Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав
потребителей
и благополучия человека
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных
количеств химических веществ
в объектах окружающей среды, атмосферном
воздухе, воздухе рабочей зоны
и сельскохозяйственной продукции
Сборник
методических указаний
МУК
4.1.1960, 4.1.1961, 4.1.1963
- 4.1.1980-05
1. Разработаны Московской сельскохозяйственной академией им.
К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Токсикология
пестицидов и агрохимикатов» (Калинин В.А., Калинина Т.С., Рыбакова О.И.,
Калинин А.В.).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по
санитарно-гигиеническому нормированию Минздрава России (протокол № 1 от 31
марта 2005 г.).
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом
Российской Федерации, руководителем Федеральной службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей и благополучия человека Главным государственным
санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 21 апреля 2005 г.
4. Введены в действие с 1 июля 2005 г.
5. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
______________________
Г.Г. Онищенко
21
апреля 2005 г.
Дата
введения: 1 июля 2005 г.
|
4.1. МЕТОДЫ
КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных
количеств пираклостробина
в зерне, соломе и зеленой массе зерновых
колосовых культур методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии
Методические указания
МУК 4.1.1974-05
Название действующего вещества по ИСО: пираклостробин.
Название действующего вещества по ИЮПАК: метил N-{2-[1-(4-хлорфенил)-1H-пиразол-3-илоксиметил]фенил}(N-метокси)карбамат.
Структурная формула:

Эмпирическая формула: C19H18ClN3O4.
Молекулярная масса: 387,8.
Химически чистый пираклостробин представляет собой белый или
светло-бежевый кристаллический порошок без запаха.
Температура плавления: 63,7 - 65,2 °С.
Давление паров 2,6×10-5 мПа (при 20 °С).
Коэффициент распределения октанол-вода KowlogP
3,99 (22 °С).
Растворимость в воде 1,9 мг/л (при 20 °С).
Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °С):
ацетон - более 200, ацетонитрил - более 980, изопропанол - 40, метанол - 140.
Стабилен в течение более 30 дней при рН 5,7 и температуре 25
°С; подвержен фотолизу в воде - ДТ50 составляет менее 2 часов.
Краткая токсикологическая характеристика:
Пираклостробин относится к малоопасным по острой оральной (СД50 для
крыс - более 5000 мг/кг), дермальной токсичности (СД50 для крыс -
более 2000 мг/кг) и умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (СК50
4 ч для крыс 4000 - 7000 мг/м3). Он не вызывает раздражения
слизистых оболочек глаз и кожи и не обладает мутагенным, тератогенным,
эмбриотоксическим, канцерогенным действием.
Гигиенические нормативы: МДУ в зерне хлебных злаков 0,1
мг/кг.
Область применения препарата
Пираклостробин - фунгицид из группы стробилуринов
контактного и глубинного действия с длительным защитным эффектом.
Высокоэффективен против возбудителей ложной и мучнистой настоящей росы.
Рекомендуется для борьбы с фитопатогенными грибами на
зерновых, овощных и плодовых культурах.
Методика основана на определении пираклостробина методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием
ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим
растворителем, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и
на концентрирующих патронах на основе силикагеля (Диапак-Амин и Диапак С16).
Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение
- методом абсолютной калибровки.
Метрологическая характеристика метода представлена в
таблице.
Таблица
Метрологическая характеристика метода определения
Анализируемый объект
|
Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
|
предел обнаружения, (мг/л)
|
диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/л)
|
среднее значение определения, %
|
стандартное отклонение S, %
|
доверительный интервал среднего результата, %, ±
|
Зерно
|
0,02
|
0,02 - 0,20
|
83,2
|
2,378
|
1,11
|
Зеленая масса
|
0,02
|
0,02 - 0,20
|
78
|
2,787
|
1,31
|
Солома
|
0,02
|
0,02 - 0,20
|
79,4
|
2,898
|
1,36
|
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов,
применяемых при выращивании зерновых колосовых культур.
