Государственное санитарно-эпидемиологическоенормирование Российской Федерации
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточныхколичеств этилфенацина
в воде методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии
Методическиеуказания
МУК 4.1.2294-07
1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана(Т.В. Юдина, Н.Е. Федорова, В.Н. Волкова).
2.Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическомунормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителейи благополучия человека (протокол 2 от 21.06.2007).
3.Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты правпотребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачомРоссийской Федерации Г.Г. Онищенко 10 октября 2007 г.
4.Введены в действие с 25 декабря 2007 г.
5. Введены впервые.
Содержание
УТВЕРЖДАЮ
РуководительФедеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г. Онищенко
10 октября 2007 г.
Датавведения: 25 декабря 2007 г.
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств этилфенацина
в воде методомвысокоэффективной
жидкостной хроматографии
Методические указания
МУК 4.1.2294-07
Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективнойжидкостной хроматографии для определения в воде массовой концентрацииэтилфенацина в диапазоне 0,0002 - 0,004 мг/дм3.
2-(α-фенил-α-(4-этилфенил)-ацетил)-индан-1,3-дион(IUPAC)
С2Н5
С25Н20О3
Мол. масса 368,12
Твердоевещество светло-желтого цвета с цветочным запахом. Температура плавления 180 -181°С. Хорошо растворим в большинстве органических растворителей (ацетоне,этаноле, диэтиловом эфире и др.). Практически не растворим в воде - 1,29·10-3мг/дм3.
Остраяпероральная токсичность (LD50) для крыс - более 1 мг/кг.
Область применения
Этилфенацин -ротентицид класса индандионов, обладающий антикоагулянтной активностью,рекомендуется для борьбы с грызунами в открытом грунте (осень, зима, весна) назимующих культурах (зерновые, пастбищные травы, древесные, кустарниковыенасаждения и др.), в защищенном грунте на всех культурах независимо от сезона.Применяется в виде приманки.
ОДУэтилфенацина в воде водоемов - 0,0008 мг/дм3.
При соблюдениивсех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии сданной методикой погрешность (и её составляющие) результатов измерений придоверительной вероятности Р=0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1,для соответствующих диапазонов концентраций.
Таблица1
Метрологические параметры
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (дм3) | Показатель точности (граница относительной погрешности) ±δ, %Р=0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, σг, % | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Вода | от 0,004 до 0,001 вкл. | 100 | 5,3 | 15 | 18 |
| менее 0,001 до 0,0002 | 150 | 5,4 | 15 | 19 |
Полнотаизвлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднегорезультата для полного диапазона концентраций (n=20) приведены в табл. 2.
Таблица 2
Полнота извлечения вещества, стандартноеотклонение, доверительный интервал среднего результата
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, Р=0,95, n=20 |
| предел обнаружения, мг/дм3 | диапазон определяемых концентраций, мг/дм3 | Среднее значение определения % | стандартное отклонение, S, % | доверительный интервал среднего результата, ±, % |
| Вода | 0,0002 | 0,0002-0,004 | 75,3 | 3,6 | 2,5 |
Методика основанана определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемой пробыводы дихлорметаном и последующей очистки экстракта на патроне для твердофазнойэкстракции Sep-Pak Silica.
| | Номер в Государственном реестре средств измерений |
| Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы реестре средств измерений Waters, США) | 15311-02 |
| Весы аналитические ВЛА-200 | ГОСТ 24104 |
| Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2 | ГОСТ 1770 |
| Меры массы | ГОСТ 7328 |
| Пипетки градуированные 2 класса точности, вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3 | ГОСТ 29227 |
| Пробирки градуированные, вместимостью 5 или 10 см3 | ГОСТ 1770 |
| Цилиндры мерные 2 класса точности, вместимостью 10, 50, 100 и 1000 см3 | ГОСТ 1770 |
Допускаетсяиспользование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
| Этилфенацин, аналитический стандарт с содержанием основного вещества (сумма изомеров) 97,9%, в том числе пара-изомер - 61,48%, орто-изомер - 36,42% (ЗАО «Щелково Агрохим») | |
| Ацетонитрил для хроматографии, хч | ТУ 6-09-4326-76 |
| Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над КМпО4 | ГОСТ 6709 |
| н-Гексан, хч | ТУ 6-09-33-75 |
| Натрий серно-кислый безводный, хч | ГОСТ 4166-76 |
| Кислота орто-фосфорная, хч, 85% | ГОСТ 6552 |
| Метилен хлористый (дихлорметан), хч | ГОСТ 12794 |
| Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) эталонный | ГОСТ 4166 |
Допускаетсяиспользование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокойквалификацией.
