На главную
На главную

Определение остаточных количеств пентиопирада в воде, почве, яблоках и яблочном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации пентиопирада вводе в диапазоне 0,005 - 0,05 мг/дм3 и в почве в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг, а также уровня его остаточных количеств в яблоках и яблочном соке в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг.

Обозначение: МУК 4.1.3099-13
Название рус.: Определение остаточных количеств пентиопирада в воде, почве, яблоках и яблочном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Статус: действует
Дата актуализации текста: 05.05.2017
Дата добавления в базу: 01.10.2014
Дата введения в действие: 08.08.2013
Утвержден: 08.08.2013 Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Опубликован: Роспотребнадзор (2014 г. )
Ссылки для скачивания:

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение
остаточных количеств пентиопирада
в воде, почве, яблоках и яблочном соке
методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3099-13

Москва
2014

Федеральная служба по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
пентиопирада в воде, почве, яблоках
и яблочном соке методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.3099-13

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (В.А. Калинин, Е.В. Довгилевич, А.В. Довгилевич, Н.В. Устименко, Е.Н. Щербинкина).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией но государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе но надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 30 мая 2013 г. № 1).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 8 августа 2013 г.

4. Введены в действие с момента утверждения

5. Введены впервые.

Содержание

1. Погрешность измерений. 3

2. Метод измерений. 4

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы.. 4

4. Требования безопасности. 7

5. Требования к квалификации операторов. 7

6. Условия измерений. 7

7. Подготовка к выполнению определений. 7

8. Отбор проб и хранение. 11

9. Подготовка проб и выполнение измерений. 11

10. Обработка результатов. 14

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений. 14

12. Оформление результатов. 14

13. Контроль качества результатов измерений. 14

Приложение. Полнота извлечения пентиопирада из воды, почвы, яблок и яблочного сока. 16

 

 

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере зашиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации

_________________ Г.Г. Онищенко

8 августа 2013 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пентиопирада
в воде, почве, яблоках и яблочном соке методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3099-13

Свидетельство о метрологической аттестации
от 24.04.2012 г. № 0117.24.04.12

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации пентиопирада в воде в диапазоне 0,005 - 0,05 мг/дм3 и в почве в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг, а также уровня его остаточных количеств в яблоках и яблочном соке в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Пентиопирад.

(RS)-N-[2-(1,3-диметилбутил)-3-тиенил]-1-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-4 карбоксамид.

Структурная формула:

Эмпирическая формула:C16H20F3N3OS.

Молекулярная масса: 359,4.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белый, без запаха.

Давление паров: 6,43×10-6 Па (25 °С).

Коэффициент распределения октанол-вода:

log KoW = 4,36 (pH 4); log KOW = 4,62 (pH 7); log Kow = 4,54 (pH 10).

Температура плавления: 108,7 °С.

Растворимость в воде (мг/дм3, при 20 °С): 7,53.

Растворимость в органических растворителях (г/дм3, 20 °С): ацетон - 557; н-гексан - 0,75; гептан - 0,74; дихлорметан - 531; ксилол - 42,7; толуол - 67,0; метанол - 402; этанол - 234,5; этилацетат - 349.

Стабилен в водных растворах при pH 3 - 10 и температуре 20 °С в низких концентрациях (менее 1 мг/дм3).

Краткая токсикологическая характеристика

Пентиопирад относится к мало опасным по острой оральной (ЛД50 для крыс более 2000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 2000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 ч) более 5 669 мг/м3). Не раздражает кожу и слизистую оболочку глаз. Не является мутагеном.

Область применения

Пентиопирад - системный фунгицид, ингибирует процесс дыхания грибов путем связывания с митохондриальным дыхательным комплексом II, останавливает прорастание спор, ингибирует рост мицелия и обладает сильным антиспоруляционным действием.

Пентиопирад используется для борьбы с паршой и мучнистой росой на яблонях с нормой расхода 0,375 - 1,125 л/га.

В России гигиенические нормативы не установлены.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2

Таблица 1

Метрологические параметры для пентиопирада

Анализируемый объект

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)

Показатель точности (граница относительной погрешности), ±δ, % при Р = 0,95

Стандартное отклонение повторяемости, σr, %

Предел повторяемости, r, %

Предел воспроизводимости, R, %

Норматив оперативного контроля точности, K, мг/кг (мг/дм3) (Р = 0,95, m = 2)

Вода

0,005 - 0,01 вкл

40

2,59

7,20

10,08

0,47 ∙ X*

0,01 - 0,05 вкл

30

0,69

1,93

2,70

0,36 ∙ X*

Почва

0,01 - 0,1 вкл

50

2,88

8,01

11,21

0,59 ∙ X*

Яблоки

0,01 - 0,1 вкл

50

2,03

5,64

7,90

0,59 ∙ X*

Яблочный сок

0,01 - 0,1 вкл

50

3,42

9.51

13,31

0,59 ∙ X*

______________

* X - среднее значение массовой концентрации пентиопирада в пробе (мг/дм3, мг/кг).

