На главную
На главную

Измерение остаточных количеств мепикват хлорида в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Методические указания устанавливают метод измерения массовой доли мепикват хлорида в воде в диапазоне 0,001 - 0.01 мг/дм3, в почве 0,025 - 0,25 мг/кг, в зерне зерновых, семенах и масле рапса в диапазоне концентраций 0,02 - 0,2 мг/кг, в зеленой массе и соломе зерновых — 0,05 - 0.5 мг/кг.

Обозначение: МУК 4.1.3020-12
Название рус.: Измерение остаточных количеств мепикват хлорида в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур, семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Статус: действует
Дата актуализации текста: 05.05.2017
Дата добавления в базу: 01.10.2014
Дата введения в действие: 03.07.2012
Утвержден: 03.07.2012 Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Опубликован: Роспотребнадзор (2013 г. )
Ссылки для скачивания:

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Р
оссийской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций действующих
веществ пестицидов в воде, почве, зеленой
массе, зерне и соломе зерновых культур,
семенах и масле рапса, зерне гороха,
семенах и масле льна

Сборник методических указаний
по методам контроля
МУК 4.1.3020-12; 4.1.3022-12;
4.1.3042-12; 4.1.3045-12

Москва 2013

1. Разработаны сотрудниками ГНУ «Всероссийский НИИ защиты растений» Россельхозакадемии, ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии им. Д.И. Менделеева».

2. Введены в действие с момента утверждения.

3. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Погрешность измерений. 2

2. Метод измерений. 3

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы.. 3

4. Отбор и хранение проб. 5

5. Подготовка к проведению измерений. 5

6. Проведение определения. 7

7. Условия измерений. 9

8. Проверка приемлемости результатов параллельных определений. 10

9. Оформление результатов. 10

10. Контроль качества результатов измерений. 10

11. Требования безопасности. 11

12. Требования к квалификации оператора. 12

13. Разработчики. 12

 

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,

Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

3 июля 2012 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение остаточных количеств мепикват хлорида
в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых
культур, семенах и масле рапса методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии
с масс-спектрометрическим детектированием

Методические указания
МУК 4.1.3020-12

Свидетельство о метрологической аттестации от 9.04.2012 № 01.5.04.072/01.00043/2012.

Настоящие методические указания устанавливают метод измерения массовой доли мепикват хлорида в воде в диапазоне 0,001 - 0,01 мг/дм3, в почве 0,025 - 0,25 мг/кг, в зерне зерновых, семенах и масле рапса в диапазоне концентраций 0,02 - 0,2 мг/кг, в зеленой массе и соломе зерновых - 0,05 - 0,5 мг/кг.

Название действующего вещества по ICO: мепикват хлорид.

Название действующего вещества по IUPAC: 1,1-диметилпиперидин.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: С7Н16ClN.

Молекулярная масса: 149,7.

Гигроскопичные кристаллы без цвета и запаха. Температура плавления: > 300 °С. Давление паров при 20 °С < 1 ∙ 10-11 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow log P = -3,55 (рН 7).

Растворимость в воде при 20 °С > 50 % (вес); в органических растворителях (г/100 мл при 20 °С) - в метаноле 48,7, n-октаноле - 0,962, ацетонитриле - 0,280, дихлорметане - 0,051, ацетоне - 0,002, в толуоле, n-гептане и этилацетате - < 0,001.

Стабилен в водных растворах (30 дней при рН 3, 5, 7 и 9, 25 °С). Стабилен при воздействии солнечного света.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая оральная токсичность (LD50) для крыс - 270 мг/кг, подкожная > 1160 мг/кг, не ирритант для кожи и глаз (кролики); ингаляционная токсичность (LC50) для крыс - более 2,84 мг/дм3 воздуха (7 ч). Класс токсичности по ВОЗ - III. DT50 в почве 11 - 40 дней при 20 °С.

Область применения препарата - регулятор роста растений.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Диапазон измерений, массовая доля, мг/кг (мг/дм3)

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), σr„ %

Показатель промежуточной прецизионности (относительное среднеквадратическое отклонение в условиях вариации факторов «время», «оператор» в одной лаборатории), σRл, %

Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), σR, %

Показатель точности* (границы относительной погрешности при вероятности Р = 0,95), ± δ, %

1

2

3

4

5

Вода

от 0,001 до 0,01 вкл.

7

9

12

25

Почва

от 0,025 до 0,25 вкл.

7

9

12

25

Зеленая масса

от 0,05 до 0,5 вкл.

6

8

11

24

Солома

от 0,05 до 0,5 вкл.

