Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма В. lichenifofmis 1001 - продуцента бацитрацина в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха.
Обозначение: | МУК 4.2.1772-03 |
Название рус.: | Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Bacillus licheniformis 1001 - продуцента бацитрацина в атмосферном воздухе населенных мест |
Статус: | действующий (Введен впервые) |
Дата актуализации текста: | 01.10.2008 |
Дата добавления в базу: | 01.02.2009 |
Дата введения в действие: | 01.12.2003 |
Разработан: | Российский государственный медицинский университет |
Утвержден: | Главный государственный санитарный врач РФ (24.10.2003) |
Опубликован: | Информационно-издательский центр Минздрава России № 2004 |
УТВЕРЖДАЮГлавный государственный санитарный врач Российской Федерации, Г. Г. Онищенко 24 октября 2003 г. Дата введения: 1 декабря 2003 г. |
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Метод микробиологического измерения
концентрации клеток микроорганизма
Bacillus licheniformis 1001 - продуцента бацитрацина
в атмосферном воздухе населенных мест
Методические указания
МУК 4.2.1772-03
Настоящие методические указания устанавливают методикупроведения микробиологического количественного анализа концентрации клетокштамма В. lichenifofmis 1001 -продуцента бацитрацина в атмосферном воздухе населенных мест в диапазонеконцентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха.
Методические указания разработаны в соответствии стребованиями ГОСТ17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методамопределения загрязняющих веществ» и Р 8.563-96 «Методики выполненияизмерений».
Методические указания предназначены для применения влабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных вустановленном порядке на право проведения микробиологических исследований.
Методические указания одобрены и рекомендованысекцией «Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязненияокружающей среды» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены окружающейсреды».
Класс | Schizomycetes |
Отряд | Eubacteriales |
Семейство | Bacillaceae |
Род | Bacillus |
Вид | licheniformis |
Штамм | 1001 |
На МПА штамм образует большие округлые колонии,максимальный диаметр которых составляет 0,8-1,1 см. В центре колонии наблюдаетсяплотное матовое желтоватого цвета уплотнение, максимальный диаметр которогоможет составлять 0,3-0,5 см. Вокруг него располагается прозрачная складчатаякайма, края которой сильно изрезаны. Колонии гладкие, плоские, матовые. Неврастают в агар и легко отделяются от него. Цвет белесый с желтоватым оттенком.
Морфологически штамм представлен подвижными мелкимитолстыми короткими палочками, образующими центрально расположенные эндоспоры,располагаются поодиночке или небольшими конгломератами, редко образуют цепочки.Палочки снабжены жгутиками, расположенными перитрихиально.
В. licheniformisаэроб, сапрофит, мезофил, грамположителен. Чувствителен к целому рядуантибиотиков, умеренно чувствителен к бензил - пенцилину..
Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованныхсредах. Оптимальная температура роста 36-38 °С, оптимальная рН 7,0- 8,0,культивирование 7 суток. Для размножения используется мясопептоннаяагаризованная среда (МПА).
Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферномвоздухе населенных мест - 5 000 кл/м3, пометка А.
Методика обеспечивает выполнения измерений количестваклеток микроорганизма в атмосферном воздухе населенных мест в диапазонеконцентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительнойвероятности 0,95.
Прямой метод основан на аспирации из воздуха клетокмикроорганизма на агаризованную среду МПЛ и подсчета количества выросшихколоний по типичным культурально-морфологическим признакам.
Косвенный метод основан на аспирации из воздуха клетокмикроорганизма на поверхность плотной питательной среды (МПА) и подсчета зонзадержки роста тест культуры Micrococcus flaws ATCC 10240 через 24-48 ч. Приданном методе на одной чашке Петри после забора пробы может быть учтено неболее 50 колоний на чашке, т. к. большее количество колоний на чашке образуютсливающиеся зоны задержки роста тест культуры под действием антибиотикабацитрацина.
При выполнении измерений применяют следующие средстваизмерений, вспомогательные устройства и материалы.