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для пентиопирада

Анализируемый объект

Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20

Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3)

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг

Полнота извлечения вещества, %

Стандартное отклонение, S, %

Доверительный интервал среднего результата, ±, %

Вода

0,005

0,005 - 0,05

95,98

1,67

0,75

Почва

0,01

0,01 - 0,1

84,55

3,63

1,44

Яблоки

0,01

0,01 - 0,1

89,32

3,04

1,27

Яблочный сок

0,01

0,01 - 0,1

91,34

2,90

1,24

2. Метод измерений

Метод основан на определении пентиопирада с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем и очистки экстракта на концентрирующих патронах № 1 и 2.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Весы аналитические класса точности - специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г

ГОСТ Р 53228-2008

Весы лабораторные общего назначения класса точности - средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности ±0,038 г

ГОСТ Р 53228-2008

Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 см3

ГОСТ 1770-74

Микрошприц объемом 100 мм3 со шкалой деления 0,001 см3 и погрешностью менее 1 % от номинального объема

 

Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 см3

ГОСТ 29227-91

рН-метр/милливольтметр с диапазоном измерения 0...14 pH; ±1999 мВ

 

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф жидкостный, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °С, с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ

 

Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 см3

ГОСТ 1770-74

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Пентиопирад, CAS 183675-82-3, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,9 %

 

Ацетон, осч

ТУ 6-09-3513-86

Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм

ТУ 6-09-2167-84

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости)

Гелий, очищенный

ТУ-51-940-80

n-Гексан, хч

ТУ 6-09-3818-89

Калий марганцово-кислый, чда

ГОСТ 20490-75

Кальций хлористый, ч

ТУ 6-09-4711-81

Кислота муравьиная, чда

ГОСТ 5848-73

Кислота соляная, хч

ГОСТ 3118-77

Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции с гидрофобным сорбентом с размером частиц 63 - 200 мкм с привитыми октальными (С8) группами (объем - 1 см3, масса сорбента - 0,6 г) (патрон № 1)

ТУ 4215-002-05451931-94

Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции со слабоосновным сорбентом с размером частиц 63 - 200 мкм с привитыми аминогруппами (объем - 1 см3, масса сорбента - 0,6 г) (патрон № 2).

ТУ 4215-002-05451931-94

Метилен хлористый, хч

ТУ 6-09-2662-77

Натрий серно-кислый, безводный, хч

ГОСТ 4166-76

Натрий хлористый, хч

ГОСТ 4233-77

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Алонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами

ГОСТ 25336-82

Аппарат для встряхивания проб с возвратно-поступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту

 

Банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см3

 

Ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм3

 

Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная

ГОСТ 5556-81

Воронки делительные на 250 см3

ГОСТ 25336-82

Воронки лабораторные стеклянные

ГОСТ 25336-82

Испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм3 и с диапазоном температур от 20 до 100 °С

 

Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1 000 см3

ГОСТ 25336-82

Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 см3 и 4 000 см3 ТС

ТУ 92-891.029-91

Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18

 

Насос диафрагменный, химически стойкий на 100 %, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм3/мин

 

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 20,0 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С8

 

Сито лабораторное с полотном из латуни или нержавеющей стали с размером ячеек 1 мм

ГОСТ 3826-82 и ГОСТ 6613-86

Стаканы стеклянные, термостойкие объемом 50 - 500 см3

ГОСТ 25336-82

Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4 000 см и приемной конической колбой объемом 1 000 см3

 

Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г

ТУ-6-09-1678-86

Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм

 

Центрифуга лабораторная, настольная с максимальным рабочим числом оборотов 4 000 об./мин, с рабочим объемом ротора 200 см3 × 4 ячейки, выбираемый временной диапазон работы от 0 до 100 минут и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 см3

 

Шприц инъекционный однократного применения объемом 10 см3

ГОСТ 24861-91 (ИСО 7886-84)

Примечание. Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-90 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С, относительной влажности не более 80 % и нормальном атмосферном давлении;

• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению определений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов № 1 и 2 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах № 1 и 2, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.

7.1.2. Очистка ацетона

Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцово-кислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.

