На главную
На главную

МУК 4.2.734-99 «Микробиологический мониторинг производственной среды»

Данный документ предназначен в основном для производителей медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП) и может служить в качестве руководства по методам общего микробиологического контроля в чистых помещениях, который включает в себя контроль воздуха рабочих зон, контроль поверхностей помещений и оборудования, контроль рук и одежды персонала.

Обозначение: МУК 4.2.734-99
Название рус.: Микробиологический мониторинг производственной среды
Статус: действующий (Введены впервые)
Дата актуализации текста: 01.10.2008
Дата добавления в базу: 01.02.2009
Дата введения в действие: 10.05.1999
Разработан: Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича
Проектно-строительное предприятие "Чистый воздух"
Утвержден: Главный государственный санитарный врач РФ (10.03.1999)
Опубликован: Информационно-издательский центр Минздрава России № 1999

ГОСУДАРСТВЕННАЯ СИСТЕМА САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО
НОРМИРОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

4. МЕТОДЫКОНТРОЛЯ

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙМОНИТОРИНГ
ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕУКАЗАНИЯ
МУК 4.2.734-99

Минздрав России

Москва 1999

1.Разработаны: Государственным научно-исследовательским институтом стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасовича (Н. В. Медуницын, Т. А. Бектимиров, Т. Е. Елизарова); Проектно-строительным предприятием «Чистый воздух» (М. Е. Барабанова, А. П. Коротовских, В. В. Михнович, А. В. Тютюнников).

2. РекомендованыКомиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утвержденыи введены в действие Главным государственным санитарным врачом РоссийскойФедерации - Первым заместителем министра ЗдравоохраненияРоссийской Федерации.

4. Введенывпервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Область применения. 1

2. Общие положения. 2

3. Определения. 2

4. Программа микробиологического мониторинга контролируемой среды.. 3

5. Общие принципы процедуры микробиологического мониторинга. 4

6. Выбор точек отбора проб. 5

7. Частота и время отбора проб. 6

8. Объем пробы.. 7

9. Выбор питательной среды.. 7

10. Идентификация выделенных микроорганизмов. 7

11. Микробиологические условия и уровни действия для контролируемой среды.. 8

12. Уровни тревоги и действия и корректирующие мероприятия. 9

13. Документация. 9

Приложение А Методы контроля. 10

Приложение Б Аэрозольные пробоотборники для контроля бактериальной контаминации воздуха. 12

Список литературы.. 14

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственныйсанитарный

врач РоссийскойФедерации

Г. Г. Онищенко

10 марта 1999 г.

МУК 4.2.734-99

Дата введения -10 мая 1999 г.

4. МЕТОДЫКОНТРОЛЯ

Микробиологическиймониторинг

производственнойсреды

Методическиеуказания

МУК 4.2.734-99

1. Область применения

Данный документпредназначен в основном для производителей медицинских иммунобиологическихпрепаратов (МИБП) и может служить в качестве руководства по методам общегомикробиологического контроля в чистых помещениях, который включает в себяконтроль воздуха рабочих зон, контроль поверхностей помещений и оборудования,контроль рук и одежды персонала.

Методическиеуказания «Микробиологический мониторинг производственной среды» являютсяприложением к санитарным правилам СП 3.3.2.015 «Производство и контрольмедицинских иммунобиологических препаратов для обеспечения их качества. Good Manufacturing Practice»,утвержденным постановлением Госкомсанэпиднадзора России № 8 от 12.08.94 г., а также продолжением соответствующих разделов Методическихрекомендаций МУ 44-116 «Асептическоепроизводство медицинских иммунобиологических препаратов», утвержденных МЗРоссии 19.05.97 г.

Микробиологическийконтроль воды, сжатого воздуха и других технологических газов,контроль механических частиц в данных методических указаниях нерассматриваются.

2. Общие положения

В данных методическихуказаниях рассматриваются ключевые факторы, которые необходимо учитывать приразработке и проведении программ микробиологического контроля производственнойсреды, составлении планов отбора проб, выборе методов и приборов для проведенияисследований, установлении уровней тревоги и действия.

Приводимые вданном документе цифровые данные, методы отбора проб, приборы являютсярекомендуемыми. Целесообразно их применение с учетом конкретныхпроизводственных условий и технологий.

Для достижениясоответствующего микробиологического статуса производственной среды (см. табл.1.3 приложения 1 к Методическим рекомендациям МУ 44-116«Рекомендуемые максимальные пределы контаминации окружающей среды в рабочихусловиях») могут использоваться методы, эквивалентные тем, которые вошли вданные методические указания.

3. Определения

В данныхметодических указаниях используются следующие определения:

Асептическоенаполнение - часть асептического процесса, в котором стерильный продуктразливается и упаковывается с использованием стерильных емкостей и крышек вкритических производственных зонах.

Асептическоепроизводство - включает все операции приготовления МИБП,в том числе и асептическое наполнение емкостей продуктом в контролируемыхусловиях среды, где воздухоподача, материалы, оборудование и персоналсоответствующим образом контролируются на приемлемые уровни микробнойконтаминации и контаминации механическими частицами.

Асептическиепроизводственные зоны (АПЗ) - контролируемая среда, состоящая изнескольких зон, в которых воздухоподача, материалы, оборудованиеи персонал контролируется на приемлемые уровнимикробной контаминации и контаминации механическими частицами.

Аэрозольныйпробоотборник - прибор, используемый для отбора заданных объемов воздуха заопределенный временной промежуток, в целях определения количественногосодержания микроорганизмов или механических частиц.

Биологическаянагрузка - общее количество живых микроорганизмов в продукте перед процессомстерилизации.

Валидация(аттестация) - получение документированного подтверждения того, чтоконкретный производственный процесс обеспечит с высокой степенью надежностиполучение продукта, отвечающего заранее установленным спецификациям ипоказателям качества.

Контролируемаясреда - среда производственных помещений, в которой содержаниемеханических и живых частиц поддерживается на определенных уровнях.