Пираклостробин, аналитический
стандарт с содержанием д.в. 99,9 %, фирма БАСФ
|
|
Ацетон, осч, 9 - 5
|
ТУ 2633-00-4-11291058-94
|
Ацетонитрил
|
ТУ 6-09-3534-87
|
Вода бидистиллированная,
деионизированная
|
ГОСТ 7602-72
|
н-Гексан, ч
|
ТУ 6-09-3375
|
Калий марганцово-кислый, чда
|
ГОСТ
20490-75
|
Кальций хлористый, хч
|
ГОСТ 4161-76
|
Кислота серная концентрированная,
ч
|
ГОСТ 4204-77
|
Кислота соляная, концентрированная
|
ГОСТ 857-88
|
Кислота уксусная, ледяная
|
ГОСТ 61-75
|
Метилен хлористый, хч
|
ТУ 6-09-2662-77
|
Натрия гидрокарбонат, хч
|
ГОСТ 2156-76
|
Натрий сернокислый, безводный, хч
|
ГОСТ
4166-76
|
Натрий хлористый, хч
|
ГОСТ
4233-77
|
Патроны концентрирующие
Диапак-Амин (0,6 г)
|
ТУ 4215-002-05451931-94
|
Патроны концентрирующие Диапак С16
(0,6 г)
|
ТУ 4215-002-05451931-94
|
Фосфора пентоксид, ч
|
МРТУ 6-09-5759-69
|
Этиловый эфир уксусной кислоты,
чда
|
ГОСТ 223000-76
|
Фаза подвижная для ВЭЖХ:
|
|
ацетонитрил - 600 мл, вода - 300
мл, ледяная уксусная кислота - 1 мл
|
|
Фильтры бумажные «красная лента»
|
ТУ-6-09-1678-86
|
Фильтры для очистки растворителей,
диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма Уотерс
|
|
Перед началом эксперимента
проверяют чистоту ацетонитрила, ацетона, гексана и хлористого метилена. Для
этого досуха выпаривают на ротационном вакуумном испарителе 200 мл
растворителя, добавляют в концентратор 1 мл ацетонитрила, тщательно обмывают
стенки концентратора и хроматографируют при 270 нм. При недостаточной чистоте
растворителей проводят их очистку.
Бидистиллят кипятят в течение 6 ч с марганцово-кислым
калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.
Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата
калия.
(А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика, Москва, 1976. С. 438 -
439).
Ацетонитрил перегоняют.
н-Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой,
промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор
не перестанет обесцвечиваться водой, затем промывают водой, сушат над безводным
хлористым кальцием и перегоняют (А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика. М., 1976.
441 с.).
Хлористый метилен встряхивают с концентрированной серной
кислотой, промывают водным раствором карбоната натрия, водой, сушат над
безводным хлористым кальцием и перегоняют над оксидом (V) фосфора (А. Гордон, Р.
Форд. Спутник химика. М., 1976. 440 с.)
Алонж
прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами
Диапак-Амин, Диапак-С, Диапак С16
|
|
Ванна ультразвуковая
|
|
Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные
|
ГОСТ 34104-80Е
|
Весы
лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и
пределом допустимой погрешности ± 0,038 г
|
ГОСТ 19491-74
|
Воронки делительные на 250 и 500
мл
|
ГОСТ
25336-82Е
|
Воронки конические, стеклянные
диаметром 50 - 60 мм
|
ГОСТ
25336-82Е
|
Встряхиватель механический или
аналогичный
|
ТУ 64-673 М
|
Испаритель ротационный вакуумный
ИР-1М или аналогичный
|
ТУ 25-11-917-74
|
Колбы конические, плоскодонные на
500 и 1000 мл
|
ГОСТ 9737-70
|
Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл
|
ГОСТ
1770-74
|
Колонка хроматографическая
стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP18,
зернение 5 мкм, фирма Уотерс
|
|
Концентраторы грушевидные и
круглодонные, объемом 50, 100 и 250 мл, КТУ-100-14/19
|
ГОСТ 10394-75
|
Микрошприц для жидкостного
хроматографа на 50 - 100 мкл
|
|
Насос водоструйный
|
ГОСТ 10696-75
|
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; и 5,0
мл
|
ГОСТ
20292-74
|
Предколонка хроматографическая
стальная, Symmetry С 18 длиной 20 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5
мкм, фирма Уотерс
|
|
Стаканы стеклянные на 100 - 500 мл
|
ГОСТ 25366-82Е
|
Хроматограф жидкостный Уотерс 510
с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не
ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа.
|
|
Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18
устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °С и
скорости потока подвижной фазы 1 мл/мин 3 - 4 ч.