7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

7.1.4. Очистка хлористого метилена

Хлористый метилен промывают равным объемом 5 %-го раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 ч. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0 °С, отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1. Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1. Приготовление 0,1 %-го водного раствора муравьиной кислоты. В мерную колбу объемом 1 000 см3 помещают 500 см3 очищенной воды, прибавляют 1,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.1.2. Приготовление 0,1 н раствора соляной кислоты. Пипеткой отбирают 8,2 см3 концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1 000 см3, куда предварительно наливают около 500 см3 очищенной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.2. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ

Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил и 0,1 %-й водный раствор муравьиной кислоты.

В плоскодонную колбу объемом 1 000 см3 помещают 600 см3 ацетонитрила и 350 см3 0,1 %-го водного раствора муравьиной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 см3/мин в течение 5 мин, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.

7.2.3. Приготовление градуировочных растворов

7.2.3.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией пентиопирада 1,0 мг/см3. Взвешивают 50 мг пентиопирада в мерной колбе объемом 50 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.3.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией пентиопирада 10,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.3.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией пентиопирада 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 при перемешивании. Стандартный раствор № 3 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.3.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией пентиопирада 0,5 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 при перемешивании. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.3.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией пентиопирада 0,2 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 50 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 при перемешивании. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.3.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией пентиопирада 0,1 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 ири перемешивании. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.3.7. Стандартные растворы пентиопирада с концентрацией 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в образцы. Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 пентиопирада и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации пентиопирада в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по четырем растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4. Подготовка концентрирующего патрона № 2 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения пентиопирада на нем

7.4.1. Подготовка концентрирующего патрона № 2 для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон № 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 ацетона, 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.4.2. Проверка хроматографического поведения пентиопирада на концентрирующем патроне № 2

Из стандартного раствора пентиопирада в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/см3, отбирают 1 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см3 ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 см3 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Исходный концентратор обмывают последовательно двумя порциями по 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие пентиопирад, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.

Изучение поведения пентиопирада на концентрирующих патронах № 2 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

7.5. Подготовка концентрирующего патрона № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения пентиопирада на нем

7.5.1. Подготовка концентрирующего патрона № 1 для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 2:1 и 10 см3 воды. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.5.2. Проверка хроматографического поведения пентиопирада на концентрирующем патроне № 1

Из стандартного раствора пентиопирада в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/см3, отбирают 1 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 см3 воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Исходный концентратор обмывают последовательно 10 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, 10 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 и двумя порциями по 10 см3 смеси ацетонитрила с 0,1 %-м водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 60:35. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие пентиопирад, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.

Изучение поведения пентиопирада на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

7.6. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °С и скорости потока подвижной фазы 1 см3/мин 3 - 4 ч.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 17.4.3.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 27572-87 «Яблоки свежие для промышленной переработки. Технические условия», ГОСТ 656-79 «Соки плодовые и ягодные натуральные».

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более 10 суток.

Для длительного хранения проб почвы, почву подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Пробы яблок хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре от 0 до 4 °С не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре - 18 °С до 2 лет. Перед анализом яблоки размораживают и измельчают на терке.

Пробы яблочного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более 5 суток.

9. Подготовка проб и выполнение измерений

9.1. Вода

9.1.1. Экстракция

Пробу воды объемом 100 см3 помещают в делительную воронку объемом 250 см3, прибавляют туда 10 г хлористого натрия. Пентиопирад экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 см3, встряхивая каждый разделительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) объединяют в концентраторе объемом 250 см3, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.2. Почва

9.2.1. Экстракция

Пробу почвы весом 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см3, прибавляют 10 см3 дистиллированной воды, 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют в течение 4 мин на скорости 4 000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через фильтр средней плотности в коническую колбу объемом 250 см3 с 10 г сухого хлористого натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см3 ацетонитрила и помещая каждый раз на 5 мин в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют, экстракты фильтруют и объединяют в конической колбе объемом 250 см3 с 10 г сухого хлористого натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 мин.

Объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку объемом 250 см3 (не растворившуюся соль оставляют в колбе), оставляют до полного разделения слоев и нижний (водный) слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 см3 и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта на концентрирующих патронах № 1 и 2.

9.2.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2

Сухой остаток, полученный по п. 9.2.1, растворяют в 2 см3 ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют туда 8 см3 гексана, перемешивают и вносят на заранее подготовленный патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3. Исходный концентратор обмывают 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 и вносят на патрон, элюат объединяют с предыдущим. Объединенный элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.2.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1

Сухой остаток, полученный по п. 9.2.2, растворяют в 1 см3 ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 см3 воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают последовательно 10 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4 и 10 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 и последовательно вносят на патрон, элюаты отбрасывают.

