Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 100 до 5 000 клеток в 1 м3 - воздуха.
Обозначение: | МУК 4.2.1767-03 |
Название рус.: | Метод микробиологического измерения концентрации клеток Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в атмосферном воздухе населенных мест |
Статус: | действующий (Введены впервые) |
Дата актуализации текста: | 01.10.2008 |
Дата добавления в базу: | 01.02.2009 |
Дата введения в действие: | 01.12.2003 |
Разработан: | Российский государственный медицинский университет |
Утвержден: | Главный государственный санитарный врач РФ (24.10.2003) |
Опубликован: | Информационно-издательский центр Минздрава России № 2004 |
УТВЕРЖДАЮГлавный государственный санитарный врач Российской Федерации, Г. Г. Онищенко 24 октября 2003 г. Дата введения: 1 декабря 2003 г. |
4.2. МЕТОДЫКОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
населенныхмест
Методические указания
МУК 4.2.1767-03
Методические указания. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. .
1. Разработаны Российским государственным медицинским университетом (к. б. н. Н. И. Шейной).
2. Утверждены Первым заместителем министра здравоохранения РоссийскойФедерации - Главный государственным санитарным врачом Российской Федерации 24 октября 2003 г.
3. Введены в действие с I декабря 2003 г.
4.Введены впервые.
Настоящие методические указания устанавливают методикупроведения микробиологического количественного анализа концентрации клетокштамма Aspergillus awamoriВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в атмосферном воздухе населенныхмест в диапазоне концентраций от 100 до 5 000 клеток в 1 м3 -воздуха.
Методические указания разработаны в соответствии стребованиями ГОСТ17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методамопределения загрязняющих веществ» и Р 8.563-96 «Методики выполненияизмерений».
Методические указания предназначены для применения влабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных вустановленном порядке на право проведения микробиологических исследований.
Методические указания одобрены и рекомендованы секцией«Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды»Проблемной комиссии «Научные основы гигиены окружающей среды».
На 5 день развития на сусло-агаре штамм образуеткрупные ровные круглые колонии, средний диаметр которых составляет 0,5-1,0 см,а максимальный - 1,5-3,0 см. Край колоний ровный. Колонии гомогенные, гладкие,плоские.
При температуре 38-42°С штамм-продуцент появляется насусло-агаре в виде маленьких белых колоний уже на 1-2 дни. На 3 день в средувыделяется оранжево-желтый пигмент, процесс спорообразования идет интенсивнее.Образование конидиеносцев с конидиями придает колониям глубокийинтенсивно-серый цвет. Колонии становятся опушенными и приподнимаются надсредой.
Систематическое положение микроорганизма
Класс | Fungi imperfecti |
Порядок | Hyphomycetales |
Семейство | Mucedinaceae |
Секция | Monoverticillata |
Род | Aspergillus |
Вид | awamori |
Штамм | ВНИИгенетика 120/177 |
Штамм Aspergillus awamori 120/177 получен воВНИИгенетика как мутант из Asp.awamori С529Д 466 и депонирован в ЦМПМинститута. Штамм является продуцентом глюкоамилазы.
Штамм-продуцент растет на жидких и агаркзованныхсредах. Оптимальная температура роста 27-30°С, рН среды - 5,0-6,0,культивирование 7 суток. Для размножения используется агаризованная средаЧапека, сусло-агар 5-6°Б, картофельно-сахарозный агар.
Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферномвоздухе населенных мест - 200 кл/м3, пометка А.
Методика обеспечивает выполнения измерений количестваклеток плесневого гриба в атмосферном воздухе населенных мест в диапазонеконцентраций от 100 до 5 000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительнойвероятности 0,95.
Метод основан на аспирации из воздуха клетокплесневого гриба на поверхность среды сусло-агар и подсчета выросших колоний потипичным культурально-морфологическим признакам и яркому оранжево-желтомуокрашиванию субстрата на 3 сутки.
При выполнении измерений применяют следующие средстваизмерений, вспомогательные устройства и материалы.
5.1. Средства измерений, вспомогательные
| ||||||||||||||||||||||||||||||
5.2. Реактивы, растворы
|
При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцентав атмосферном воздухе соблюдают следующие требования:
6 1. Правила техники безопасности при работе схимическими реактивами по ГОСТ12.1.005-88.
6.2. Электробезопасность при работе сэлектроустановками по ГОСТ12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
6.3. «Инструкции по устройству, требованиямбезопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораторияхпредприятий микробиологической промышленности» (1977).
6.4. Все виды работ с реактивами проводят только ввытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материаломосуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
К выполнению измерений и обработке их результатовдопускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующуюподготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.
Процессы приготовления растворов и подготовки проб канализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5 °С),атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.
9.1. Условия отбора проб воздуха
Для определения концентрации клеток плесневого грибавоздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин наповерхность среды сусло-агар. Время аспирации воздуха (5 - 20 мин) зависит отпредполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.
Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздухатщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхностьподвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенкукрышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой,одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышкиприбора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска,прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от даннойчашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирациии дату отбора пробы.
9.2. Выполнение анализа
Метод предполагает учет количества типичных колоний,выросших на 3 сутки после посева проб воздуха, по культурально-морфологическимпризнакам и яркой оранжево-желтой пигментации среды. Прямой метод позволяетучитывать на чашке до 200 колоний продуцента.
Агаризованную среду сусло-агар расплавляют, остужаютдо 50-60 °С, добавляют молочную кислоту из расчета 2 мл на 0,5 л среды (дляподавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают иразливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности.
Чашки с застывшей средой помещают в термостат на суткипри температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашкииспользуют для контроля воздуха.
После отбора проб воздуха чашки Петри помещают втермостат при температуре 38-42 °С (повышенная температура, способствует болеебыстрому росту колоний и плодоношений рода Asper-gillus). Через 2-3 сутокпроизводят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимостикультуру подвергают микроскопированию.
Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1м3 воздуха производят по формуле:
кл/м3 ,где
Х- концентрация клеток продуцента в воздухе,
N - количество колоний продуцента, выросших на чашке,
1 000 - коэффициент пересчета на 1 м3воздуха,
V - объем воздуха, л (произведение скорости на времяаспирации).
Результаты измерений оформляют протоколом по форме.
Протокол №
количественного микробиологического анализа штамма-продуцента
Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177
в атмосферном воздухе населенных мест
1. Дата проведения анализа______________
2. Место отбора пробы__________________
3.Название лаборатории_________________
4.Юридический адрес организации_______
Результаты микробиологического анализа
Шифр или № пробы | Определяемый микроорганизм | Концентрация, кл/м3 |
|
|
|
Ответственный исполнитель
Научный руководитель
1. Руководство по контролю загрязнения атмосферы: РД 52.04.186-96. М., 1991.693с.
2. ГОСТ 8.563-96. ГСИ «Методикивыполнения измерений».
3. Положение об организации работы по техникебезопасности в микробиологической промышленности. М., 1980. 27 с.
4. Инструкции по устройству, требованиям безопасностии личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятиймикробиологической промышленности. М., 1977. 7с.
5. ГОСТ17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методамопределения загрязняющих веществ».
6. Влодавец В. В. К определению плесневых грибов родаAsper-gillus в воздухе лечебных учреждений// Гиг. и сан., 1988. № 8.93-95с.
7. Бабьева И. П., Зенова Г. М. Биология почв. М.: МГУ.122с.
1. Общие положения и область применения 1 5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы 2 7. Требования к квалификации операторов 2 10. Вычисление результатов измерения 3 |