5.7. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы
| ||||||||||||||||||||||||||||||
5.2. Реактивы, растворы
|
При выполнении измерений концентрации клетокштамма-продуцента в атмосферном воздухе соблюдают следующие требования:
6.1. Правила техники безопасности при работе схимическими реактивами по ГОСТ12.1.005-88..
6.2. Электробезопасность при работе сэлектроустановками по ГОСТ12.1.005-88.и инструкции по эксплуатации прибора.
6.3. «Инструкции по устройству, требованиям безопасностии личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятиймикробиологической промышленности» (1977).
6.4. Все виды работ с реактивами проводят только ввытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материаломосуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
К выполнению измерений и обработке их результатовдопускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедшихсоответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологическихисследований.
Процессы приготовления растворов и подготовки проб канализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха
(20 ± 5 °С), атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. ивлажности воздуха не более 80 %.
9.1. Условия отбора проб воздуха
Для определения концентрации клеток микроорганизмавоздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью Юл/мин наповерхность плотной питательной агаризованной среды МПА. Время аспирациивоздуха (5-20 мин) зависит от предполагаемой концентрации клетокштамма-продуцента.
Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздухатщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхностьподвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенкукрышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой,одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышкиприбора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска,прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от даннойчашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирациии дату отбора пробы.
9.2. Выполнение анализа
При выполнении анализа воздуха прямым методомагаризованную среду МПА расплавляют, остужают до 50-60 °С, добавляютсвежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде раствор антибиотикаампициллина из расчета 10-15 мкг на 1 мл среды (для подавления постороннейбактериальной микрофлоры), раствор нистатина из расчета 10 мкг на мл среды (дляподавления грибковой флоры), тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.
Чашки с застывшей средой помещают в термостат на суткипри температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашкииспользуют для контроля воздуха.
После отбора проб воздуха чашки Петри помещают втермостат с температурой 40 °С (для интенсификации развития бактерии). Через48-72 часа производят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическимпризнакам (прямой метод).
При выполнении анализа воздуха косвенным методом чашкиПетри с пробами вынимают из термостата через 24 ч и инкубируют в параххлороформа не менее 20-30 мин в вытяжном шкафу. Чашки оставляют на 2 ч прикомнатной температуре для предциффузии и наслаивают верхний слой среды МПА, вкоторую предварительно вносят взвесь 18-20-часовой тест культуры Micrococcus flavus из расчета 2 мл1-миллиардной взвеси на 100 мл среды. Затем чашки инкубируют в термостате при28-32 °С в течение 16-18 ч и подсчитывают количество зон задержки роста тесткультуры под действием бацитрацина.
Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1м' воздуха производят по формуле:
кл/м3 ,где
Х- концентрация клеток продуцента в воздухе,
N - количество колоний продуцента, выросших на чашке,
1 000 - коэффициент пересчета на 1 м3воздуха,
V - объем воздуха, л (произведение скорости на времяаспирации).
Результаты измерений оформляют протоколом по форме.
Протокол №
количественного микробиологического анализа
штамма-продуцента Bacillus licheniformis1001
в атмосферном воздухе
1. Дата проведения анализа______________
2. Место отбора пробы__________________
3.Название лаборатории_________________
4.Юридический адрес организации________
Результаты микробиологического анализа
Шифр или № пробы | Определяемый микроорганизм | Концентрация, кл/м3 |
|
|
|
Ответственный исполнитель
Научный руководитель
1. Руководство по контролю загрязнения атмосферы: РД52.04.186-96. М.1991,693с.
2. ГОСТ 8.563-96. ГСИ «Методикивыполнения измерений».
3. Положение об организации работы по техникебезопасности в микробиологической промышленности. М.,1980. 27 с.
4. Инструкции по устройству, требованиям безопасностии личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятиймикробиологической промышленности. М.,1977.7 с.
5. ГОСТ17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методамопределения загрязняющих веществ». М. Изд-во стандартов, 1981. 3 с.
6. Даниелова Л. Т., Амбарцумян Л. А. К методикеопределения остаточных количеств бацитрацина в пищевых продуктахживотноводства// Антибиотики, 1980. Т. 25. № 1. С. 41-44.
СОДЕРЖАНИЕ