГФ

CAS

131-11-3

93952-12-6

93952-11-5

93951-88-3

117-81-7

Формула

С10Н10О4

С12Н14О4

С16Н22О4

С19Н20О4

С24Н38О4

Молекулярная масса

194,19

222,24

278,35

312,4

390,57

Тпл. °С

2

-40

-35

-35

-46

(5 мм рт. ст.)

Ткип. °С

282

296,1

340

370

231

Плотность, г/см3

1,189

1,118

1,047

1,111

0,986

Растворимость в воде, г/100 см3

0,5

0,15

0,1

0,00037

0,01

Давление насыщенных паров, кПа

1,67

(при 150 °С)

 

 

< 0,1

(при 110 °С)

 

ПДК, мг/дм3

отсутствует

отсутствует

отсутствует

отсутствует

отсутствует

Краткая токсикологическая характеристика

Фталаты проявляют мутагенный, эмбриотоксический и репротоксический эффекты, снижают активность гормонов печени. Ди(2-этилгексил)фталат является эндокринным дизраптором, нарушающим гормональный метаболизм, обладает канцерогенными свойствами [4].

3. Метрологические характеристики
методики выполнения измерений

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значения погрешности (и её составляющих) результатов измерений не превышают значений, приведенных в табл. 1.

Таблица 1

Диапазон измерений, значения точности
(правильности и прецизионности) методики

Объект измерения

Диапазон измерений массовой концентрации фталатов, мг/дм3

Показатель точности (границы относительной погрешности), ±δ, % при Р = 0,95

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), σr, %

Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), σR,%

Предел повторяемости, r, % (при Р = 0,95 n = 2)

Молоко

Диметилфталат

 

0,1 - 4 вкл.

39

16

19,5

45

Диэтилфталат

 

0,2 - 4 вкл.

35

14

17,5

39

Дибутилфталат

 

0,2 - 4 вкл.

36

15

18

42

Бензилбутилфталат

 

0,2 - 4 вкл.

36

11

18

31

Ди(2-этилгексил)фталат

 

0,1 - 4 вкл.

31

9

15,5

25

4. Метод измерения

4.1. Измерение массовых концентраций диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата основано на двойной экстракции фталатов из молока смесью растворителей (метанола, гексана, изопропанола), очистке экстракта и последующем анализе экстракта на жидкостном хроматографе с использованием диодно-матричного детектора.

4.2. Определению не мешают о-фталевая кислота и ее изомеры.

5. Средства измерений, реактивы, вспомогательные
устройства и материалы

5.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором и градиентным насосом, смешивающим два компонента

 

Весы лабораторные равноплечные второго класса точности; наибольший предел взвешивания 200 г, диапазон взвешивания по шкале мг от 0 до 100 мг, цена деления делительного устройства - 0,05 мг, погрешность взвешивания по шкале мг ±0,15 мг

ГОСТ Р 53228-08

Гири Г2-210

ГОСТ 7328-01

Колбы мерные с пробкой 2-25-2, 2-100-2

ГОСТ 1770-74

Пипетки мерные градуированные 1-2-1-2, 1-2-1-5, 1-2-1-10

ГОСТ 29227-91

Микрошприцы серии МШ-10, диапазон дозируемого объема, мкл 1 - 10 с ценой деления 0,2 мкл, погрешность 1 %

ТУ 2.833.106-2000

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

5.2. Реактивы

Ди(2-этилгексил)фталат, аналитический стандарт с массовой долей основного вещества не менее 99,5 %

 

Диметилфталат, аналитический стандарт с массовой долей основного вещества не менее 99,5 %

 

Диэтилфталат, аналитический стандарт с массовой долей основного вещества не менее 99,5 %

 

Дибутилфталат, аналитический стандарт с массовой долей основного вещества не менее 99,5 %

 

Бензилбутилфталат, аналитический стандарт с массовой долей основного вещества не менее 98 %

 

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, осч

ТУ 6-09-14-2167-84

Гексан для хроматографии, хч

ТУ 6-09-4521-77

Метанол (метиловый спирт), хч

ГОСТ 6995-77

Изопропанол (изопропиловый спирт), хч

ТУ 2632-015-11291058-95

Вода дистиллированная

ГОСТ 6709-72

Кислота серная, осч

ГОСТ 14262-78

Калий двухромовокислый, хч

ГОСТ 4220-75

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

5.3. Вспомогательные устройства и материалы

Колонка металлическая длиной 150 мм и внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми полярными группами С18, зернение 5 мкм

 

Предколонка длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми полярными группами С18, зернение 5 мкм

 