Корректирующиедействия - действия, которые необходимо предпринимать, в случае, еслирезультаты контроля окружающей среды выявляют превышение уровня действия.

Колониеобразующая единица (КОЕ) - число живыхмикроорганизмов, определяемое по проросшим единичным колониям на плотныхпитательных средах, содержащееся в определенных объемах исследуемых проб.

Критическиепроизводственные зоны - локальные зоны, асептического производства, в которых совершаются асептические манипуляции спродуктом, асептический монтаж оборудования, операции наполнения и укупорки,где продукт подвергается наибольшему риску контаминации. Данные зоны, какправило, располагаются в классах чистоты А, В (100), в соответствии с МУ 44-116.

Критическиеповерхности - поверхности, находящиеся в зоне выполнения асептических операций,непосредственно контактирующие со стерильным материалом (емкостями,инструментарием и пр.).

Окружающая флора- микроорганизмы, выделенные из производственной среды совокупностьюмикробиологических методов исследования.

План отбора проб- документ, описывающий методику отбора проб в контролируемой среде,устанавливающий точки отбора проб, частоту и количество регулярно проводимыхисследований, методы анализа данных и интерпретацию полученных результатов.

Программамониторинга окружающей среды - документально определенная программа,которая описывает правила текущего мониторинга производственной среды по всемконтролируемым параметрам - влажность, температура,скорость воздушных потоков, уровень перепада давления между помещениями,уровень контаминации бактериальными имеханическими частицами и включает в себя план мероприятий при превышениирезультатов контроля уровня действия.

Стерилизация - валидируемый процесс, используемый для освобождения продукта от живыхмикроорганизмов.

Стерильный - заявленный каксвободный от живых микроорганизмов.

Терминальнаястерилизация - процесс, при котором продукт стерилизуется в своей конечнойемкости.

Точка отборапробы - отраженное в документах место в контролируемой зоне, гдепроизводится отбор пробы для дальнейших микробиологическихисследований. Точка выбирается, исходя из потенциального влияния настерильность продукта.

Уровень действия- установленный критический уровень содержания микробов илимеханических частиц, требующий немедленного вмешательства и корректирующихдействий, если он превышен.

Уровень тревоги- установленный докритический уровень содержания микробов илимеханических частиц, дающий раннее предупреждение о возможномотклонении от нормальных рабочих условий производства, не требующий немедленного вмешательства и исправляющихдействий, но который является поводом для проведения дополнительных контролей.

Чистая зона - заданное пространство,где концентрация живых и механических частиц в воздушной среде поддерживается вустановленных пределах в соответствии с классом чистоты.

Чистая комната -комната,где концентрация живых и механических частиц в воздушной среде поддерживаетсяна заданном уровне, определяемым классом чистоты.

4. Программамикробиологического мониторинга контролируемой среды

Основной цельюпрограммы оценки микробиологического состояния производственной среды являетсяпостоянная гарантия стабильности асептических условий производства МИБП,выявление начальных отклонений и выработка корректирующих действий довозникновения ситуаций, приводящих к появлению нестерильной продукции.

Метод контролястерильности готового препарата (ГФ XI, вып.2, с. 187) основан на выборочном исследованиичасти серии, и не дает полной гарантии стерильности каждой емкости в серии. Поэтому необходимо проводить промежуточные тесты настерильность препарата в процессе производства, а также качественный иколичественный контроль асептических условий (класса чистоты рабочих зон).

4.1.Программа микробиологического мониторинга окружающей среды в АПЗ должнаохватывать:

- оценкубактериальной контаминации воздуха (КОЕ/м3);

- оценкубактериальной контаминации критических поверхностей, рук и одежды персонала,работающих в АПЗ;

- оценкуэффективности очистки и дезинфекции помещений и оборудования;

- тестированиеактивности дезинфектантов;

- оценкуэффективности работы стерилизующих воздушных фильтров;

- оценкукачества стерилизации.

4.2. Текущийконтроль в принципе не может и не должен выявить или подсчитать все микроорганизмы,присутствующие в контролируемой среде. Он может только показать, что всеключевые системы, контролирующие состояниепроизводственной среды, работают всоответствии с установленными требованиями и лимиты бактериальной нагрузки непревышены.

4.3. Задачеймикробиологического контроля является получение репрезентативнойоценки бактериальной нагрузки производственной среды.

4.4. Стабильностьасептических условий производственной среды должна обеспечиваться:

-соответствующим проектом производства;

- технологичнымоборудованием (легко моющимся и дезинфицирующимся);

- адекватнойсистемой воздухоподготовки (фильтрация, перепад давлений);

- системойведения документации (рабочие инструкции и регистрация результатов контроля);

- валидированными и сертифицированными процессами деконтаминации;

- надежнымконтролем технологического процесса;

- практикойкачественного поддержания чистоты (уборка, дезинфекция);

- контролемдоступа персонала в АПЗ (соответствующая одежда, процедурапереодевания);

- эффективнымипрограммами обучения персонала;

- гарантиейкачества материалов и оборудования.

4.5. Перечисленныеподдерживающие функции должны обеспечиваться персоналом соответствующейквалификации, обученным правилам работы в АПЗ.

4.6. Программамикробиологического мониторинга производственной среды является документом,который периодически пересматривается и совершенствуется (см. раздел 17Методических рекомендаций МУ 44-116).

5. Общие принципыпроцедуры микробиологического мониторинга

5.1.Вне зависимости от выбора метода тестирования, подготовка, технологическийпроцесс, стерилизация, асептические процессы, контрольные тесты, очистка идезинфекция оборудования и помещений, качество оборудования и используемыхматериалов должны полностью отвечать требованиям GMP.

5.2. Приконтроле используются только откалиброванное оборудование иприборы, прошедшие метрологическую аттестацию.

5.3. Любойметод, выбранный для текущего контроля должен предварительно пройти валидацию.

5.4. При текущеммониторинге предпочтительно использовать те же методы, что и при первичнойаттестации чистого помещения или зоны. Любые изменения методов контроля могутповлиять на результаты.