6

8

11

24

Зерно

от 0,02 до 0,2 вкл.

6

8

11

24

Семена рапса

от 0,02 до 0,2 вкл.

6

8

11

24

Масло рапса

от 0,02 до 0,2 вкл.

6

7

8

16

* Соответствует расширенной неопределенности Uотн при коэффициенте охвата k = 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Объект анализа

Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3)

Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)

Среднее значение определения, %

Стандартное отклонение, S, %

Доверительный интервал среднего результата, ± %

Вода

0,001

0,001 - 0,01

97

3,6

3,3

Почва

0,025

0,025 - 0,25

90

4,9

4,5

Зеленая масса

0,05

0,05 - 0,5

85

4,2

3,8

Солома

0,05

0,05 - 0,5

83

4,3

3,9

Зерно

0,02

0,02 - 0,2

94

4,0

3,6

Семена рапса

0,02

0,02 - 0,2

88

5,2

4,7

Масло рапса

0,02

0,02 - 0,2

90

4,8

4,4

2. Метод измерений

Методика основана на определении мепикват хлорида методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием после его извлечения из образцов органическим растворителем с последующей очисткой на патронах с оксидом алюминия. Мепикват хлорид идентифицируют по абсолютному времени удерживания. Массовую концентрацию мепикват хлорида в пробе определяют в режиме автоматической обработки данных по построенной ранее градуировочной характеристике.

Избирательность метода определения мепикват хлорида достигается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа с масс-спектрометрическим детектированием.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Хромато-масс-спектрометр Agilent Triple Quard LC/MS модель 6460 производства фирмы Agilent Technologies, состоящий из:

- высокоэффективного жидкостного хроматографа Agilent 1200;

- масс-спектрометра Agilent модели Triple Quard LC/MS 6460, оснащенного системой ионизации «электроспрей»

Весы аналитические ВЛА-200

ГОСТ 24104-2001

Весы технические ВЛКТ-500

ГОСТ 24104-2001

Колбы мерные на 10, 100, 1000 см3

ГОСТ 23932-90

Микродозаторы одноканальные «BIOHIT» переменного объема от 200 до 1000 мм3 и от 1 до 5 см3, Финляндия

Номер в Госреестре средств измерений 36152-07

Пипетки градуированные

ГОСТ 29227-91

Цилиндры мерные на 50 и 100 см3

ГОСТ 23932-90

рН-метр универсальный ЭВ-74

ГОСТ 22261-76

Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетонитрил для ВЭЖХ, сорт 1

ТУ 6-09-3534-87

Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная)

ГОСТ Р 52501-2005

Изопропиловый спирт, хч

ТУ 6-09-402-75

Карбонат магния (магний углекислый основной водный), ч

ГОСТ 6419-78

Калия перманганат, хч

ГОСТ 20490-75

Кислота муравьиная Reagent Grade, № G2453-85060 по каталогу Agilent

Кислота соляная, хч

ГОСТ 3118-77

Мепикват хлорид, аналитический стандарт с содержанием д.в. 98,0 % (BASF)

Метилен хлористый, хч

ТУ 2631-44493179-98

Натрия гидроксид, чда

ГОСТ 4328-77

Оксид алюминия для хроматографии, ч, размер частиц 100 - 200 мкм, 1-й степени активности по Брокману, нейтральный

ТУ 6-09-426-75

Подвижные фазы для ВЭЖХ:

- подвижная фаза А: вода + муравьиная кислота (1000 + 1, по объему)

- подвижная фаза Б: метанол + муравьиная кислота (1000 + 1, по объему)

Спирт метиловый, хч

ГОСТ 6995-77

Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Колонка Zorbax Eclipse XDB-C18 (150×4,6) мм, 5 мкм

Аппарат для встряхивания

ТУ 64-1-1081-73

Ванна ультразвуковая УЗВ-1.3

ГОСТ Р МЭК 60335-2-15-98

Воронки лабораторные В-75-110

ГОСТ 25 336-82

Воронки делительные ВД-3-250

ГОСТ 8613-75

Гомогенизатор

МРТУ 42-1505-63

Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС

ГОСТ 10384-72

Колбы круглодонные на шлифах КШ10 и КШ250 29-32 ТС

ГОСТ 10384-72

Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная зерновая ЛМЗ

ТУ 1-01-0593-79

Насос водоструйный

ГОСТ 25336-82

Патроны Диапак С (БиоХимМак СТ), 0,4 г (номер по каталогу 22.0300)

Ротационный испаритель вакуумный Buchi R-205 (Швейцария)

Стеклянные флаконы (виалы) для градуировочных и анализируемых растворов вместимостью 1,8 см3 с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками фирмы Supelco, номер по каталогу 2-6951

Центрифуга производства фирмы Eppendorf, Германия

Шейкер Multi Reax производства фирмы Heidolph, Германия

Примечание. Допускается применение оборудования иных производителей с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79), а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб»; ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые. Отбор проб зерна»; ГОСТ 28168- 89 «Почвы. Отбор проб»; ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Семена рапса хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в герметично закрытой стеклянной таре в течение 2 месяцев. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.