Пробирка вакуумная стеклянная без наполнителя вместимостью 6 см3

 

Шкаф сушильный электрический с диапазоном рабочих температур от 50 до 200 °С

ТУ 16.531.743-83

Центрифуга лабораторная с частотой вращения ротора от 500 до 2700 об./мин

 

Стакан В-1-2000-ТС вместимостью 2 дм3

ГОСТ 25336-82

Стеклянные виалы объемом 1,5 см3 с крышкой

 

Шприц медицинский одноразовый типа «Луер» вместимостью 1 см3

ГОСТ Р ИСО 7886-11

Фильтры капроновые с диаметром пор не более 5 мкм

 

Примечание. Допускается использование других вспомогательных устройств аналогичного назначения, технические характеристики которых не уступают указанным, а также материалов, обеспечивающих нормативы точности при проведении измерений.

6. Требования безопасности и охраны окружающей среды

6.1. При выполнении измерений следует соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на эксплуатацию жидкостного хроматографа.

6.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.

6.3. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц, имеющих квалификацию не ниже инженера-химика с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоивших метод измерений и получивших удовлетворительные результаты оперативного контроля процедуры измерений.

8. Условия измерений

8.1. При подготовке к проведению измерений и приготовлении растворов соблюдают следующие условия:

- температура воздуха (20 ± 5) °С;

- атмосферное давление (630 - 800) мм рт. ст.;

- влажность воздуха не более 80 %.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией прибора.

9. Подготовка к выполнению измерений

При подготовке к выполнению измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

9.1. Подготовка посуды

Используемую посуду вымыть с поверхностно-активным моющим средством, замочить на 1 ч в хромовой смеси, промыть проточной водой, ополоснуть дистиллированной водой, высушить в сушильном шкафу при температуре 105 °С. Перед использованием сухую посуду обработать ацетонитрилом, высушить при комнатной температуре.

9.2. Приготовление растворов

9.2.1. Элюент для хроматографии. Смесь ацетонитрила с дистиллированной водой. Состав элюента задают на двух каналах насоса в градиентном и изократическом (для ди(2-этилгексил)фталата) режимах.

9.2.2. Исходный раствор диметилфталата для градуировки. Навеску диметилфталата массой (0,250 ± 0,001) г вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки ацетонитрилом и перемешивают. Массовая концентрация диметилфталата в исходном растворе составляет 2,50 мг/см3. Срок хранения раствора 3 месяца при температуре 4 °С.

9.2.3. Исходный раствор диэтилфталата для градуировки. Навеску диэтилфталата массой (0,250 ± 0,001) г вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки ацетонитрилом и перемешивают. Массовая концентрация диэтилфталата в исходном растворе составляет 2,50 мг/см3. Срок хранения раствора 3 месяца при температуре 4 °С.

9.2.4. Исходный раствор дибутилфталата для градуировки. Навеску дибутилфталата массой (0,250 ± 0,001) г вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки ацетонитрилом и перемешивают. Массовая концентрация дибутилфталата в исходном растворе составляет 2,50 мг/см3. Срок хранения раствора 3 месяца при температуре 4 °С.

9.2.5. Исходный раствор бензилбутилфталата для градуировки. Навеску бензилбутилфталата массой (0,250 ± 0,001) г вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки ацетонитрилом и перемешивают. Массовая концентрация бензилбутилфталата в исходном растворе составляет 2,50 мг/см3. Срок хранения раствора 3 месяца при температуре 4 °С.

9.2.6. Исходный раствор ди(2-этилгексил)фталата для градуировки. Навеску ди(2-этилгексил)фталата массой (0,250 ± 0,001) г вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки ацетонитрилом и перемешивают. Массовая концентрация ди(2-этилгексил)фталата в исходном растворе составляет 2,50 мг/см3. Срок хранения раствора 3 месяца при температуре 4 °С.

9.2.7. Раствор для идентификации диметилфталата. В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят микрошприцем 2,5 мкл исходного раствора диметилфталата для градуировки и доводят содержимое колбы ацетонитрилом до метки. Массовая концентрация диметилфталата составляет 0,25 мг/дм3. Используют свежеприготовленный раствор.

9.2.8. Раствор для идентификации диэтилфталата. В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят микрошприцем 2,5 мкл исходного раствора диметилфталата для градуировки и доводят содержимое колбы ацетонитрилом до метки. Массовая концентрация диэтилфталата составляет 0,25 мг/дм3. Используют свежеприготовленный раствор.

9.2.9. Раствор для идентификации дибутилфталата. В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят микропшрицем 25 мкл исходного раствора дибутилфталата для градуировки и доводят содержимое колбы ацетонитрилом до метки. Массовая концентрация дибутилфталата составляет 2,5 мг/дм3. Используют свежеприготовленный раствор.