Взвешивают 100 мг пираклостробина в мерной колбе объемом 100
мл. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом
(стандартный раствор с концентрацией пираклостробина 1,0 мг/мл).
Затем 1,0 мл стандартного раствора с концентрацией 1,0 мг/мл
отбирают пипеткой в мерную колбу объемом 100 мл и доводят объем до метки
ацетонитрилом при перемешивании (стандартный раствор с концентрацией
пираклостробина 10,0 мкг/мл). Стандартные растворы можно хранить в холодильнике
в течение трех месяцев.
Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят
растворы, содержащие по 5,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/мл и используют эти
растворы для хроматографического исследования и внесения в контрольные образцы.
Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные
ацетонитрил и очищенную воду.
Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ.
В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 600 мл
ацетонитрила, 300 мл очищенной воды и 1 мл ледяной уксусной кислоты. Смесь
тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20
мл/мин в течение 5 минут, после чего помещают в ультразвуковую ванну для
удаления растворенных газов на 1 минуту. Полученный раствор используют в
качестве подвижной фазы.
Для построения калибровочного графика вводят в хроматограф
последовательно 3 раза по 20 мкл каждого из стандартных растворов, содержащих
пираклостробин с концентрациями 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/мл, измеряют площадь
пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и
строят график зависимости площади пика от концентрации пираклостробина.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость
потока растворов через патрон не должна превышать 5 мл/мин.
Патрон Диапак-Амин устанавливают на алонж с отводом для
вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее
10 мл (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают
последовательно 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1:1 и 10 мл гексана.
Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона!
2.3.5.1. Проверка хроматографического поведения
пираклостробина на концентрирующем патроне Диапак-Амин.
Из стандартного раствора пираклостробина в ацетонитриле,
содержащего 1 мкг/мл отбирают 1 мл, помещают в круглодонную колбу объемом 100
мл и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не
выше 30 °С.
Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, помещают на 10 с в
ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в
концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный
раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха,
сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют.
Концентратор тщательно обмывают последовательно двумя
порциями по 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 9:1 и также вносят на
патрон. Элюат после прохождения каждой порции собирают в концентратор,
выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и
хроматографируют. Определяют фракции, содержащие пираклостробин, и объединяют
их.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость
потока растворов через патрон не должна превышать 5 мл/мин. При работе на
патронах Диапак С16 используют очищенную воду.
Патрон Диапак С16 устанавливают на алонж с отводом для
вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее
10 мл (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают
последовательно 10 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:1 и 20 мл воды.
Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона!
2.3.6.1. Проверка хроматографического поведения
пираклостробина на концентрирующем патроне Диапак С16.
Из стандартного раствора пираклостробина в ацетонитриле,
содержащего 1 мкг/мл отбирают 1 мл, помещают в круглодонную колбу объемом 100
мл и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не
выше 30 °С.
Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помещают на 10
с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в
концентратор добавляют 9 мл воды, смесь тщательно перемешивают и полученный
раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха,
сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют.
Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил-вода в
соотношении 1:4 и смесь вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор,
выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и
хроматографируют.
Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил-вода в
соотношении 1:2 и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают
досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют.
Концентратор обмывают тремя порциями по 10 мл смеси
ацетонитрил-вода в соотношении 1:1 (при анализе образцов зерна - тем же объемом
смеси ацетонитрил-вода-ледяная уксусная кислота в соотношении 600:300:1) и
также вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции собирают в
концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и
хроматографируют. Определяют фракции, содержащие пираклостробин, и объединяют
их.
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными
правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и
объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79
от 21.08.79). Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной
влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной
температуре. Замороженные образцы зеленой массы хранят в морозильной камере при
температуре не выше 18 °С.
2.5.1.1. Экстракция и предварительная очистка
Образец размолотого на лабораторной мельнице зерна массой 10
г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 10 мл дистиллированной
воды и выдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем туда же
прибавляют 30 мл ацетонитрила и экстрагируют в течение 5 мин на ультразвуковой
ванне и дополнительно 5 мин на механическом встряхивателе. Экстракт переносят
через бумажный фильтр «красная лента» в коническую колбу объемом 250 мл с 5 г
поваренной соли. Экстракцию повторяют еще 3 раза, используя по 30 мл
ацетонитрила и экстрагируя по 5 мин на ультразвуковой ванне и дополнительно 5
мин на механическом встряхивателе.