5. Подготовка к проведению измерений

5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Перед началом работы проверяют чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см3 растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объёма 1,0 см3 и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

5.2. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку (Zorbax Eclipse XDB-C18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,6 см3/мин) до стабилизации нулевой линии в течение 1 - 2 ч.

5.3. Приготовление растворов для подготовки проб

Раствор 2М HCl: в мерную колбу на 1000 см3 вносят 197 г 36 %-й соляной кислоты, добавляют бидистиллированную воду до метки и перемешивают.

Раствор 6М HCl: в мерную колбу на 1000 см3 вносят 605 г 36 %-й соляной кислоты, добавляют бидистиллированную воду до метки и перемешивают.

Смесь 6М HCl-MeOH (9:1): в конической колбе на 1000 см3 вносят 900 см3 6М соляной кислоты и добавляют 100 см3 метанола.

Экстрагент 1: в колбе на 1000 см3 смешивают 650 см3 бидистиллированной воды, 350 см3 метанола и 50 см3 2М НСl.

Элюент 1 для очистки на патроне: в колбе на 500 см3 смешивают 100 см3 метанола с 400 см3 ацетонитрила (1:4), элюента 2 - смешивают 50 см3 метанола с 450 см3 ацетонитрила (1:9).

Раствор гидроксида натрия : в мерную колбу на 100 см3 помещают 4 г гидроксида натрия, растворяют в 100 см3 дистиллированной воды, доводят водой до метки и перемешивают.

Подвижная фаза А: в мерную колбу на 1000 см3 помещают 1000 см3 бидистиллированной деионизованной воды, затем микродозатором вносят 1 см3 муравьиной кислоты.

Подвижная фаза Б: в мерную колбу на 1000 см3 помещают 1000 см3 метилового спирта, затем микродозатором вносят 1 см3 муравьиной кислоты.

Смесь метанола с ацетонитрилом: в колбе на 100 см3 с помощью мерных цилиндров смешивают 20 см3 метанола с 80 см3 ацетонитрила (смесь 1:4) и 10 см3 метанола с 90 см3 ацетонитрила (смесь 1:9).

5.4. Приготовление растворов для градуировки

Основной раствор мепикват хлорида с массовой концентрацией 10 мкг/см3.

Точную навеску мепикват хлорида массой (10 ± 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и добавляют около 90 см3 бидистиллированной воды. Содержимое колбы тщательно перемешивают, выдерживают 20 мин при температуре 20 °С, после чего добавляют воду до метки. Затем 10 см3 полученного раствора с концентрацией 100 мкг/см3 вносят в мерную колбу на 100 см3 и доводят до метки бидистиллированной водой - получен основной раствор с концентрацией 10 мкг/см3.

Градуировочные растворы с концентрациями 1,0; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 и 25,0 нг/см3 готовят из основного раствора методом последовательного разбавления, используя подвижную фазу А.

Раствор 1 с концентрацией мепикват хлорида 25 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,25 см3 основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А.

Раствор 2 с концентрацией мепикват хлорида 20 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят ОД см3 основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А.

Раствор 3 с концентрацией мепикват хлорида 15 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,15 см3 основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А.

Раствор 4 с концентрацией мепикват хлорида 10 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 5,0 см3 раствора № 2 и доводят объем до метки подвижной фазой А.

Раствор 5 с концентрацией мепикват хлорида 5 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 5,0 см3 раствора № 4 и доводят объем до метки подвижной фазой А.

Раствор 6 с концентрацией мепикват хлорида 1 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1 см3 раствора № 4 и доводят объем до метки подвижной фазой А.

Основной и градуировочные растворы можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение месяца.

Для внесения в контрольный образец при определении полноты извлечения используют основной раствор, разбавленный ацетонитрилом до нужного уровня концентраций методом последовательного разбавления. Растворы для внесения в масло готовят из основного раствора с концентрацией 100 мкг/см3 методом последовательного разбавления по объему изопропиловым спиртом.