5.5. Ростовыесвойства питательных сред, используемых для микробиологических исследований,должны подтверждаться использованием соответствующих штаммов микроорганизмов.

5.6. Вписьменных инструкциях, описывающих процедуру микробиологического мониторинга,следует четко излагать шаг за шагом последовательность проведения исследований.

5.7. Полученныерезультаты должны регистрироваться в утвержденных по форме протоколах(журналах). В случаях превышения установленных верхних лимитов бактериальнойнагрузки в АПЗ, должны быть отражены все проведенные расследования имероприятия.

5.8. Персонал,выполняющий программу микробиологического мониторинга должен быть компетентен всоответствующих научных дисциплинах, адекватно обучен и иметь необходимыеполномочия.

5.9. Всеисследования обычно проводятся производственными отделениями. Однако Отделгарантии качества или Технологический отдел, должен проводить периодические,независимые исследования, повторяющие программу микробиологическогомониторинга. Периодичность обследования и протоколы утверждаются руководствомпредприятия.

5.10.Установление соответствующего уровня тревоги и уровня действия, выборадекватных методов контроля, являются предметами, постоянно требующимипересмотра. Все соответствующие решения должны приниматься уполномоченнымперсоналом.

5.11.Уровни тревоги и действия, частота контроля, число точек отбора проб обычноявляются более строгими параметрами при процессе асептического розлива, чем припроизводстве терминально стерилизуемого продукта.

5.12.Процедуры микробиологического мониторинга обычно включают следующие шаги:

- выделениямикроорганизмов из производственной среды (на агаровую поверхность, впитательный бульон или жидкость, на мембрану фильтра);

- посев,если требуется, на питательную среду и культивирование;

- учетрезультатов;

- анализсовокупности полученных при мониторинге данных.

5.13. Данныемониторинга следует учитывать для совершенствования практики уборки идезинфекции.

5.14.Основные факторы, которые необходимо учитывать при определении методологиипроведения тестов, приводятся в приложении.

6. Выбор точек отборапроб

6.1.Расположение точек отбора проб из воздуха и с поверхностей являетсяиндивидуальным для каждого производителя и устанавливается в процессе первичнойили повторной аттестации чистого помещения или чистой зоны.

6.2. При запуске в эксплуатацию нового чистого помещения или зоныпроводится изучениеее функционирования.

Процесс валидации(аттестации) включает в себя:

- определениепрофилей воздушных потоков (карта пространственного распределения);

- определениепрофилей механических частиц (карта пространственного распределения);

- определениепрофилей микроорганизмов (карта контаминации).

6.3. Периодическаявалидация проводится каждые полгода.

6.4. Картамикробной контаминации, полученная при аттестации чистого помещения, выявляетточки наибольшего бактериального загрязнения. Эта карта служит основой длясоставления плана отбора проб при текущем контроле, учитывая потенциальноевлияние на контаминацию продукта.

6.5. Зонынепосредственного контакта воздуха и поверхностей с емкостями, содержащимистерильный продукт, являются критическими и тщательно контролируемыми. Приоперациях асептического наполнения к таким зонам относятся места подачистерильных емкостей и крышек и места наполнения.

6.6. Ключевыми точками для отбора проб при текущем мониторинге являютсяследующие:

- зоны наиболеевысокой вероятности контаминации продукта;

- зонынаибольшего риска скопления микроорганизмов при нормальном рабочем процессе(накопление пыли на поверхностях с электростатическими свойствами,более холодных поверхностях; дверные ручки и т.д.);

-труднодоступные зоны для уборки и дезинфекции;

- точки смежныхзон А, В (100);

- потенциальныеисточники контаминации;

- зонывозмущения воздушного потока рельефом поверхности, смешение потоков.

6.7. В первуюочередь микробиологическому мониторингу должны подвергаться следующие элементыпроизводственной среды:

- воздухпомещений;

-технологическое оборудование;

- инструментарий;

- рабочие поверхности;

- руки операторав перчатках;

- одеждаперсонала;

- контейнеры, вкоторых хранится продукт;

- вода;

- сжатый воздух,инертные газы.

Реже, нопериодически контролируемыми являются также:

- стены, пол ипотолок помещения;

- двери;

- мебель итранспортные тележки;

- контейнеры длясбора отходов;

- инструменты иприборы для тестирования.

6.8. Системаподготовки и распределения воды также может быть источником контаминации. Микробиологическоекачество воды является ключевым фактором для производства МИБП,так как она используется для приготовления препаратов и для различных процессовмойки и ополаскивания. В системе распределения воды следует выбрать контрольныеточки, при необходимости оборудовать порты для отбора проб.

6.9.Ниже приводятся некоторые примеры точек отбора проб, которые могут считатьсянаиболее существенными.

Система

Точка отбора пробы

Воздух (линия розлива)

Около наполняемых емкостей

Воздух помещения

Точки входа и выхода вентиляционной системы, зона манипуляций с продуктом

Вода

Кран водопользования или наполнительной емкости

Поверхность (помещение)

Рабочий стол

Поверхность (оборудование)

Поверхности, контактирующие с продуктом

Оператор линии розлива

Руки в перчатках

Сжатый воздух

Наиболее удаленная от компрессора точка

Ламинарный поток

Около объектов, создающих возмущение потока

6.10. Перечисленныевыше точки отбора проб выбираются каждым предприятием индивидуально,с учетом конкретных производственных условий и зависят также от:

- планировочныхрешений;

- конфигурациилинии розлива;

- данных валидации;

- архивныхданных о процессе;

- методологии тестирования,и т.д.

6.11.Число контрольных точек на одно помещение при текущем контроле:

- воздух - неменее трех;

- поверхности -не менее трех;

- руки - укаждого оператора.

7. Частота и времяотбора проб

7.1. Частотаотбора проб зависит от установленного класса чистоты для данного помещения и отвида обработки, которой подвергается продукт далее в процессе его производства.

