На главную
На главную

МУК 4.2.1772-03 «Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Bacillus licheniformis 1001 - продуцента бацитрацина в атмосферном воздухе населенных мест»

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма В. lichenifofmis 1001 - продуцента бацитрацина в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха.

Обозначение: МУК 4.2.1772-03
Название рус.: Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Bacillus licheniformis 1001 - продуцента бацитрацина в атмосферном воздухе населенных мест
Статус: действующий (Введен впервые)
Дата актуализации текста: 01.10.2008
Дата добавления в базу: 01.02.2009
Дата введения в действие: 01.12.2003
Разработан: Российский государственный медицинский университет
Утвержден: Главный государственный санитарный врач РФ (24.10.2003)
Опубликован: Информационно-издательский центр Минздрава России № 2004
УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,
Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

24 октября 2003 г.

Дата введения: 1 декабря 2003 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения
концентрации клеток микроорганизма
Bacillus licheniformis 1001 - продуцента бацитрацина
в атмосферном воздухе населенных мест
Методические указания
МУК 4.2.1772-03

1.Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методикупроведения микробиологического количественного анализа концентрации клетокштамма В. lichenifofmis 1001 -продуцента бацитрацина в атмосферном воздухе населенных мест в диапазонеконцентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии стребованиями ГОСТ17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методамопределения загрязняющих веществ» и Р 8.563-96 «Методики выполненияизмерений».

Методические указания предназначены для применения влабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных вустановленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

Методические указания одобрены и рекомендованысекцией «Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязненияокружающей среды» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены окружающейсреды».

2.Биологическая характеристика B.licheniformis 1001
и его гигиенический норматив

Систематическое положение микроорганизма

Класс

Schizomycetes

Отряд

Eubacteriales

Семейство

Bacillaceae

Род

Bacillus

Вид

licheniformis

Штамм

1001

На МПА штамм образует большие округлые колонии,максимальный диаметр которых составляет 0,8-1,1 см. В центре колонии наблюдаетсяплотное матовое желтоватого цвета уплотнение, максимальный диаметр которогоможет составлять 0,3-0,5 см. Вокруг него располагается прозрачная складчатаякайма, края которой сильно изрезаны. Колонии гладкие, плоские, матовые. Неврастают в агар и легко отделяются от него. Цвет белесый с желтоватым оттенком.

Морфологически штамм представлен подвижными мелкимитолстыми короткими палочками, образующими центрально расположенные эндоспоры,располагаются поодиночке или небольшими конгломератами, редко образуют цепочки.Палочки снабжены жгутиками, расположенными перитрихиально.

В. licheniformisаэроб, сапрофит, мезофил, грамположителен. Чувствителен к целому рядуантибиотиков, умеренно чувствителен к бензил - пенцилину..

Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованныхсредах. Оптимальная температура роста 36-38 °С, оптимальная рН 7,0- 8,0,культивирование 7 суток. Для размножения используется мясопептоннаяагаризованная среда (МПА).

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферномвоздухе населенных мест - 5 000 кл/м3, пометка А.

3.Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнения измерений количестваклеток микроорганизма в атмосферном воздухе населенных мест в диапазонеконцентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительнойвероятности 0,95.

4.Метод измерений

Прямой метод основан на аспирации из воздуха клетокмикроорганизма на агаризованную среду МПЛ и подсчета количества выросшихколоний по типичным культурально-морфологическим признакам.

Косвенный метод основан на аспирации из воздуха клетокмикроорганизма на поверхность плотной питательной среды (МПА) и подсчета зонзадержки роста тест культуры Micrococcus flaws ATCC 10240 через 24-48 ч. Приданном методе на одной чашке Петри после забора пробы может быть учтено неболее 50 колоний на чашке, т. к. большее количество колоний на чашке образуютсливающиеся зоны задержки роста тест культуры под действием антибиотикабацитрацина.

5.Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средстваизмерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.7. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818(щелевой прибор Кротова)

ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

 

Автоклав электрический

ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

 

Холодильник бытовой

 

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

 

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

 

Лупа с увеличением ×10

ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные, стеклянные, диаметром 100мм

 

Пробирки биологические, вместимостью20 и 35 мл

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл

ГОСТ 10515-75

ГОСТ 10515-75

ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл

ГОСТ 1770-74

Секундомер

ГОСТ 9586-75

Барометр

ГОСТ 24696-79

Марля медицинская

ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая

ГОСТ 25556- 81

5.2. Реактивы, растворы

Антибиотики: ампициллина натриевая соль, нистатин

 

Спирт этиловый ректификат

ГОСТ 5962-67

 Агаризованная среда МПА с глюкозой (глюкоза - 1 %, агар - 1,5-1,8 %, рН 6,6 - 7,2, режим стерилизации 1,1 - 1,2 ати в течение 30 мин

Молочный агар Эйкмана (10 мл среды МПА и 2,5 - 3 мл стерильного молока - содержание жир не более 2 %, белка - 2,8 % - смешать ex temporo)

 

6.Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клетокштамма-продуцента в атмосферном воздухе соблюдают следующие требования:

6.1. Правила техники безопасности при работе схимическими реактивами по ГОСТ12.1.005-88..

