ГОСУДАРСТВЕННОЕСАНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения
концентрации препарата ЭМ-1 «Байкал»
по одному из ведущих компонентов
(Lactobacillus casei-21)
в воздухе рабочей зоны

Методическиеуказания

МУК 4.2.1071-01

Минздрав России
Москва 2002

1. Разработаны к. м. н.Сергеюк Н. П. (Научно-исследовательский центр «Экос»).

2. Утверждены и введены вдействие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации -Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября2001 r.

3. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач Российской

Федерации - Первыйзаместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

20 сентября 2001 г.

МУК 4.2.1071-01

Датавведения: с момента

утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрациипрепарата ЭМ-1 «Байкал» по одному из ведущих компонентов (Lactobacillus casei-21)в воздухе рабочей зоны

1. Общие положения и область применения

Настоящие методическиеуказания устанавливают методику проведения микробиологического количественногоанализа концентраций клеток штамма Lactobacillus casei-21, являющегосяведущим компонентом консорциума микроорганизмов (препарат ЭМ-1 «Байкал») ввоздухе рабочей зоны в диапазоне концентрации от 100 до 50000 клеток в 1 м³воздуха.

Методические указания разработаныс целью обеспечения микробиологического контроля концентрации препарата «БайкалЭМ-1» по одному из ведущих компонентов Lactobacillus casei-21 в воздухе рабочейзоны и производственных помещений и оценки соответствия уровня его содержаниягигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиеническиетребования», ГОСТ 8.563-96 «ГСИ. Методики выполнения измерений».

Методические указанияпредназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторийбиотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий,научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены окружающейсреды и аккредитованных в установленном порядке на право проведениямикробиологических исследований.

2. Характеристика штамма Lactobacillus casei-21

Семейство:                       Lactobacillaceae

Род:                                   Lactobacillus

Вид:                                  casei

Штамм:                            21

На поверхности плотныхпитательных сред образует мелкие круглые колонии. Глубинные колонии - вогнутые,иногда с выростами. Форма клеток - палочки разной длины, образуют короткие идлинные цепочки, неподвижные, неспорообразующие, грамположительные. Отмеченатакже тенденция к образованию заметно искривленных (изогнутых) клеток.

3. Пределы измерений

Методика обеспечиваетвыполнение измерений количества клеток Lactobacillus casei-21 в воздушной средев диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 м³ воздуха придоверительной вероятности 0,95. ПДК_р.з. 2000 кл/м³.

4. Метод измерений

Метод основан на аспирациииз воздуха клеток Lactobacillus casei-21 на поверхность плотной питательнойсреды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,реактивы и материалы

При выполнении измеренийприменяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений,вспомогательные устройства, материалы

Прибор длябактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)                                                                                                              ТУ64-12791-77

Термостатыэлектрические суховоздушные или водяные

Автоклавэлектрический                                                                                                              ГОСТ9586-75

Бокс,оборудованный бактерицидными лампами

Холодильникбытовой

Весылабораторные, аналитические типа ВЛА-200

Микроскопбиологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

Лупа сувеличением х 10                                                                                                              ГОСТ25706-83

Чашки Петрибактериологические плоскодонные, диаметром 100 мм

Пробиркибиологические, вместимостью 20 и 35 мл                                                                                                              ГОСТ10515-75

Пипеткимерные на 1, 5 и 10 мл                                                                                                              ГОСТ10515-75

Колбыконические, вместимостью 250 и 500 мл                                                                                                              ГОСТ1770-74

Секундомер                                                                                                              ГОСТ9586-75

Барометр                                                                                                              ГОСТ24696-79

Марлямедицинская                                                                                                              ГОСТ9412-77

Ватамедицинская гигроскопическая                                                                                                              ГОСТ25556-81

5.2. Реактивы, растворы

Агармикробиологический                                                                                                                 ГОСТ17206-96

Селективнаясреда для молочно-кислых палочек Lactobacillus casei-21

Среда Рогозы(состав питательной среды %):

дрожжевойэкстракт - 0,5; триптический гидролизат казеина - 1,0; твин-80 - 0,1; глюкоза -2,0; натрий уксуснокислый - 2,5; лимоннокислый аммоний - 0,2; ледяная уксуснаякислота - 0,132; соль Б - (магний сернокислый - 11,5 г; марганец сернокислый -2,86 г; железо сернокислое - 0,58 г; вода 100 мл) - 0,5; калий фосфорнокислыйоднозамещенный - 0,6, рН среды 0,6;

вода водопроводная- 100 мл;

агар-агар -1,5.

Стерилизация при 3/4атмосферы, 20 мин. После остывания раствора добавляют 9 мл этилового спирта дляподавления посторонней микрофлоры и разливают данный раствор асептично по 20 млв чашки Петри.

6. Требования безопасности

При выполнении измеренийконцентрации клеток Lactobacillus casei-21 в воздушной средесоблюдают:

·       правила техники безопасностипри работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ12.1.005-88;

·       правила электробезопасностипри работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

·       требования, изложенные вруководстве «Положение об организации работы по технике безопасности вмикробиологической промышленности (1980);

·       положения «Инструкций поустройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе вмикробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности»(1977).

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений иобработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальнымобразованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы вобласти микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовлениярастворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях всоответствии с ГОСТ15150-69 при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 630-800мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9. Проведение измерений

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определениямикроорганизма воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха 20 мин.Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом.Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннююстенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный дискустанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с неекрышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо.После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимаютчашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петристеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

Метод предполагает учетколичества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3-4 суткипосле посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний.

Селективную среду тщательноперемешивают и разливают по 20 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальнойповерхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки притемпературе 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашкииспользуют для контроля воздуха.

После отбора проб воздухачашки Петри инкубируют в термостате при 36 °С, через 72 ч производят подсчетвыросших типичных колоний. При необходимости культуру подвергаютмикроскопированию.

10. Вычисление результатов измерений

Расчет концентрации клеток в1 м³ воздуха производят по формуле:

 кл/м³, где

Х - концентрация клеток ввоздухе;

N - количество колоний,выросших на чашке;

1000 - коэффициентперерасчета на 1 м³ воздуха;

V - объем воздуха, л(произведение скорости на время аспирации).

Препарат «Байкал ЭМ-1»представляет собой консорциум микроорганизмов, в котором Lactobacillus casei-21 составляют 30 % от общего числа микроорганизмов. Streptococcus lactis - 30 %, бактерии фотосинтеза Phodopseudomonaspalistris - 30%, сахаромицеты - Saccaromyces cerevisial - 10 %. Концентрациюпрепарата «Байкал ЭМ-1» рассчитывают исходя из процентного отношениямикроорганизмов, входящих в его состав, по формуле:

A=100×N/d, где

А - концентрация консорциума(кл/м³);

N - концентрация контрольногомикроорганизма (кл/м³);

d -содержание контрольного микроорганизма в консорциуме (%).

Контрольным микроорганизмомдля данной методики является Lactobacillus casei-21.

11. Оформление результатов измерений

Результаты измеренииоформляют протоколом по форме.

Протокол№

количественногомикробиологического анализа препарата ЭМ-1 «Байкал» в воздухе рабочей зоны

Датапроведения анализа                                                             

Место отборапробы                                                                     

Названиелаборатории                                                                 

Юридическийадрес организации                                              

Результатымикробиологического анализа

Ответственный исполнитель

Научный руководитель