7.2. Зоны классаА (100) должны проверяться каждую рабочую смену, зоны класса В(100) также могут проверяться каждую смену или ежедневно, в то время каквспомогательные зоны могут проверяться с меньшей периодичностью, например: зоныкласса С (10000) - два раза в неделю, зоны класса D (100000) - еженедельно.

7.3. Длясравнительного анализа состояний производственной среды, отбор проб долженпроводиться в одно и то же, фиксированное в плане время, т.е. приходиться наравнозначную по интенсивности технологического процесса временную точку.

7.4.Следующие временные точки для отбора проб являются обязательными:

Контроль элементов среды

Время

Воздух

Во время работы

Поверхности

Перед работой

Руки оператора

Перед выполнением асептических манипуляций

Дополнительно,могут проводиться исследования по окончании работы для оценки бактериальной нагрузкиза рабочую смену.

7.5.Периодичность проведения микробиологического мониторинга может значительноварьироваться в зависимости от:

- типапроизводимого продукта;

- планировочныхи технологических решений;

- степенивмешательства человека в процесс;

- использованиятерминальной стерилизации;

- данныхпредшествующего контроля и прочих факторов.

7.6.Технологический процесс, включающий ручные операции, имеет повышенный риск контаминациипродукта, в этих случаях частоту проведения текущего контроля следуетувеличить.

7.7.Ниже в таблице приводится рекомендуемая периодичность проверки контролируемойсреды.

Зоны отбора проб

Периодичность отбора проб

Асептически изготовляемые МИБП

Помещения или зоны А (100)

каждую смену

Окружающие зоны В (100) для зон класса А (100)

каждую смену или ежедневно

Вспомогательные зоны С (10000)

два раза в неделю

Зоны класса D (100000) или вспомогательные зоны потенциального воздействия на продукт

еженедельно

Другие вспомогательные зоны, не имеющие потенциального контакта с продуктом

один раз в две недели

Терминально стерилизуемые МИБП*

Зоны прямого контакта с продуктом

один раз в неделю

Зоны, не имеющие прямого воздействия на продукт

один раз в две недели

Стерильные МИБП для наружного применения

** Зоны прямого контакта с продуктом

один раз в две недели

Зоны, не имеющие прямого воздействия на продукт

один раз в три недели

* если существуют требования к проверкебиологической нагрузки продукта;

** если в течение 12 месяцев не обнаруживается значительных отклонений врезультатах, полученных при проверке, периодичность можно уменьшить до одногораза в три недели.

8. Объем пробы

8.1.Объем пробы воздуха должен быть достаточным как для обнаружения микроорганизмовв заданном объеме воздуха, так и для роста дискретных и пригодных к подсчетуколоний на фильтрующей мембране или агаровой пластине.

8.2. Оптимальнымколичеством КОЕ, выросших на мембране, считается менее 30 и на агаровыхпластинах (чашках Петри) - менее 300 колоний.

8.3. Для импакторови центрифужных пробоотборников одним из ограничивающих факторов являетсявысыхание поверхности агара при больших объемах проб, а также возможностьповреждения целостности агарового слоя(растрескивание).

8.4. Объем пробывоздуха должен устанавливаться опытным путем, с учетом характеристикиспользуемого пробоотборника и концентрации микроорганизмов в тестируемой зоне.

8.5. Для снятиясмывов с плоских поверхностей рекомендуемой является площадь размером 24-30см2, а также стандартные места,например, отпечатки пальцев на агаре, смывтампоном с предплечий рук на халатах у операторов.

9. Выбор питательнойсреды

9.1.Выбор питательной среды для проведения микробиологического мониторинга являетсяодним из важных факторов. Питательная среда должна поддерживать рост широкогоспектра микроорганизмов, включая дрожжи и грибы.

9.2. Приемлемойсредой для контроля микробной загрязненности является среда № 1 (по ГФ изд. XI,вып. 2, с. 200) для бактерий и среда № 2 (агар Сабуро) для дрожжей и грибов.Посевы на среде № 1 инкубируются при температуре от 30 до 35 °С в течение 48 ч, на агаре Сабуро - от 20 до 25 °С в течение 72 ч.

9.3. Передисследованиями, разлитые в чашки Петри или на пластины, питательные средынеобходимо выдерживать в термостате при температуре от 30 до 35 °Св течение 24 ч для подтверждения их стерильности. Проросшие чашки бракуют.

9.4. Ростовыесвойства питательных сред должны быть проверены соответствующими тест-штаммами(для среды № 1 и среды № 2 по ГФ изд. XI,вып. 2, с. 208 «Требования к ростовым свойствам питательных сред»).

9.5. Приконтроле поверхностей, предварительно обработанных дезинфицирующимирастворами, которые могут попадать в питательную среду и ингибировать ростмикроорганизмов, для инактивации действияхимических агентов необходимо добавлять в питательные среды нейтрализаторы,например, твин-80, лецитин или другие (см. ГФизд. XI,вып. 2, с. 195 «Определение антимикробного действия лекарственного средства»).

10. Идентификациявыделенных микроорганизмов

10.1. Всевыявленные в процессе мониторинга окружающей среды микроорганизмы подлежатобязательной макроскопической (форма, цвет, консистенция колоний) имикроскопической идентификации окрашенных по Граму мазков. Результатыисследований должны регистрироваться в документах, где указывают основныеморфологические признаки: отношение к окраске по Граму, наличие или отсутствиеспорообразования, форма микроорганизмов (кокки, палочки, овоидыи т. д).

10.2. Кромеуказанных методов морфологической идентификации существуют также:

- биохимическиетест-системы;

-идентификационные автоматизированные системы.

Производительможет по своему усмотрению применять любые дополнительные современные методыидентификации микроорганизмов, в т.ч. специальные дифференциальные среды длявыявления определенных групп микроорганизмов, или специальные методы, например,метод двуслойного агара для определения анаэробной контаминации.

10.3. Приобнаружении споровых бактерий или грибов необходимо проводитьдополнительные меры дезинфекции помещений.

