МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СОДЕРЖАНИЕ

Дата введения 01.07.76

Настоящий стандартраспространяется на кормовые дрожжи, получаемые из технически чистых культурдрожжей, выращенных на различных субстратах гидролизно-дрожжевых, мелассно-дрожжевых,спиртовых, ацетоно-бутиловых и сульфитно-щелоковых производств. Кормовые дрожжииспользуют при производстве комбикормов, а также в качестве добавки в кормовыерационы сельскохозяйственных животных, сельскохозяйственной птицы и пушных зверей.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Кормовые дрожжипроизводят в гранулированном или порошкообразном виде.

1.2. В зависимости отпоказателей качества кормовые дрожжи подразделяют на четыре группы: высшую,первую, вторую и третью.

1.3.По органолептическим и физико-химическим показателям кормовые дрожжи должнысоответствовать требованиям, указанным в таблице.

Примечания:

1. По согласованию с потребителем допускается предприятиям,применяющим для сушки дрожжей барабанные сушилки, выпускать дрожжи первой,второй и третьей групп влажностью не более 12,0 % при условии использования ихв течение 3 мес. со дня изготовления.

2. По показателю п. 6 таблицы нормы вводилисьдля всех групп дрожжей с 01.01.87. До 01.01.87 нормы по показателю п. 6являлись факультативными.

3. Введение карбамида и других небелковыхазотистых веществ после ферментации не допускается.

4. Показатель п. 5 таблицы действовал до01.01.87.

(Измененная редакция, Изм. № 4, 5, 6).

2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2.1. Кормовые дрожжипринимают партиями. Партией считают любое количество кормовых дрожжей однойгруппы, предназначенное к единовременной отгрузке в один адрес и оформленноеодним документом о качестве. При отгрузке кормовых дрожжей в железнодорожныхвагонах каждый вагон считают партией.

2.2.В документе окачестве должны быть указаны:

наименование организации,в систему которой входит предприятие-изготовитель;

наименованиепредприятия-изготовителя или его товарный знак;

наименование продукта;

наименование группыкормовых дрожжей;

номер партии;

масса нетто-партии;

дата изготовленияпродукта;

номер документа окачестве;

дата выдачи документа окачестве;

количество мест в партии;

результаты анализапродукта (по показателям, указанным в таблице, а также процентное содержаниесырого протеина в кормовых дрожжах при фактической влажности продукта);

обозначение настоящегостандарта.

2.3. Для проверкикачества порошкообразных кормовых дрожжей от партии размером до 100 упаковочныхединиц из разных мест партии делают выборку в количестве 3 %, но не менее двухупаковочных единиц. Если в партии более 100 упаковочных единиц, то отбирают 1 %,но не менее трех упаковочных единиц. От партии гранулированных дрожжей общуюпробу объемом не менее 4 кг отбирают от каждой единицы транспортных средств.

2.4. Принеудовлетворительных результатах испытаний хотя бы по одному показателюпроводят повторные испытания на удвоенном количестве проб, отобранных от той жепартии. Результаты повторных испытаний являются окончательными ираспространяются на всю партию.

2.5. Наличие живых клетокпродуцента и общую бактериальную обсемененность изготовитель определяетпериодически не реже одного раза в квартал.

Токсичность продукта изготовительопределяет периодически не реже одного раза в полугодие.

(Введен дополнительно, Изм. № 4).

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1. Методы отбора проб

3.1.1.Отбор точечных проб - по ГОСТ 13496.0 со следующимидополнениями.

3.1.1.1. Точечные пробыгранулированных дрожжей отбирают из бункеров, силосов при погрузке путемпересечения падающей струи ковшом через равные промежутки времени.

Допускается проводитьотбор точечных проб гранулированных дрожжей для анализа на металломагнитнуюпримесь, наличие живых клеток продуцента и общую бактериальную обсемененностьиз бункера до грануляции.