| Аллонж прямой с отводом для вакуума (для работы с концентрирующими патронами) | |
| Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария) | |
| Бумажные фильтры «красная лента», обеззоленные | ТУ 6-09-2678-77 |
| Воронки делительные вместимостью 1000 см3 | ГОСТ 25336 |
| Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм | ГОСТ 25336 |
| Груша резиновая | |
| Колбы плоскодонные вместимостью 200-250 см3 | ГОСТ 9737 |
| Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 10, 100 и 250 см3 | ГОСТ 9737 |
| Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм | |
| Насос водоструйный | ГОСТ 10696 |
| Патроны для твердофазной экстракции типа Sep-Pak Sillica Cartridges (масса сорбента 690 г) | |
| Пробирки центрифужные | ГОСТ 25336 |
| Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария | ТУ 25-11-917-74 |
| Стаканы химические, вместимостью 50 и 100 см3 | ГОСТ 25336 |
| Стекловата | |
| Стеклянные палочки | |
| Установка для перегонки растворителей | |
| Набор для фильтрации растворителей через мембрану | |
| Хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry® С18, зернением 5 мкм | |
| Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50-100 мм3 | |
| Шприц медицинский с разъемом Льюера | ГОСТ 22090 |
Допускаетсяприменение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными илилучшими техническими характеристиками.
4.1.При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасностипри работе с химическими реактивами по ГОСТ12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками поГОСТ12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации нажидкостный хроматограф.
4.2.Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм,установленных ГН2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ ввоздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ12.0.004.
К выполнениюизмерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не нижелаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведениюпробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опытработы в химической лаборатории.
При выполненииизмерений соблюдают следующие условия:
-процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят притемпературе воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.
-выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях,рекомендованных технической документацией к прибору.
Выполнениюизмерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей(при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционированиехроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения,установление градуировочной характеристики, подготовка патронов длятвердофазной экстракции, проверка хроматографического поведения вещества наних, отбор проб.
7.1.1. Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидомфосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно передупотреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
7.1.2. Очистка этилацетата
Этилацетатпромывают последовательно 5% водным раствором карбоната натрия, насыщеннымраствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняютили подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретическихтарелок не менее50.
7.1.3. Очистка н-гексана
Растворительпоследовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до техпор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральнойреакции промывных вод, перегоняют над поташом.
В мерную колбувместимостью 1000 см3 помещают 870 см3 ацетонитрила, 130см3 бидистиллированной или деионизованной воды и 1 см3 ортофосфорнойкислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
Промываютколонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачирастворителя 1,0 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
7.4.1. Исходный раствор этилфенацина для градуировки (концентрация 100мкг/см3)
В мерную колбувместимостью 100 см3 вносят 0,01 г этилфенацина, добавляют 50-70 см3ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают.Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
Растворы № 1-5 готовят объемным методом путемпоследовательного разбавления исходного раствора для градуировки.
7.4.2. Раствор № 1 этилфенацина для градуировки и внесения(концентрация 10 мкг/см3)
В мерную колбувместимостью 100 см3 помещают 10 см3 исходного раствораэтилфенацина с концентрацией 100 мкг/см3 (п. 7.4.1), разбавляютацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течениемесяца.
Раствориспользуют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечениядействующего вещества методом «внесено-найдено», а также контроле качестварезультатов измерений методом добавок.
7.4.3. Рабочие растворы № 2-5 этилфенацина для градуировки(концентрация 0,05-1,0 мкг/см3)
В 4 мерныеколбы вместимостью 100 см3 помещают по 0,5; 1,0; 2,5 и 10,0 см3градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/см3 (п. 7.4.2),доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают,получают рабочие растворы №№ 2-5 с концентрацией этилфенацина 0,05; 0,1; 0,25 и1,0 мкг/см3 соответственно.