Идентификациядает возможность предположить источник контаминации, основываясь на преимущественномраспространении микроорганизмов во внешней среде:

Микроорганизмы

Пример

Источник

Грамотрицательные

Pseudomonas

вода

Грамположительные кокки

Staphylococcus

люди

Грамположительные палочки

Propionibacterium

люди, пыль

Грамположительные палочки (споры)

Bacillus

пыль

Плесень, дрожжи

Aspergillus

пыль

10.4. Люди, участвующие впроизводственном процессе, также являются источником контаминации. Ниже приведеныгруппы микроорганизмов, преимущественно встречающиеся в определенных участкахтела человека:

Участки тела человека

Группы микроорганизмов

Кожа

Corynebacterium Staphylococcus, Bacillus

Нос

Micrococcus, Corynebacterium Staphylococcus

Подмышечные впадины

Micrococcus, Corynebacterium, Sarcina

Десны

Streptococcus, Corynebacterium

11. Микробиологическиеусловия и уровни действия для контролируемой среды

Вфармацевтической промышленности на протяжении многих лет используютсяустановленные уровни содержания микроорганизмов, связанные с классом чистотыпомещений - А (100), В (100), С (10000) и D (100000), классификация, принятая ВОЗ и МСА (Серия техническихдокладов Всемирной организации здравоохранения № 823).

Данные уровни считаютсядостижимыми при использовании текущих технологий для контролируемых сред и приведеныв табл. 1.3, 4.1 (см. приложение 1, 4 Методических рекомендаций МУ 44-116 «Асептическое производство медицинскихиммунобиологических препаратов»).

Значения, приведенныениже в таблицах, дополняют и конкретизируют требования к классам чистоты, вотношении поверхностей оборудования и помещений, одежды и рук персонала. Данныепо колониеобразующим единицам (КОЕ) относятся к неспорообразующим микроорганизмам. Присутствие спорообразующих бактерий, грибов и дрожжей недопустимо. При их выявлениинеобходимо проведение дополнительных мер по дезинфекции и выявлению источниковконтаминации.

Рекомендуемыеуровни чистоты поверхностей оборудования и помещения для контролируемых зон в колониеобразующих единицах (КОЕ)

Класс

КОЕ/контактная пластина*

В (100)

2

С (10000)

5

10 (на полу)

* площадь контактной пластины - от 24до 30 см2.

При использованиисмывов с поверхностей необходимо, чтобы площадь снятия смыва была не менее 24 ине более 30 см2.

Рекомендуемые уровни чистоты одежды и рук персонала, работающих в контролируемых зонах в колониеобразующих единицах (КОЕ)

Класс

КОЕ / контактная пластина

Перчатки

Маска, предплечья, бахилы (общее на 1 человека)

В (100)

3

5

С (10000)

10

20

Приведенные вданной таблице уровни микробной контаминации одежды и рук персоналаустанавливаются на конец рабочей смены, при обычных рабочихусловиях. В начале рабочей смены одежда и перчатки должны быть стерильными.Контроль стерильной одежды проводят 1 раз в две недели - непосредственно послестерилизации одежды. Контролируют не менее 3 комплектов из каждой загрузки автоклава.

12. Уровни тревоги идействия и корректирующие мероприятия

Анализрезультатов текущего контроля должен давать постоянную оценку соответствияасептического процесса установленному уровню, т.е. удалось ли достичьустановленного класса чистоты для данного помещения.

В таблицах4.1 и 4.2 (см. приложение 4 «Общий микробиологический мониторинг» Методическихрекомендаций МУ 44-116) приводятся уровнидействия для среды критических и некритических зон, а также мероприятия, рекомендуемыев случае превышения данного уровня действия.

Программакорректирующих мероприятий при превышении установленного уровня действия должнабыть разработана каждым производителем индивидуально, с учетом конкретныхпроизводственных условий, документально оформлена. Протоколы заполняютсярезультатами предусмотренных дополнительных контролей, выводы проведенныхрасследований подписываются ответственными лицами.

Уровни тревоги идействия должны периодически пересматриваться в соответствиис модернизацией процессов или потоков и технологий.

13. Документация

Программамикробиологического мониторинга производственной среды должна быть составлена ввиде рабочего документа, включающего:

- инструкции,описывающие порядок проведения контролей элементовпроизводственной среды;

- планыпомещений с указанием точек отбора проб;

- регулярностьотбора проб;

- временныеточки отбора проб в технологическом процессе;

- описаниеприборов, инструкции по их эксплуатации;

- описаниеиспользуемых методов контроля;

- методыидентификации микроорганизмов;

- уровни тревогии действия;

- программакорректирующих мероприятий;

- формыпротоколов или журналов для регистрации результатов;

- фамилииответственных исполнителей и контролирующего лица.

Формы протоколовконтроля элементов производственной среды должны отражатьследующие параметры:

- дату и времяпроведения теста;

- названиепомещения (технологической стадии);

- методтестирования;

- температуру ивлажность помещения;

- дату последнейкалибровки инструмента;

- уровеньактивности в помещении;

- фамилиюоператора, проводящего отборы проб;

- объемотобранной пробы воздуха или площадь, с которой взят смыв;

- количествопараллельных проб;

- температуру ивремя инкубации;

- результатытеста;

- дату получениярезультатов теста;

-сертификационные данные используемой питательной среды;

- идентификациявыявленных контаминантов (микроскопия окрашенных по Граму мазков);

- фамилиюоператора, проводящего оценку полученного результата;

- переченьпредпринятых, если необходимо, мероприятий или ссылку на протоколкорректирующих действий.

ПриложениеА

Методы контроля

В данномприложении рассматриваются преимущества и недостатки основных методов,используемых в микробиологическом мониторинге для тестирования воздушной среды,рабочих поверхностей, одежды и рук персонала.

Приведенный вданных Методических рекомендациях список литературы может помочь производителюв выборе приемлемых методов контроля.

1. Методытестирования воздушной среды

Микроорганизмыпотенциально всегда присутствуют в воздухе контролируемой рабочей зоны, т. к. HEPA-фильтры,используемые для очистки, не имеют абсолютной 100 % эффективности, даже тогда, когда работают вспецифицированных условиях (класс чистоты А (100)и В (100).