9.2.10. Раствор для идентификации бензилбутилфталата. В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят микропшрицем 2,5 мкл исходного раствора бензилбутилфталата для градуировки и доводят содержимое колбы ацетонитрилом до метки. Массовая концентрация бензилбутилфталата составляет 0,25 мг/дм3. Используют свежеприготовленный раствор.

9.2.11. Раствор для идентификации ди(2-этилгексил)фталата. В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят микропшрицем 2,5 мкл исходного раствора ди(2-этилгексил)фталата для градуировки и доводят содержимое колбы ацетонитрилом до метки. Массовая концентрация ди(2-этилгексил)фталата составляет 0,25 мг/дм3. Используют свежеприготовленный раствор.

9.2.12. Хромовая смесь. В термостойкий стакан вместимостью 2 дм3 насыпают 50 г калия двухромовокислого, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 дм3 концентрированной серной кислоты.

9.3. Подготовка хроматографической колонки

Колонку устанавливают в хроматограф и подают элюент со скоростью 1,0 см3/мин до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора.

9.4. Установление градуировочных характеристик

9.4.1. Градуировочные характеристики, выражающие зависимости площадей пиков на хроматограмме (единицы оптической плотности, е.о.п.) от массовых концентраций диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата, устанавливают на градуировочных растворах диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в молоке методом абсолютной градуировки. Градуировочную характеристику для определения диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата устанавливают по результатам измерений трех серий из пяти градуировочных растворов с различными массовыми концентрациями определяемых фталатов в каждой серии. Градуировочную характеристику для определения диметилфталата, ди(2-этилгексил)фталата устанавливают по результатам измерений трех серий из шести градуировочных растворов с различными массовыми концентрациями определяемых фталатов в каждой серии.

9.4.2. Градуировочные растворы готовят в мерных колбах вместимостью 25 см3. Для этого в каждую колбу вносят исходный раствор для градуировки в соответствии с табл. 2, доводят молоком до метки и перемешивают содержимое колбы. В соответствии с п. 10 проводят анализ молока на содержание фталатов. При наличии анализируемых веществ в холостой пробе вычитают их фоновое содержание при построении градуировочного графика.

Таблица 2

Растворы для установления градуировочной характеристики
диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата,
ди(2-этилгексил)фталата в молоке

Номер раствора

1

2

3

4

5

6

Объем исходного раствора, мкл

1

2

4

10

20

40

Массовая концентрация диметилфталата в молоке, мг/дм3

0,1

0,2

0,4

1,0

2,0

4,0

Массовая концентрация диэтилфталата в молоке, мг/дм3

-

0,2

0,4

1,0

2,0

4,0

Массовая концентрация дибутилфталата в молоке, мг/дм3

-

0,2

0,4

1,0

2,0

4,0

Массовая концентрация бензилбутилфталата в молоке, мг/дм3

-

0,2

0,4

1,0

2,0

4,0

Массовая концентрация ди(2-этилгексил)фталата в молоке, мг/дм3

0,1

0,2

0,4

1,0

2,0

4,0

9.4.3. В вакуумную стеклянную пробирку вместимостью 6 см3 переносят 1,5 см3 каждого градуировочного раствора определяемых фталатов, добавляют 3,6 см3 смеси метанол-гексан-изопропанол (1,5:2,0:0,1), закрывают пробкой, интенсивно перемешивают в течение 5 мин. Содержимое пробирки центрифугируют в течение 10 мин со скоростью 2000 оборотов в минуту. После расслоения жидкостей верхний слой (экстракт 1) переносят в новую вакуумную пробирку. Проводят повторную экстракцию молока, добавляя к нижнему слою 3,6 см3 смеси метанол-гексан-изопропанол (1,5:2:0,1), интенсивно перемешивая и центрифугируя смесь в течение 10 мин. Отбирают верхний слой (экстракт 2). Объединенный экстракт высушивают в токе воздуха, сухой остаток растворяют в 2 см3 ацетонитрила, очищают от молочного жира, для чего добавляют в пробирку 1 см3 гексана, закрывают пробкой, тщательно перемешивают в течение 1 мин. После расслоения жидкостей гексановый (верхний) слой удаляют, а ацетонитрильный (нижний) слой фильтруют через капроновый фильтр, используя медицинский шприц типа «Луер», в стеклянную виалу и аликвотную часть (20 мм3) анализируют на жидкостном хроматографе в условиях хроматографирования.