6.2. Электробезопасность при работе сэлектроустановками по ГОСТ12.1.005-88.и инструкции по эксплуатации прибора.

6.3. «Инструкции по устройству, требованиям безопасностии личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятиймикробиологической промышленности» (1977).

6.4. Все виды работ с реактивами проводят только ввытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материаломосуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7.Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатовдопускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедшихсоответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологическихисследований.

8.Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб канализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха

(20 ± 5 °С), атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. ивлажности воздуха не более 80 %.

9.Проведение измерения

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения концентрации клеток микроорганизмавоздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью Юл/мин наповерхность плотной питательной агаризованной среды МПА. Время аспирациивоздуха (5-20 мин) зависит от предполагаемой концентрации клетокштамма-продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздухатщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхностьподвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенкукрышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой,одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышкиприбора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска,прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от даннойчашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирациии дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

При выполнении анализа воздуха прямым методомагаризованную среду МПА расплавляют, остужают до 50-60 °С, добавляютсвежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде раствор антибиотикаампициллина из расчета 10-15 мкг на 1 мл среды (для подавления постороннейбактериальной микрофлоры), раствор нистатина из расчета 10 мкг на мл среды (дляподавления грибковой флоры), тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.

Чашки с застывшей средой помещают в термостат на суткипри температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашкииспользуют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают втермостат с температурой 40 °С (для интенсификации развития бактерии). Через48-72 часа производят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическимпризнакам (прямой метод).

При выполнении анализа воздуха косвенным методом чашкиПетри с пробами вынимают из термостата через 24 ч и инкубируют в параххлороформа не менее 20-30 мин в вытяжном шкафу. Чашки оставляют на 2 ч прикомнатной температуре для предциффузии и наслаивают верхний слой среды МПА, вкоторую предварительно вносят взвесь 18-20-часовой тест культуры Micrococcus flavus из расчета 2 мл1-миллиардной взвеси на 100 мл среды. Затем чашки инкубируют в термостате при28-32 °С в течение 16-18 ч и подсчитывают количество зон задержки роста тесткультуры под действием бацитрацина.

10.Вычисление результатов измерения

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1м' воздуха производят по формуле:

кл/м3 ,где

Х- концентрация клеток продуцента в воздухе,

N - количество колоний продуцента, выросших на чашке,

1 000 - коэффициент пересчета на 1 м3воздуха,

V - объем воздуха, л (произведение скорости на времяаспирации).

11.Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

Протокол №
количественного микробиологического анализа
штамма-продуцента Bacillus licheniformis1001
в атмосферном воздухе

1. Дата проведения анализа______________

2. Место отбора пробы__________________

3.Название лаборатории_________________

4.Юридический адрес организации________

Результаты микробиологического анализа

Шифр или № пробы

Определяемый микроорганизм

Концентрация, кл/м3

 

 

 

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

Списоклитературы

1. Руководство по контролю загрязнения атмосферы: РД52.04.186-96. М.1991,693с.

2. ГОСТ 8.563-96. ГСИ «Методикивыполнения измерений».

3. Положение об организации работы по техникебезопасности в микробиологической промышленности. М.,1980. 27 с.

4. Инструкции по устройству, требованиям безопасностии личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятиймикробиологической промышленности. М.,1977.7 с.

5. ГОСТ17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методамопределения загрязняющих веществ». М. Изд-во стандартов, 1981. 3 с.

6. Даниелова Л. Т., Амбарцумян Л. А. К методикеопределения остаточных количеств бацитрацина в пищевых продуктахживотноводства// Антибиотики, 1980. Т. 25. № 1. С. 41-44.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Общие положения и область применения. 1

2. Биологическая характеристика B.licheniformis 1001  и его гигиенический норматив. 1

3. Пределы измерений. 1

4. Метод измерений. 2

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,  реактивы и материалы.. 2

6. Требования безопасности. 2

7. Требования к квалификации операторов. 2

8. Условия измерений. 2

9. Проведение измерения. 2

10. Вычисление результатов измерения. 3

11. Оформление результатов измерений. 3

Список литературы.. 3

 

178
Мне нравится
Комментировать Добавить в закладки

Комментарии могут оставлять только зарегистрированные пользователи.

Пожалуйста зарегистрируйтесь или авторизуйтесь на сайте.