Основной целью микробиологическогоконтроля воздуха асептической зоны является определение уровня и спектрамикробной контаминации, чтобы оценить вероятность ее проникновения впроизводимый продукт.

Для контролямикробной контаминации воздуха применяют два метода -пассивный (качественный) и активный (количественный).

К числу наиболеепопулярных приборов, используемых в активных методах микробиологическогоконтроля воздуха, относятся импакторы и центрифужныепробоотборники, где применяется плотная агаровая питательная среда.

Пассивный метод заключается вэкспозиции открытой плотной питательной среды в течение определенного периодавремени. Главным недостатком метода является выявление только больших быстрооседающихчастиц и неопределенность в объеме отобранной пробы. Фактически данный методявляется качественным и позволяет лишь определить спектр присутствующихмикроорганизмов.

1.1.Активные методы и приборы для контроля микробной контаминации воздуха

Для выбораприемлемого метода активного отбора проб следует учитывать следующие факторы:

- ожидаемаяконцентрация КОЕ в воздушной среде;

- способностьметода работать в условиях низкой концентрации КОЕ;

- чувствительностьбактерий к процедуре пробоотбора;

- время ипродолжительность отбора пробы;

- свойстваприбора (эффективность, объемы проб);

- возможностьдеконтаминации прибора.

Выбор прибора иправильность его использования являются областью ответственности производителя.

Наиболее часто вфармацевтической промышленности используются щелевые импакторыи центрифужные пробоотборники типа RCS.

Учитываяприемлемость по основным характеристикам и удобство использования,рекомендуется применять аэрозольные пробоотборники типа «Флора-100»или Biotest RCS (см. приложение Б«Аэрозольные пробоотборники для контроля бактериальной контаминации воздуха»).

1.2.Пассивный метод контроля микробной контаминациивоздуха

Методзаключается в экспозиции плотной питательной среды в открытых чашках Петри.

Частицы, присутствующиев воздухе, со временем осаждаются на поверхность агара. Время экспозициисоставляет от 15мин до нескольких часов. Однако длительная экспозицияприводит к высыханию поверхности питательной среды и к ухудшению условийсохранения и культивирования бактерий.

Этот методшироко распространен и его применение целесообразно в сочетании с активнымметодом контроля микробной контаминации воздуха.

Открытыечашки Петри располагают в нескольких точках. Например, при розливе препаратов -как можно ближе к наполняющим иглам и в точки «наихудших условий». Васептических зонах класса А (100) и В (100) при экспозиции чашек Петри спитательной средой в течение 30 мин во время работы допускается рост одной,редко двух колоний.

Преимущества

Ограничения

Простота использования

Отбор только быстро оседающих больших частиц

Не требует процесса посева

Влияние температуры на эффективность сбора

Различные типы питательной среды могут быть использованы для проращивания плесени, грибов, всего спектра микроорганизмов или отдельного вида

Сильное влияние скорости и направления воздушного потока по отношению к поверхности среды на результаты теста

Очень экономичен

Неопределенность объема отобранной пробы

2. Методы отборапроб с поверхностей

Для контролямикробной контаминации рабочих поверхностей используются следующие методы:

- смыв;

- контактнаяпластина.

Репрезентативнойсчитается проба, снятая с поверхности площадью от 24 до 30 см2.

Если накопленныерезультаты текущего мониторинга свидетельствуют о постоянном присутствииопределенной группы микроорганизмов, то для их идентификации может бытьиспользован соответствующий тип питательной среды.

Смывы споверхностей проводят стерильным ватным тампоном, укрепленном на стеклянном илиметаллическом держателе, вмонтированном в ватно-марлевую пробку пробирки. Впробирке должно содержаться приблизительно 2 мл стерильной воды для инъекций.

В чашки Петриразливают по 20-25 мл питательной среды № 1 для бактерий и среды № 2 для грибов и дрожжей (по ГФ изд. XI, вып. 2). Передисследованиями чашки с разлитой средой выдерживают в термостате в течение 1суток при температуре от 30 до 35 °С. Проросшие чашки неиспользуют.

Смывы проводят увлажненным тампоном с поверхности площадью от 24до 30 см2.

После взятияпробы провести несколько раз по поверхности питательной среды в двухпараллельных чашках Петри со средой № 1 и № 2. После отбора проб чашки Петрипомещают в термостат для инкубации для среды № 1 при температуре от 30 до 35 °Св течение 48 ч, для среды № 2 - от 20 до 25 °Св течение 72 ч. После истечения срока инкубации проводят подсчет колоний надвух параллельных чашках, делают мазки, фиксируют их и окрашивают по Граму, микроскопируют.

На результатытестирования могут повлиять следующие факторы:

- угол снятияпробы и давление тампона;

- присутствиеостатков дезинфектантов на поверхностях;

- возможностьповторного снятия мазка с того же участка поверхности.

Контактныепластины готовятся с соответствующей плотной питательной средой, разливаяеё на специальные пластины или таким образом, чтобы поверхность агара выступаланад краем чашки Петри.

При исследованииснимают крышку с чашки и стерильная поверхность питательной среды накладываетсяна гладкую ровную поверхность. После снятия отпечатка эту поверхностьнеобходимо обработать спиртом или любым другим дезинфектантом для удаленияостатков питательной среды. После инкубации в соответствии со сроками итемпературой для используемых сред (например, среды № 1и № 2) проводят подсчет колоний и микроскопируют окрашенные по Граму мазки.

Метод контактныхпластин подходит для тестирования гладких и ровных поверхностей, таких, какрабочий стол, стены, пол или одежда персонала.

3. Методы определениямикробной контаминации одежды и перчаток персонала

3.1.Для определения микробной контаминации перчаток персонала используют следующийметод:

Отпечатки пятипальцев каждой руки делают на поверхность плотной питательной среды, например, среды№ 1 и среды № 2 (параллельно). Чтобы касание было полным, рекомендуется сделатьскользящее движение пальцами по всей поверхности агара. Руки после контакта сагаром тщательно обрабатывают спиртом.