9.4.4. Условия хроматографирования:

колонка 2,1 мм×150 мм, заполненная сорбентом С18;

подвижная фаза для анализа диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата - смесь ацетонитрила и воды в градиентном режиме: увеличение ацетонитрила с 37 до 40 % от 0 до 1 мин, увеличение ацетонитрила с 40 до 75 % от 1 до 3 мин, уменьшение ацетонитрила с 75 до 50 % от 3 до 4 мин, увеличение ацетонитрила с 50 до 90 % от 4 до 6 мин, уменьшение ацетонитрила с 90 до 37 % от 6 до 10 мин;

подвижная фаза для анализа ди(2-этилгексил)фталата - смесь ацетонитрила и воды в соотношении 85:15;

скорость движения элюента 1,0 см3/мин;

температура термостата колонки 30 °С;

ультрафиолетовый детектор:

длина волны 198 нм.

9.4.5. Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:

Сi - массовые концентрации диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в градуировочном растворе, мг/дм3;

Si - среднее значение трех измерений площади пика диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата i-й концентрации, расхождение между минимальным и максимальным значением из которых не должно превышать 4 % относительно среднего значения Si единицы оптической плотности (е.о.п.);

n - количество градуировочных растворов.

9.4.6. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация концентрации диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировочная характеристики признается стабильной при выполнении условия:

|Cm - C| ≤ 0,10C, где

С - заданная массовая концентрация диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в градуировочном растворе;

Сm - результат измерения массовой концентрации диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в образце для градуировки.

При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики.

10. Выполнение измерений

10.1. Отбор проб

Отбор проб молока осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ 3622-68. Отобранные образцы упаковывают в стеклянные банки с притертыми крышками. Срок хранения проб до 3 суток при температуре 4 °С, более 3 суток - при температуре -15 °С.

10.2. Порядок выполнения измерений

10.2.1. Выполняют два параллельных измерения массовой концентрации диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в пробе молока. В стеклянную вакуумную пробирку вместимостью 6 см3 добавляют 1,5 см3 анализируемого молока, добавляют 3,6 см3 смеси растворителей (метанол, гексан и изопропанол в объемном отношении 1,5:2,0:0,1), закрывают пробкой, интенсивно перемешивают в течение 5 мин. Содержимое пробирки центрифугируют в течение 10 мин со скоростью 2000 оборотов в минуту. После расслоения жидкостей верхний слой (экстракт 1) переносят в новую стеклянную пробирку. Нижний слой повторно экстрагируют: снова добавляют 3,6 см3 смеси растворителей (метанол, гексан и изопропанол в объемном отношении 1,5:2,0:0,1), закрывают пробкой, интенсивно перемешивают в течение 5 мин. Содержимое пробирки центрифугируют в течение 10 мин со скоростью 2000 оборотов в минуту. После расслоения жидкостей отбирают верхний слой (экстракт 2). Экстракты объединяют и высушивают в токе воздуха. Сухой остаток растворяют в 2 см3 ацетонитрила и очищают от молочного жира, для чего добавляют в пробирку 1 см3 гексана, закрывают пробкой, интенсивно встряхивают в течение 1 мин, центрифугируют 10 мин. После расслоения жидкостей гексановый (верхний) слой удаляют, а ацетонитрильный (нижний) слой фильтруют через капроновый фильтр, используя медицинский шприц типа «Луер», в стеклянную виалу. Аликвотную часть (20 мм3) анализируют на жидкостном хроматографе в условиях, указанных в п. 9.4.4.

10.2.2. Выполняют измерение фонового содержания фталатов в объеме экстрагента, взятого на анализ. С этой целью 7,2 см3 смеси растворителей (метанол, гексан и изопропанол в объемном отношении 1,5:2,0:0,1), используемой для двойной экстракции фталатов из молока, переносят в стеклянную пробирку вместимостью 6 см3, высушивают в токе воздуха, сухой остаток растворяют в 2 см3 ацетонитрила. Раствор фильтруют через капроновый фильтр, используя медицинский шприц типа «Луер», в стеклянную виалу и аликвотную часть (20 мм3) анализируют на жидкостном хроматографе в условиях, указанных в п. 9.4.4. Измерение холостой пробы экстрагента выполняют при анализе каждой серии образцов молока.

10.2.3. Идентификацию диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков в анализируемой пробе и в растворах для идентификации ди(2-этилгексил)фталата, приготовленных по пп. 9.2.7 - 9.2.11.