Растворыхранятся в холодильнике в течение недели.
Градуировочнуюхарактеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость суммыплощадей 2 пиков орто- и параизомеров этилфенацина (мкВ·с) от концентрациивещества в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютнойкалибровки по 4 растворам для градуировки №№ 2-5.
В инжекторхроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора ианализируют в условиях хроматографирования по п. 7.5.1. Осуществляют не менее 3параллельных измерений. Устанавливают площади пиков изомеров действующеговещества, рассчитывают сумму площадей орто- и параизомеров этилфенацина.
Градуировочныйграфик проверяют ежедневно по анализу 2 растворов для градуировки различнойконцентрации. Если значения площадей отличаются более чем на 10% от данных,заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используясвежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.
В мерную колбувместимостью 100 см3 помещают 50-70 см3 этилацетата,вносят 2 см ледяной уксусной кислоты, доводят до метки этилацетатом, тщательноперемешивают.
Патрон Sep-Pak Silica устанавливают на аллонж с прямым отводом длявакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом Льюера объемом не менее 10см3, используемый в качестве емкости для элюента.
Концентрирующийпатрон промывают последовательно 5 см3 этилацетата, затем 5 см3смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему). Процедуру проводят с использованиемвакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин,при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
Примечание: В отсутствии специальногоаллонжа, жидкость продавливают через патрон с помощью шприца,скорость продавливания раствора не должна превышать 1-2 капли в сек.
В круглодоннуюколбу вместимостью 10 см3 помещают 0,2 см3 градуировочногораствора № 1 этилфенацина (п.7.4.2), растворитель упаривают досуха при температуре не выше 35°С, остатокрастворяют в 2 см3 этилацетата, помещают на 30 с в ультразвуковую баню.Затем в колбу добавляют 2 см3 гексана, смесь тщательно перемешиваюти вносят на концентрирующий патрон, подготовленный по п.7.7. Колбу обмывают5 см3 смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) и также вносят напатрон. Патрон дополнительно промывают 15 см смеси гексан-этилацетат (1:1, пообъему), 20 см3 смеси этих же растворителей в объемном соотношении3:7, затем 20 см3 этилацетата. Скорость прохождения раствора черезпатрон не должна превышать 1-2 капли в сек. Элюат отбрасывают.
Этилфенацинэлюируют с патрона 40 см3 1% уксусной кислоты в этилацетате (п.7.6), собирая 5 порций элюата по 5 см3 каждая непосредственно вкруглодонные колбы. Растворы в колбах упаривают досуха при температуре не выше35°С. Остаток в каждой колбе растворяют в 2 см3 подвижной фазы(приготовленной по п.7.2) и анализируют содержание этилфенацина по п. 9.3. Фракции, содержащиеэтилфенацин, объединяют и вновь анализируют. Рассчитывают уровень вещества вэлюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объемэлюента.
Примечание: Проверкухроматографического поведения этилфенацина следует проводить обязательно,поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии патронови растворителей.
Отбор пробпроизводится в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общиетребования к отбору проб», «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственнойпродукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определениямикроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79).
Пробы водыанализируют в день отбора, при необходимости хранят в холодильнике притемпературе 4-6°С в течение 10 недель. Для длительного хранения пробызамораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере притемпературе -18°С.
Перед анализомобразцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр.
Образецанализируемой воды объемом 500 см3 помещают в делительную воронку,вместимостью 1000 см3, добавляют 75 см3 хлористогометилена, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2 мин. Послеполного разделения фаз нижний органический слой переносят в круглодонную колбу,вместимостью 250 см3, фильтруя его через 2 см слой безводногосульфата натрия, помещенный в конусную химическую воронку диаметром 60 мм,снабженную бумажным фильтром «красная лента». Операцию экстракции водной фазыповторяют еще дважды порциями этилацетата по 50 см3. Отстоявшийсяслой хлористого метилена (нижняя фаза) фильтруют в колбу с ранее полученнымэкстрактом.
Объединенныйэкстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше40°С, подвергают очистке в соответствии с п. 9.2.