3.1.1.2. Точечные пробыпродукта, упакованного в бумажные мешки, отбирают мешочным деревянным илиметаллическим щупом, погружаемым в мешок на всю длину щупа или из бункера передзатариванием кормовых дрожжей. Отверстие в мешке после отбора проб заклеивают.

Допускается точечныепробы отбирать из клапана мешков.

3.1.2. Для составленияобъединенной пробы отобранные точечные пробы продукта помещают в чистую тару иперемешивают. К таре прикрепляют этикетку с указанием наименования продукта,номера партии, даты отбора точечных проб.

3.1.3.Среднюю пробу продукта выделяют по ГОСТ 13496.0, делят на дверавные части путем квартования и помещают в чистые сухие банки с плотнозакрывающимися крышками или пробками. Одну из них используют для анализа, адругую опечатывают или пломбируют и хранят на менее 2 мес. на случайразногласий в оценке качества.

К банке со средней пробойпродукта прикрепляют этикетку, на которой должны быть обозначения: наименованиепродукта, наименование предприятия-изготовителя, номер партии, дата отбора проби подпись лица, отбиравшего пробу.

3.1.4.Допускается среднюю пробу хранить в новых герметично закрытых полиэтиленовыхпакетах по ГОСТ 12302.

3.1.5. Для проведениямикробиологических анализов точечные пробы отбирают в стерильную посуду спомощью стерильного щупа или других приспособлений, которые передиспользованием должны быть простерилизованы в лабораторных условияхфламбированием (протиранием ватой, смоченной спиртом, с последующим обжиганиемна огне) или стерилизацией в сушильном шкафу 1,5 ч при температуре 150 - 170°С.

3.1-3.1.5. (Измененная редакция, Изм. № 7).

3.1.6. Масса объединеннойпробы для испытаний по микробиологическим показателям должна быть не менее 1кг.

3.1.7. Допускается дляанализа кормовых дрожжей по всем показателям качества отбирать точечные пробы исоставлять из них одну объединенную пробу массой не менее 5 кг, из которой 1 кгиспользуют для анализа по микробиологическим показателям.

3.1.6, 3.1.7. (Введены дополнительно, Изм. № 7).

3.2. Подготовка проб киспытанию

3.2.1. Дрожжи в гранулахперед испытанием измельчают сначала в ступке, затем на лабораторной мельнице допорошкообразного состояния и просеивают через сито диаметром ячеек 0,25 мм.

3.3. Определение внешнего видаи цвета

3.3.1. Навеску дрожжеймассой около 100 г помещают на гладкую чистую белую поверхность и рассматриваютпри естественном свете, осторожно перемешивая.

3.4. Определение запаха

3.4.1. Навеску массой 20 гвысыпают на чистую бумагу и органолептически определяют запах. Принеобходимости усиления запаха навеску помещают в фарфоровую чашку, которуюнакрывают стеклом, ставят на предварительно нагретую до кипения водяную баню(или сосуд с водой) и прогревают в течение 5 мин, после чего определяют запахиспытуемого продукта.

3.5.Определение массовой доли влаги - по ГОСТ 13496.3со следующим дополнением: допускается использовать весы лабораторные общегоназначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ24104.

(Измененная редакция, Изм. № 7).

3.5.1-3.5.3. (Исключены, Изм. № 7).

3.6. Определение содержаниясырого протеина

3.6.1. Оборудование, материалы и реактивы

Для проведения испытанияприменяют:

весы аналитические маркиАДВ-200 или других аналогичных марок;

измельчитель механическийили ступку фарфоровую по ГОСТ9147;

колбу Кьельдалявместимостью 1000 или 700 см³ и колбы конические вместимостью 150 -250 см³ по ГОСТ25336;

пробирки стеклянные по ГОСТ25336;

воронки стеклянныедиаметром 4 - 5 см по ГОСТ25336;

бюретку вместимостью 50см³;

колбонагреватель;

цилиндры мерные по ГОСТ1770;

холодильник стеклянныйлабораторный по ГОСТ25336;

воронки капельные;

прибор для отмериванияжидкости по ГОСТ6859 (автоматическая пипетка на 10 см³);