После фильтрования экстракты объединяют в конической колбе с
5 г поваренной соли, перемешивают и оставляют на 10 мин при комнатной
температуре. Затем экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 мл и
выделившийся нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой
пропускают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 мл
и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше
30 °С.
К сухому остатку в концентраторе добавляют 5 мл ацетона и
тщательно обмывают его стенки, затем туда же добавляют 100 мл дистиллированной
воды, 5 г поваренной соли и перемешивают до полного растворения соли.
Полученную смесь переносят в делительную воронку объемом 250 мл, концентратор
обмывают 30 мл гексана, который помещают в ту же делительную воронку и
интенсивно встряхивают ее в течение 2 мин. После полного разделения фаз в
делительной воронке нижний водный слой переносят в коническую колбу объемом 250
мл, а верхний гексановый слой собирают в другую коническую колбу объемом 250
мл, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водный слой возвращают в
делительную воронку и экстрагируют пираклостробин еще двумя порция гексана
объемом по 30 мл. Водный слой отбрасывают, а гексановый экстракт, пропущенный
через слой безводного сульфата натрия, переносят в сухую делительную воронку
объемом 250 мл, осушитель обмывают 10 мл гексана и объединяют смыв с основным
экстрактом.
Пираклостробин экстрагируют из гексана тремя порциями
ацетонитрила объемом по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в
течение 2 мин. После разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают
через безводный сульфат натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают
досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
2.5.1.2. Очистка на концентрирующих патронах
Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, помещают на 10 с в
ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в
концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный
раствор вносят на патрон Диапак-Амин. Концентратор тщательно обмывают 10 мл смеси
гексан-ацетон в соотношении 9:1 и также вносят на патрон. Элюаты объединяют и
выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше
30 °С.
Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помещают на 10
секунд в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем
в концентратор добавляют 9 мл воды, тщательно перемешивают и полученный раствор
вносят на патрон Диапак С16. Элюат отбрасывают.
Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил-вода в
соотношении 1:4 и вносят на патрон. Элюат отбрасывают.
Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил-вода в
соотношении 1:2 и вносят на патрон. Элюат отбрасывают.
Пираклостробин элюируют 20 мл смеси ацетонитрил-вода-ледяная
уксусная кислота в соотношении 600:300:1. Элюат собирают в концентратор,
выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и аликвоту 20
мкл вводят в хроматограф.
Образец измельченной зеленой массы массой 10 г помещают в
коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 50 мл ацетонитрила и экстрагируют в
течение 5 мин на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин на механическом
встряхивателе. Экстракт переносят через бумажный фильтр «красная лента» в
коническую колбу объемом 250 мл с 5 г поваренной соли. Экстракцию повторяют еще
2 раза, используя по 50 мл ацетонитрила и экстрагируя по 5 мин на
ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин на механическом встряхивателе. После
фильтрования экстракты объединяют в конической колбе с 5 г поваренной соли,
перемешивают и оставляют на 10 мин при комнатной температуре. Затем экстракт
переносят в делительную воронку объемом 250 мл и выделившийся нижний водный
слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой пропускают через слой безводного
сульфата натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают досуха на
ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
К сухому остатку в концентраторе добавляют 5 мл ацетона и
тщательно обмывают его стенки, затем туда же добавляют 100 мл дистиллированной воды,
5 г поваренной соли и перемешивают до полного растворения соли. Полученную
смесь переносят в делительную воронку объемом 250 мл, концентратор обмывают 30
мл гексана, который помещают в ту же делительную воронку и интенсивно
встряхивают ее в течение 2 мин. После полного разделения фаз в делительной
воронке нижний водный слой помещают в коническую колбу объемом 250 мл, а
верхний гексановый слой собирают в коническую колбу объемом 250 мл, пропуская
через слой безводного сульфата натрия. Водный слой возвращают в делительную
воронку и экстрагируют пираклостробин еще двумя порциями гексана объемом по 30
мл. Водный слой отбрасывают, а гексановый экстракт, пропущенный через слой
безводного сульфата натрия, переносят в сухую делительную воронку объемом 250
мл, осушитель обмывают 10 мл гексана и объединяют смыв с основным экстрактом.