5.5. Построение градуировочного графика

Для каждого из градуировочных растворов регистрируют хроматограммы в условиях, указанных в п. 7 и определяют абсолютное время удерживания и площадь пика мепикват хлорида (в усл. ед.), соответствующего MRM (114→98). Одновременно в режиме автоматической обработки данных определяют соотношение площадей пиков, соответствующих MRM (11498) и MRM (114→58) (S98/S58).

В режиме автоматической обработки данных строят градуировочную характеристику (площадь пика - концентрация мепикват хлорида в растворе). Для этого в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций).

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента:

 где

λконтр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, %. (λконтр. = 10 % при Р = 0,95).

5.6. Подготовка патронов с оксидом алюминия для очистки экстракта

В картридж емкостью 10 см3 для твердофазной экстракции вносят 2,5 г оксида алюминия 2-й степени активности и уплотняют центрифугированием 10 мин при 8000 об./мин.

Приготовление оксида алюминия 2-й степени активности: к 97 г Al2O3 (активность 1, влажность 0 %) добавляют 3 см3 воды и перемешивают в шейкере 2 ч при 300 rpm.

Оксид алюминия готовят в день использования и хранят в эксикаторе.

5.7. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

6. Проведение определения

6.1. Определение мепикватхлорида в воде

Подщелачивают 25 см3 воды 1М раствором гидроксида натрия до рН 9 и пропускают через картридж с силикагелем (Диапак С) со скоростью 3 - 4 см3/мин. Мепикват хлорид элюирут от 5 см3 смеси 6М НСl-МеОН (9:1). Элюат выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 5 см3 смеси (метиловый спирт : подвижная фаза А в соотношении 1:9) и 10 мм3 раствора вводят в жидкостный хроматограф.

6.2. Извлечение мепикват хлорида из почвы

Навеску почвы (5 ± 0,1) г помещают в коническую колбу емкостью 250 см3 и добавляют 50 см3 дистиллированной воды. После перемешивания на аппарате для встряхивания в течение 5 мин в почвенную вытяжку добавляют карбонат магния до получения нейтральной реакции. В полученную смесь добавляют 100 см3 хлористого метилена и тщательно встряхивают. Затем ее выдерживают в ультразвуковой ванне в течение 10 мин и декантируют в делительную воронку на 250 см3 через стеклянную воронку с ватным фильтром. После разделения фаз нижний слой переносят в другую делительную воронку (верхний слой отбрасывают), добавляют к нему 50 см3 разбавленной соляной кислоты (125 см3 кислоты и 825 см3 воды) и энергично встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев водную фазу (верхний слой) собирают в колбу емкостью 100 см3. К органической фазе (оставшийся нижний слой) повторно добавляют 50 см3 разбавленной соляной кислоты. После разделения слоев водную фазу собирают в ту же колбу, органическую фазу отбрасывают. Из объединенной водной фазы (100 см3) отбирают аликвоту 2 см3 (1/50 экстракта) и упаривают ее на ротационном испарителе при температуре водяной бани 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.

6.3. Извлечение мепикват хлорида из зерна

Навеску измельченного зерна массой (5 ± 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 см3 и экстрагируют мепикват хлорид 100 см3 экстрагента № 1 (вода-метанол-2М НСl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 см3 бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 см3 смеси и центрифугируют 5 мин при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 4,0 см3 супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.

6.4. Извлечение мепикват хлорида из зеленой массы и соломы зерновых культур

Навеску измельченной зеленой массы или соломы массой (5 ± 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 см3 и экстрагируют мепикват хлорид 100 см3 экстрагента № 1 (вода-метанол-2М HCl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 см3 бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 см3 смеси и центрифугируют 5 мин при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 2,5 см3 супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.

6.5. Извлечение мепикват хлорида из семян рапса

Навеску измельченных семян массой (5 ± 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 см3 и экстрагируют мепикват хлорид 100 см3 экстрагента № 1 (вода-метанол-2М НСl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 см3 бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 см3 смеси и центрифугируют 5 мин при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 2,0 см3 супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.

6.6. Извлечение мепикват хлорида из масла рапса

Навеску масла массой (5 ± 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 см3 и экстрагируют мепикват хлорид 100 см3 экстрагента № 1 (вода-метанол-2М HCl в соотношении 65:30:5) на ультразвуковой установке в течение 10 мин. Смесь помещают в делительную воронку емкостью 250 см3 и промывают двумя порциями хлористого метилена по 50 см3, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 - 3 мин и собирая нижний водный слой. К водной фазе добавляют 100 см3 бидистиллированной воды и энергично встряхивают в течение 1 мин. Аликвоту полученного водного экстракта 2,0 см3 выпаривают досуха на роторном испарителе при 70 °С.

Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.