каплеуловитель по ГОСТ25336;

промывалку стекляннуюлабораторную;

бумагу лакмусовуюкрасную;

кислоту серную по ГОСТ 4204, х.ч., концентрированную, плотностью 1,84 г/см³ и 0,05 моль/дм³раствор;

гидроокись натрия по ГОСТ 4328,х. ч., 33 %-ный и 0,1 моль/дм³ растворы;

водорода перекись(пергидроль) по ГОСТ 10929плотностью 1,11 г/см³, 30 %-ный раствор;

индикатор смешанный по ГОСТ4919.1;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709.

(Измененная редакция, Изм. № 2, 3, 4).

3.6.2. Проведение испытания

Навеску дрожжей массой около15 г дополнительно растирают и отвешивают около 0,5 г дрожжей с погрешностью неболее 0,0002 г в длинную сухую пробирку, свободно входящую в горлышко колбыКьельдаля. В сухую колбу Кьельдаля осторожно высыпают навеску продукта, повозможности глубже опуская пробирку в горлышко колбы. Пробирку вновьвзвешивают. По разнице между первым и вторым взвешиваниями определяют массунавески, взятой для анализа. Прилипшие к горлышку колбы частицы продуктасмывают концентрированной серной кислотой. В колбу с навеской вливают около 15см³ концентрированной серной кислоты. Колбу с содержимым ставят внаклонном положении в колбонагреватель, закрепив горлышко колбы в штативе.

Сжигание продуктапроизводят под тягой, так как при сжигании происходит выделение сернистого ангидрида.Для уменьшения испарения жидкости горлышко колбы закрывают воронкой. Присжигании необходимо следить, чтобы содержимое колбы сильно не вспенивалось.Сжигание продукта с кислотой производят в течение 40 мин. По истечении этоговремени, отключив нагрев, в колбу Кьельдаля из автоматической пипеткивместимостью 10 см³ приливают перекись водорода. Перекись водородаследует приливать осторожно, по стенке колбы, вначале по каплям, а затем, помере уменьшения выделения белых паров, скорость приливания перекиси водородаувеличивают до 1 - 2 см³ за один прием. Перекись водорода приливаютдо полного обесцвечивания раствора. Общий расход перекиси составляет 10 - 20 см³.После окончания приливания перекиси водорода сжигание продолжают еще 20 мин.Общее время сжигания продукта продолжается около 1 ч 10 мин.

По окончании сжиганияпродукта колбу охлаждают и, добавляя дистиллированную воду, доводят общий объемраствора до 200 - 250 см³.

Образовавшуюсясоль сернокислого аммония разрушают гидратом окиси натрия и отгонку аммиакапроизводят в специальном приборе (см. чертеж). Колбу Кьельдаля соединяют черезкаплеуловитель с шариковым холодильником. Нижний конец трубки холодильника,удлиненный до 16 - 17 мм, погружают в 0,05 моль/дм³ раствор сернойкислоты, налитый в приемную коническую колбу вместимостью 250 см³ вколичестве 50 см³. В раствор кислоты добавляют 5 - 6 капельсмешанного индикатора. После окончания подготовки установки для проведенияанализа включают нагрев и осторожно приливают из капельной воронки 100 см³33%-ного раствора гидроокиси натрия. Капельную воронку промывают два-три раза10 - 15 см³ дистиллированной воды, оставляя небольшое количествожидкости в воронке для создания гидрозатвора.

Установка для отгонки аммиака при определениисодержания сырого протеина в кормовых дрожжах

В процессе отгонки аммиака следят за тем, чтобы конецтрубки холодильника был погружен в раствор, находящийся в приемной колбе, наглубине не более 1 см.

Отгонку ведут до тех пор,пока объем раствора в приемной колбе увеличится примерно в три раза. Окончаниеотгонки аммиака проверяют по красной лакмусовой бумажке. Для этого удаляютподставку и опускают приемную колбу. Конец трубки промывают дистиллированнойводой, после чего смачивают красную лакмусовую бумажку каплей жидкости, стекающейиз трубки холодильника. Если лакмусовая бумажка не изменяет окраску, отгонкуаммиака считают законченной, если посинеет - отгонку следует продолжать.