11. Обработка результатов измерений

11.1. Массовые концентрации диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в молоке (мг/дм3) вычисляют по формуле:

Ci= (Si - Sхол)K, где

Ci - массовые концентрации диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в анализируемой пробе, мг/дм3;

Si - площадь пика диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в анализируемой пробе, е.о.п.;

Sхол - площадь пика диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил) фталата в холостой пробе, е.о.п.;

K - градуировочный коэффициент.

11.2.3а окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости С1, С2 (параллельных определений), для которых выполняется условие:

(1)

r - предел повторяемости. Значения предела повторяемости приведены в табл. 3.

Таблица 3

Значения пределов повторяемости, воспроизводимости и
критического диапазона при доверительной вероятности Р = 0,95

Наименование определяемого компонента, диапазон измерений, мг/дм3

Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в условиях повторяемости), r, %

Критический диапазон (относительное значение допускаемого расхождения между наибольшим и наименьшим четырех результатов измерений, полученных в одной лаборатории в условиях повторяемости), CR0,95(4), %

Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, %

Диметилфталат

от 0,1 до 4 вкл.

45

58

55

Диэтилфталат

от 0,2 до 4 вкл.

39

50

49

Дибутилфталат

от 0,2 до 4 вкл.

42

54

50

Бензилбутилфталат

от 0,2 до 4 вкл.

31

40

50

Ди(2-этилгексил)фталат

от 0,1 до 4 вкл.

25

32

43

При невыполнении условия (1) получают дополнительно еще два результата измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие:

(2)

CR0,95(4) - критический диапазон. Значения критического диапазона приведены в табл. 3. При невыполнении условия (2) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условия (1).

11.3. Расхождение между результатами измерений, полученных в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости:

(3)

C1 и C2 - результаты измерений массовой концентрации диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата, полученные в разных лабораториях - средние арифметические двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие (1).

При выполнении условия (3) приемлемы оба результата измерений, и в качестве окончательного может быть использовано их среднее арифметическое значение. Значение предела воспроизводимости приведено в табл. 3. При невыполнении условия (3) могут быть проведены процедуры проверки приемлемости согласно раздела 5 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

12. Оформление результатов измерений

Результат измерений представляют в виде ( ± Δ) мг/дм3, где

 - результат измерений, мг/дм3;

Δ - характеристика погрешности, мг/дм3 при Р = 0,95;

значение Δ рассчитывают по формуле:

где значение δ приведено в табл. 1.

13. Контроль качества результатов измерений

Обеспечение достоверности измерений в пределах лаборатории организуют и проводят путем проведения оперативного контроля процедуры измерений и контроля стабильности результатов измерений в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)-2002 и РМГ 76-2004.

Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.

13.1. Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений
с использованием метода добавок

Оперативный контроль процедуры измерений с использованием метода добавок проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры Кк с нормативом контроля К.

Результат контрольной процедуры Кк рассчитывают по формуле:

 - результат измерений массовой концентрации диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1);

С - результат измерений массовой концентрации диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1).

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

 - значения характеристики погрешности результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензилбутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно.

Примечание. Допустимо характеристику погрешности результатов измерений при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражения: Δл = 0,84Δ с последующим уточнением по мере накопления информации в процессе контроля стабильности результатов измерений.

Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:

При невыполнении условия (4) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (4) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.2. Алгоритм проведения контрольной процедуры
при контроле внутрилабораторной прецизионности

Образцами для контроля внутрилабораторной прецизионности являются пробы исследуемого молока (рабочие пробы).

При реализации контрольной процедуры получают два результата контрольных измерений (первичного  и повторного ) массовой концентрации диметилфталата, диэтилфталата, дибутилфталата, бензил-бутилфталата, ди(2-этилгексил)фталата в условиях внутрилабораторной прецизионности.

Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении следующего условия:

(5)

Значение предела внутрилабораторной прецизионности Rл приведено в табл. 4.

Таблица 4

Значение предела внутрилабораторной прецизионности
при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений, мг/дм3

Предел внутрилабораторной прецизионности (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в условиях внутрилабораторной прецизионности), Rл, %

Диметилфталат

от 0,1 до 4 вкл.

50

Диэтилфталат

от 0,2 до 4 вкл.

43

Дибутилфталат

от 0,2 до 4 вкл.

46

Бензилбутилфталат

от 0,2 до 4 вкл.

34

Ди(2-этилгексил)фталат

от 0,1 до 4 вкл.

35

При невыполнении условия (3) процедуру повторяют. При повторном превышении предела внутрилабораторной прецизионности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

338
Мне нравится
Комментировать Добавить в закладки

Комментарии могут оставлять только зарегистрированные пользователи.

Пожалуйста зарегистрируйтесь или авторизуйтесь на сайте.