Сухой остаток вколбе, полученный по п. 9.1, растворяют в 2 см3 этилацетата,помещают на 30 с в ультразвуковую баню. Затем в колбу добавляют 2 см3гексана, смесь тщательно перемешивают и вносят на концентрирующий патрон Sep-Pak Silica, подготовленный по п.7.7. Колбу обмывают 5 см3 смеси гексан-этилацетат(1:1, по объему) и также вносят на патрон. Патрон дополнительно промывают 15 см3смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему), 20 см3 смеси этих жерастворителей в объемном соотношении 3:7, затем 20 см3 этилацетата.Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 1-2 капли в сек.Элюат отбрасывают.
Этилфенацинэлюируют с патрона 35 см3 1% уксусной кислоты в этилацетате (п. 7.6), собирая элюатнепосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температурене выше 35°С. Остаток в колбе растворяют в 2 см3 подвижной фазы(приготовленной по п. 7.2) и анализируют содержаниеэтилфенацина по п. 9.3.
Измерениявыполняют при следующих режимных параметрах.
Жидкостныйхроматограф «Breeze» с ультрафиолетовым детектором (фирма Waters,США).
Хроматографическаяколонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry®С18, зернением 5 мкм.
Температураколонки: комнатная.
Подвижная фаза:ацетонитрил-вода-орто-фосфорная кислота (87:13:0,1, по объему).
Скорость потокаэлюента: 1,0 см3/мин.
Рабочая длинаволны: 312 нм.
Чувствительность:0,005 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимойпробы: 20 мм3.
Ориентировочноевремя выхода этилфенацина:
- орто-изомер:8,18-8,24 мин
- пара-изомер:9,25-9,30 мин.
Линейныйдиапазон детектирования: 1-20 нг.
Образцы, дающиепики, большие, чем градуировочный раствор этилфенацина с концентрацией 1 мкг/см3,разбавляют (не более чем в 50 раз) подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной по п. 7.2).
Содержание изопропилфенацина в пробе рассчитываютпо формуле:
где Х-содержаниеэтилфенацина в пробе, мг/дм3;
А - концентрация этилфенацина,найденная по градуировочному графику, в соответствии с величиной суммы площадейхроматографических пиков орто- и параизомеров, мкг/см3;
W - объем экстракта,подготовленного для хроматографирования, см3;
V - объем анализируемого образца воды, см3.
Зарезультат анализа принимают среднее арифметическое результатов двухпараллельных определений, расхождение между которыми не превышает пределаповторяемости (1):
, 
X1, Х2 - результаты параллельных определений, мг/дм3;
r - значение предела повторяемости(табл. 1), при этом r=2,8σr.
Приневыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости,устраняют их и вновь выполняют анализ.
Результат анализапредставляют в виде:
мг/дм3при вероятности Р=0,95, где
- среднее арифметическоерезультатов определений, признанных приемлемыми, мг/дм3;
- граница абсолютной погрешности, мг/дм3;
, где
- граница относительнойпогрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазономконцентраций, табл. 1), %.
В случае если содержаниекомпонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результатанализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,0002 мг/дм3»*
_________________________
* - 0,0002 мг/дм3 - предел обнаружения
Оперативныйконтроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется всоответствии с ГОСТР ИСО 5725-1-2002 - ГОСТР ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецинзионность) методов ирезультатов измерений».
13.1.Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений,анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановыйвнутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводитсяметодом добавок. Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:
,где
- характеристика погрешности (абсолютнаяпогрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента виспытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкойсоответственно) мг/дм3, при этом:
,где
- граница абсолютной погрешности, мг/дм3;
,где
- граница относительной погрешности методики (показательточности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результатконтроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:
, где
- среднееарифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11)содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрациядобавки, соответственно, мг/дм3.
Нормативконтроля К рассчитывают по формуле
Проводятсопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).
Если результатконтроля процедуры удовлетворяет условию
, (2)
процедуруанализа признают удовлетворительной.
Приневыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторномневыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительнымрезультатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверкаприемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождениемежду результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должнопревышать предела воспроизводимости (R)
,где (3)
X1, Х2 - результаты измерений вдвух разных лабораториях, мг/дм3;
R -предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Новости
Библиотека
Soft по ОТ и ПБ
Консультации по ОТ
Обучение по охране труда и пр.
Услуги для ОТ
Форум
Золотой фонд
Соцсеть специалистов (ССОТ)