Рекомендуетсяследующая частота тестирования: не менее одного раза в рабочую смену для АПЗ,для других - от одного раза в неделю до одного раза в месяц,в зависимости от степени автоматизации технологического процесса.

3.2. Микробнаяконтаминация одежды персонала обычно определяется на предплечьях с помощью контактныхпластин. Также проверяются бахилы.

Можно применять методсмыва тампоном. Для этого делают смывы увлажненным тампоном с 4 участковплощадью по 25 см2 каждый на нижней части двух рукавов, верхней передней поверхностикомбинезона (халата) и шлеме.

Послетестирования одежда не должна более использоваться в АПЗ.

Приложение Б

Аэрозольные пробоотборники для контролябактериальной контаминации воздуха

В данномприложении описан аэрозольный пробоотборник «Флора-100»,имеющий российский сертификат соответствия РОСС RU ИМ04.Н.00128 № 02549128, выданный органом по сертификации АНО «Центр ЦСМИ ВНИИ Медприбор». Пробоотборник рекомендуется для работы во всех классах чистоты А, В(100), С (10000) и D (100000). Возможно применение любого подобногопробоотборника отечественного и зарубежного производства, имеющего сертификатсоответствия и удовлетворяющего по диапазону пробоотборатребованиям, предъявляемым уровню допустимой контаминации к классам чистоты А,В (100), С (10000) и D (100000).

1. Областьприменения и ограничения по использованию пробоотборника «Флора-100»

1.1.Область применения

Определениеконцентрации жизнеспособных микроорганизмов при проведении аттестации итекущего контроля классов чистоты воздуха в чистых комнатах и чистых зонах.

1.2. Ограниченияпо применению

Рекомендации нераспространяются на методы аттестации и контроля уровня вирусологическогозагрязнения воздуха.

2. Устройство ипринцип работы пробоотборника «Флора-100»

Работапробоотборника основана на разгоне воздушного потока с помощью многосопловойрешетки до высокой линейной скорости и инерционном осаждении микроорганизмов наплотную питательную среду, установленную перпендикулярно потоку.

3. Основные технические данные и характеристикипробоотборника «Флора-100»

Пробоотборникрассчитан на эксплуатацию при температуре от 0 до +50 °Спри относительной влажности воздуха - не более 80 %.

Объемнаяскорость отбора пробы - 180 л/мин.

Режимы отборапроб - 25, 100, 250 и 2000 л.

Диапазонизмеряемых концентраций микроорганизмов - 1-104 КОЕ· м-3.

3.1.Метрологическая поверка

Требования пометрологической поверке должны указываться в паспортных данных на прибор.

4. Конструкция пробоотборника «Флора-100»

Пробоотборникоформлен в виде переносного портативного прибора, состоящего из корпуса, вкотором смонтированы блок управления на печатных платах, аспиратор иаккумуляторные батареи; и съемной ситовой решетки. Корпус и ситоваярешетка выполнены из анодированного алюминиевого сплава. Лицевая панель сорганами управления смонтирована на корпусе игерметично закрыта гибкой пластиной. Прибор снабженсъемным электрошнуром с блоком питания.

5. Меры безопасности

При подготовкеприбора к работе необходимо блок питания присоединить сначала к пробоотборнику,а затем включить в сеть. Съем ситовой решетки и замену любого элементапроизводить после отключения прибора и полной остановки двигателя аспиратора.

6. Подготовка пробоотборника «Флора-100» к работе

1. В стерильныечашки Петри разлейте по 15±1 млпитательной среды и оставьте для застывания на ровной горизонтальнойповерхности.

2. Снимитезащитную крышку сопловой решетки пробоотборника.

3. Поворотомпротив часовой стрелки снимите верхнюю часть корпуса с сопловой решетки,увлажните ватным тампоном, смоченным в этиловом спирте, и профламируйтена пламени горелки до полного сгорания спирта. В случае повышенных требований кстерильности операций пробоотбора съемную часть корпуса следует стерилизоватьлибо в автоклаве при t = 121 °С в течение 1 ч, либо всухожаровом шкафу при t = 160 °С в течение 1,5 ч.

4. Установитечашку с питательной средой в держатель пробоотборника, установитеверхнюю часть корпуса в исходное положение и зафиксируйте ее поворотом почасовой стрелке.

5. Подключитеблок питания к импактору и вставьте его в сеть переменного тока 220 В, 50Гц.

6. При питаниипробоотборника от встроенной аккумуляторной батареи (комплектуется потребованию заказчика) блок питания подсоединять к пробоотборнику не следует.

7. Отбор пробы воздуха пробоотборником «Флора-100»

1.Нажмите кнопку [СЕТЬ], расположенную на левой стенке пробоотборника, при этомна передней панели пробоотборника загорится индикатор«ВКЛ».

2. Нажмитекнопку, имеющую маркировку требуемого объема отбираемого воздуха (25, 100, 250,2000 л), при этом над кнопкой загорается красный световой индикатор ипоявляется шум работающего аспиратора.

3. После отборазаданного объема воздуха индикаторная лампа гаснет.

4. Порядокработы пробоотборника от аккумуляторной батареи и сети переменного токаодинаков.

5. Внимание! При работе пробоотборникаот аккумуляторной батареи необходимо не допускать ее разряда ниже 10 В. Принапряжении менее 10 В возникает мигание зеленой индикаторной лампы смаркировкой «РАЗРЯД».

6. Дляповторного отбора пробы воздуха необходимо установить в импакторновую чашку Петри с питательным агаром (см.п.п. 6.2-6.6) и нажать кнопку требуемого объема.

7. По окончании отборанажмите кнопку [СЕТЬ], при этом питание прибора отключается, индикаторная лампа«ВКЛ» гаснет.

8.После отбора пробы снимите верхнюю часть корпуса пробоотборника с сопловойрешеткой, извлеките чашку Петри, закройте ее крышкой и поместите в термостат дляинкубации. После инкубации проведите подсчет колоний на поверхности питательнойсреды.