6.7. Очистка на патронах с оксидом алюминия

Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов по пп. 6.2 - 6.6, растворяют в 1 см3 метанола в ультразвуковой ванне в течение 0,5 мин и добавляют 4 см3 ацетонитрила. Полученный раствор количественно переносят в подготовленный картридж для твердофазной экстракции и дают ему впитаться. Промывают картридж 1 раз 5 см3 смеси метанол-ацетонитрил (1:4), затем 3 раза по 5 см3 смесью метанол-ацетонитрил (1:9). Элюат от 4 промывок собирают в грушевидную колбу емкостью 100 см3. Раствор упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси метиловый спирт:подвижная фаза А (1:9 по объему) и 10 мм3 раствора вводят в жидкостный хроматограф.

7. Условия измерений

7.1. Хроматографические условия измерений

Колонка: Zorbax Eclipse XDB-C18 (150×4,6) мм, 5 мкм.

Температура термостата колонки (30 ± 1) °С.

Подвижная фаза А: вода + муравьиная кислота (1000 + 1, v/v).

Подвижная фаза Б: метанол + муравьиная кислота (1000 + 1, v/v).

Скорость потока элюента: 0,4 мл/мин.

Объем вводимой пробы 10 мм3.

Режим элюирования: градиентный:

Время, мин

% А

% В

0

100

0

0,1

100

0

4,0

10

90

8,0

10

90

8,1

100

0

19,0

100

0

7.2. Масс-спектрометрические условия измерений

Тип ионного источника

ESI positive polarity (электроспрей)

Режим сканирования

Multiple reaction monitoring (MRM)

114→98 (основной)

114→58 (подтверждающий)

Напряжение на фрагменторе, v

135

Параметры работы ионного источника:

Gas temperature, °C

350

Gas flow, л/мин

10

Nebulizer, psi

35

Sheath gas temperature, °C

350

Sheath gas flow, л/мин

10

Capillary, v

3500

Nozzle voltage, v

2000

7.3. Обработка результатов анализа

Анализ проводят в тех же условиях, в которых проводили градуировку прибора.

Каждый раствор хроматографируют не менее 2 раз (параллельные определения). Растворы анализируют непосредственно друг за другом.

Мепикват хлорид идентифицируют по абсолютному времени удерживания, определенному ранее при градуировке (±0,3 мин). В режиме автоматической обработки данных определяют площади пиков мепикват хлорида (в усл. ед.), соответствующих MRM (114→98) и MRM (114→58). Соотношение S98/S58 не должно отличаться от найденного при градуировке более чем на 15 %.

Массовую концентрацию (Сх, мкг/см3) мепикват хлорида в каждом из анализируемых растворов определяют в режиме автоматической обработки данных по построенной ранее градуировочной характеристике.

Содержание мепикват хлорида в исследуемых образцах (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

 где

Сх - концентрация мепикват хлорида, найденная по градуировке, мкг/см3;

V - объём пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;

А1 - аликвота анализируемого экстракта (2,0 см3 - для рапса и почвы, 2,5 см3 - для зеленой массы и соломы, 4 см3 - для зерна);

А2 - общий объем экстракта (200 см3 - для рапса, зерна, зеленой массы и соломы и 100 см3 - для почвы);

Р - навеска анализируемого образца, г (см3 для воды).

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор мепикват хлорида 25 нг/см3, разбавляют подвижной фазой А для ВЭЖХ.

8. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:

 где                                                 (1)

X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (r = 2,8σr).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

9. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(Х ± Δ) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

 где

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0,02 мг/кг*, где «*» - 0,02 мг/кг - предел обнаружения мепикват хлорида в зерне).

10. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

10.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

10.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:

, где

± Δл,Х (±Δл,Х') - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

Δт = ±0,84Δ, где

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

 где

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

Кк = Х' - Х - Сд, где

X', X, Сд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|Кк| ≤ К,                                                               (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

10.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предел воспроизводимости

 где                                                (3)

X1, Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

11. Требования безопасности

11.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф с масс-спектрометрическим детектором.

11.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленные ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

12. Требования к квалификации оператора

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием, ознакомленный с руководством по эксплуатации прибора, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 10.

13. Разработчики

Долженко В.И., Цибульская И.А., Берестецкий А.О. (ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений» Россельхозакадемии, Санкт-Петербург).

Крылов А.И., Лопушанская Е.М. (ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии им. Д.И. Менделеева», Санкт-Петербург).

192
Мне нравится
Комментировать Добавить в закладки

Комментарии могут оставлять только зарегистрированные пользователи.

Пожалуйста зарегистрируйтесь или авторизуйтесь на сайте.