Пираклостробин экстрагируют из гексана тремя порциями
ацетонитрила объемом по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в
течение 2 мин. После разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают
через безводный сульфат натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают
досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Далее проводят очистку экстракта на концентрирующих
патронах, как указано в разделе 2.5.1.2, элюируя пираклостробин с патрона
Диапак С16 смесью ацетонитрил-вода в соотношении 1:1. Элюат выпаривают досуха и
аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.
Образец измельченной на лабораторной мельнице соломы массой
5 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 75 мл смеси
ацетонитрил-вода в соотношении 9:1 и экстрагируют в течение 5 мин на
ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин на механическом встряхивателе.
Экстракт переносят через бумажный фильтр «красная лента» в коническую колбу
объемом 250 мл с 5 г поваренной соли. Экстракцию повторяют еще 2 раза,
используя по 50 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 9:1 и экстрагируя по 5
мин на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин на механическом
встряхивателе. После фильтрования экстракты объединяют в конической колбе с 5 г
поваренной соли, перемешивают и оставляют на 10 мин при комнатной температуре.
Затем экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 мл и выделившийся
нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой пропускают через
слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают
досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
К сухому остатку в концентраторе добавляют 5 мл ацетона и
тщательно обмывают его стенки, затем туда же добавляют 100 мл дистиллированной
воды, 5 г поваренной соли и перемешивают до полного растворения соли.
Полученную смесь переносят в делительную воронку объемом 250 мл, концентратор
обмывают 30 мл гексана, который помещают в ту же делительную воронку и
интенсивно встряхивают ее в течение 2 мин. После полного разделения фаз в
делительной воронке нижний водный слой помещают в коническую колбу объемом 250
мл, а верхний гексановый слой собирают в коническую колбу объемом 250 мл,
пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водный слой возвращают в
делительную воронку и экстрагируют пираклостробин еще двумя порциями гексана
объемом по 30 мл. Водный слой отбрасывают, а гексановый экстракт, пропущенный
через слой безводного сульфата натрия, переносят в сухую делительную воронку
объемом 250 мл, осушитель обмывают 10 мл гексана и объединяют смыв с основным
экстрактом.
Пираклостробин экстрагируют из гексана тремя порциями
ацетнитрила объемом по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в
течение 2 мин. После разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают
через безводный сульфат натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают
досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Далее проводят очистку экстракта на концентрирующих
патронах, как указано в разделе 2.5.1.2, элюируя пираклостробин с патрона
Диапак С16 смесью ацетонитрил-вода в соотношении 1:1. Элюат выпаривают досуха и
аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.
Хроматограф «Waters» или другой с аналогичными
характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.
Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 4,6 мм × 25 см,
зернением 5 мкм.
Предколонка стальная Symmetry RP18, 3,9 мм × 2 см,
зернением 5 мкм.
Температура колонки: 25°С.
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода-ледяная уксусная кислота в
соотношении 600:300:1.
Длина волны 270 нм.
Время выхода пираклостробина 9,8 - 10,4 мин.
Чувствительность 0,005 ед. оптической плотности на шкалу.
Объем вводимой пробы 20 мкл.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 -
20 нг.
Содержание пираклостробина
рассчитывают по формуле:
Х - содержание
пираклостробина в пробе, мг/кг или мг/л;
Sст- высота
(площадь) пика стандарта, мм;
Sпр - высота
(площадь) пика образца, мм;
А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для
хроматографирования, мл;
m - масса анализируемого образца, г (мл);
Р - содержание пираклостробина в аналитическом
стандарте, %.
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при
работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными
приборами и сжатыми газами.
Калинин В.А., Довгилевич Е.В., Довгилевич А.В., Устименко
Н.В.
Московская сельскохозяйственная академия им. К.А.
Тимирязева. 127550, Москва, ул. Тимирязевская 53, стр. 2, УНКЦ «Агроэкология
пестицидов и агрохимикатов». Телефон: 976-37-68; факс: 976-43-26.