Пентиопирад элюируют 10 см3 смеси ацетонитрила с 0,1 %-м водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 60:35. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 'С.

Сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.3. Яблоки

9.3.1. Экстракция

Образец измельченных яблок массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют туда 10 см3 0,1 н соляной кислоты, 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Ацетонитрильный экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 250 см3 с 10 г сухого хлористого натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см3 ацетонитрила и помещая каждый раз на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракты фильтруют и объединяют в конической колбе объемом 250 см3 с 10 г сухого хлористого натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 мин.

Объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку объемом 250 см3 (не растворившуюся соль оставляют в колбе), оставляют до полного разделения слоев и нижний (водный) слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 см3 и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2 и по п. 9.2.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.

После очистки элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.4. Яблочный сок

9.4.1. Экстракция

Образец яблочного сока массой 20 г помещают в делительную воронку объемом 250 см3, прибавляют туда 10 мл 0,1 н соляной кислоты, 20 см3 насыщенного раствора хлористого натрия, 30 см3 ацетонитрила и интенсивно встряхивают воронку 2 мин. После полного разделения фаз нижний (водный) слой переносят в плоскодонную колбу объемом 100 см3, а верхний ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор объемом 250 см3 через слой безводного сульфата натрия. Водный слой возвращают в делительную воронку и повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 30 см3 ацетонитрила и встряхивая делительную воронку по 2 мин. Ацетонитрильные экстракты собирают в концентратор объемом 250 см3, пропуская их через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2 и по п. 9.2.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.

После очистки элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.5. Условия хроматографирования

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф жидкостный, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °С, с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18.

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 20,0 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С8.

Температура колонки: 30 °С.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,1 %-й водный раствор муравьиной кислоты в соотношении 650:350.

Длина волны: 240 нм.

Время удерживания пентиопирада: 10,014 мин ± 3 %.

Объем вводимой пробы: 20 мм3.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.

10. Обработка результатов

Содержание пентиопирада рассчитывают по формуле:

X - содержание пентиопирада в пробе, мг/кг или мг/дм3;

Sст - высота (площадь) пика стандарта, мм;

Sпр - высота (площадь) пика образца, мм;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см3;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

m - масса анализируемого образца, г (см3);

Р - содержание пентиопирада в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

(1)

X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8σr.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

 мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

 - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг (или мг/дм3*

______________

* - 0,01 мг/кг (или мг/дм3) - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для пентиопирада проводят при смене основного градуировочного раствора № 1 каждые 6 месяцев, при смене основных градуировочных растворов № 2, 3, 4, 5 и 6 - каждый месяц, а также в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание пентиопирада в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/см3.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация пентиопирада контрольного измерения, мкг/см3;

С - известная концентрация градуировочного раствора пентиопирада в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

3,22 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (А) превышает 3,22 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов пентиопирада, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок

Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:

  - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

 - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

(2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

(3)

X1, Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Приложение

Полнота извлечения пентиопирада из воды, почвы, яблок и яблочного сока
(5 повторностей для каждой концентрации, Р = 0,95)

Среда

Внесено пентиопирада, мг/кг (мг/дм3)

Обнаружено пентиопирада, мг/кг (мг/дм3)

Полнота определения, %

Вода

0,005

0,00475 ± 0,0001

95,0

0,01

0,00956 ± 0,0003

95,6

0,02

0,01928 ± 0,0002

96,4

0,05

0,0485 ± 0,0003

96,9

Почва

0,01

0,0083 ± 0,0002

82,6

0,02

0,0165 ± 0,0006

82,6

0,05

0,0431 ± 0,0018

86,2

0,10

0,0875 ± 0,0033

87,5

Яблоки

0,01

0,0088 ± 0,0002

88,4

0,02

0,0180 ± 0,0005

89,8

0,05

0,0452 ± 0,0009

90,4

0,10

0,0887 ± 0,0020

88,7

Яблочный сок

0,01

0,0093 ± 0,0002

92,8

0,02

0,0178 ± 0,0007

89,2

0,05

0,0458 ± 0,0020

91,6

0,10

0,0918 ± 0,0030

91,8

 

 

81
Мне нравится
Комментировать Добавить в закладки

Комментарии могут оставлять только зарегистрированные пользователи.

Пожалуйста зарегистрируйтесь или авторизуйтесь на сайте.