8. Обработка результатов

1.Для расчета концентрации микроорганизмов в воздухе определяют наиболеевероятное число микробных частиц в пробе.

При количествеколоний, не превышающем 35, наиболее вероятное число колониеобразующихединиц равно числу колоний. Если количество более 35, наиболее вероятное число (Р) колониеобразующих единиц определяется поформуле:

 где

N - количество отверстийв сопловой решетке (N = 367);

п - число колоний.

В таблицепредставлены значения наиболее вероятного числа колониеобразующих единиц дляпробоотборника «Флора-100» (см. табл.).

2. Концентрация микроорганизмовв пробе воздуха определяется путем деления числа колоний или наиболеевероятного числа колониеобразующих единиц на объем отобранной пробы.

Таблица

n

p

n

p

n

p

n

p

n

p

n

p

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

1

1

32

33

63

69

94

108

125

153

156

203

2

2

32

35

64

70

95

110

126

154

157

205

3

3

34

36

65

71

96

111

127

156

158

206

4

4

35

37

66

73

97

112

128

157

159

208

5

5

36

38

67

74

98

114

129

159

160

210

6

6

37

39

68

75

99

115

130

160

161

212

7

7

38

40

69

76

100

117

131

162

162

213

8

8

39

41

70

78

101

118

132

163

163

215

9

9

40

42

71

79

102

119

133

165

164

217

10

10

41

43

72

80

103

121

134

166

165

219

11

11

42

45

73

81

104

122

135

168

166

221

12

12

43

46

74

83

105

123

136

170

167

222

13

13

44

47

75

84

106

125

137

171

168

224

14

14

45

48

76

85

107

126

138

173

169

226

15

15

46

49

77

86

108

128

139

174

170

228

16

16

47

50

78

88

109

129

140

176

171

230

17

17

48

51

79

89

110

131

141

178

172

232

18

18

49

53

80

90

111

132

142

179

173

234

19

19

50

54

81

91

112

133

143

181

174

235

20

21

51

55

82

93

113

135

144

183

175

237

21

22

52

56

83

94

114

136

145

184

176

239

22

23

53

57

84

95

115

138

146

186

177

241

23

24

54

58

85

97

116

139

147

187

178

243

24

25

55

59

86

98

117

141

148

189

179

245

25

26

56

60

87

99

118

142

149

191

180

247

26

27

57

62

88

100

119

143

150

193

181

249

27

28

58

63

89

102

120

145

151

194

182

251

28

29

59

64

90

103

121

147

152

196

183

253

29

30

60

65

91

104

122

148

153

198

184

255

30

31

61

67

92

106

123

150

154

199

185

257

31

32

62

68

93

107

124

151

155

201

186

259

187

259

217

325

247

406

277

510

307

656

337

902

183

161

218

328

248

409

278

514

308

662

338

913

189

263

219

330

249

412

279

518

309

668

339

926

190

265

220

333

250

415

280

523

310

674

340

938

191

267

221

335

251

417

281

527

311

681

341

951

192

269

222

338

252

422

282

531

312

687

342

965

193

271

223

340

253

425

283

535

313

694

343

979

194

273

224

343

254

428

284

539

314

700

344

994

195

275

225

345

255

431

285

544

315

707

345

1009

196

278

226

348

256

434

286

548

316

714

346

1025

197

280

227

350

257

438

287

553

317

721

347

1042

198

282

228

353

258

441

288

557

318

728

348

1059

199

284

229

355

259

444

289

562

319

736

349

1078

200

286

230

358

260

448

290

567

320

743

350

1097

201

288

231

361

261

451

291

571

321

751

351

1117

202

291

232

363

262

455

292

576

322

759

352

1139

203

293

233

366

263

458

293

581

323

767

353

1162

204

295

234

369

264

462

294

586

324

775

354

1186

205

297

235

372

265

465

295

591

325

783

355

1212

206

299

236

374

266

469

296

596

326

792

356

1241

207

302

237

377

267

472

297

601

327

800

357

1271

208

304

238

380

268

476

298

606

328

809

358

1305

209

306

239

383

269

480

299

611

329

819

359

1341

210

309

240

386

270

483

300

617

330

828

360

1382

211

311

241

389

271

487

301

622

331

838

361

1428

212

313

242

391

272

491

302

627

332

848

362

1480

213

316

243

394

273

495

303

633

333

858

363

1542

214

318

244

397

274

498

304

639

334

868

364

1615

215

320

245

400

275

502

305

644

335

879

365

1707

216

323

246

403

276

506

306

650

336

890

366

1829

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

367*

 

* при количестве колоний 367 иболее проба считается недействительной.

Список литературы

1.Производство и контроль медицинских иммунобиологических препаратов дляобеспечения их качества: Санитарные правила СП3.3.2.015-94. - М.:Информационно-издательский центр Госкомсанэпиднадзора России, 1994.

2. Асептическоепроизводство медицинских иммунобиологических препаратов: Методическиерекомендации МУ 44-116. - М., 1997.

3. Организация иконтроль производства лекарственных средств. Стерильные лекарственные средства:Методические указания МУ 42-51-1-93 -МУ 42-51-26-93. - М., 1993.

4.Государственная Фармакопея СССР XI издание, вып.2, 1989.

5. Technical Monograph № 2, «Validation of AsepticFilling for Solution Drug Products», 1992.

6. Center for Devices and Radiological Health «MedicalDevices Quality SystemsManual», p. 6 «Buildings and Environment», 1997.

7. Fundamentals of a Microbiological EnvironmentalMonitoring Program. Technical Report № 13, PDA, 1990.

8. Revisions of the Annex 1 to EU Guide to GoodManufacturing Practice, Brussels, 1996.

19
Мне нравится
Комментировать Добавить в закладки

Комментарии могут оставлять только зарегистрированные пользователи.

Пожалуйста зарегистрируйтесь или авторизуйтесь на сайте.