По окончании отгонкиаммиака приемную коническую колбу опускают с таким расчетом, чтобы конец трубкихолодильника не касался раствора. Колбу Кьельдаля отсоединяют от холодильника,а затем через воронку промывают дистиллированной водой внутреннюю поверхностьтрубки холодильника, а потом обмывают и наружную часть трубки, котораяопускалась в кислоту. Содержимое приемной колбы титруют 0,1 моль/дм³ (длягидроокиси натрия) раствором гидроокиси натрия до обесцвечивания (одна капляизбытка гидроокиси натрия дает зеленое окрашивание раствора).

Контрольный опыт ваналогичных условиях, но без навески анализируемого продукта проводят прииспользовании заново приготовленных реактивов.

(Измененная редакция, Изм. № 5).

3.6.3. Обработка результатов

Содержание сырогопротеина (X) в пересчете на абсолютно сухое вещество в процентах вычисляютпо формуле:

,

где V_l - объем 0,1 моль/дм³ раствора гидроокиси натрия,израсходованный на титрование 50 см³ 0,05 моль/дм³раствора серной кислоты в контрольном опыте, см³;

V₂ - объем 0,1 моль/дм³ раствора гидроокиси натрия,израсходованный на титрование остатка серной кислоты, не связанной свыделившимся аммиаком при его отгонке, см³;

К - поправочный коэффициент к титру0,1 моль/дм³ раствора гидроокиси натрия;

0,0014 - количествоазота, эквивалентное 1 см³ точно 0,05 моль/дм³ растворасерной кислоты;

6,25 - коэффициент дляпересчета азота на сырой протеин;

т - масса навески дрожжей, г;

W - влажностьдрожжей, %.

За окончательныйрезультат принимают среднее арифметическое результатов двух параллельныхопределений.

Допускаемые расхождения междурезультатами параллельных определений не должны превышать ±0,3%.

(Измененная редакция, Изм. № 4).

3.6.4.При разногласиях, возникших в оценке содержания сырого протеина, испытанияпроводят по ГОСТ 17681.

Обработка результатов -по п. 3.6.3.

3.7. Определение содержаниязолы

Сущность методазаключается в озолении навески дрожжей в присутствии спиртового растворауксуснокислого магния, который легко разлагается при нагревании и образует внавеске дрожжей большое количество пор.

3.7.1. Оборудование, материалы и реактивы

Для проведения испытанияприменяют:

тигли фарфоровые по ГОСТ9147 диаметром 4 - 5 см, высотой 3 - 4 см;

спирт этиловый по ГОСТ18300 или ГОСТ 5962;

йод по ГОСТ 4159, ч. или ч. д. а.;

эксикатор по ГОСТ25336;

печь муфельную;

магний уксуснокислый поНТД;

щипцы муфельные длятиглей;

кальций хлористый по ТУ6-09-4711.

(Измененная редакция, Изм. № 2, 3).

3.7.2. Подготовка к испытанию

Приготовление спиртового раствора уксуснокислого магния

Навеску уксуснокислогомагния массой 16,1 г растворяют в мерной колбе вместимостью 1 дм³ в96%-ном этиловом спирте, добавляют 2 - 3 кристаллика металлического йода идоливают спиртом до метки. Содержимое колбы хорошо размешивают. Раствор должениметь стойкую желтоватую окраску.

Для проверки точностиприготовления раствора уксуснокислого магния пипеткой вливают 3 см³раствора в прокаленный до постоянной массы фарфоровый тигель. Спирт выпариваюти остаток прокаливают. При прокаливании 3 см³ растворауксуснокислого магния должно получиться 0,01 г окиси магния.

3.7.3. Проведение испытания

В прокаленный допостоянной массы фарфоровый тигель помещают навеску дрожжей массой 1 г. Втигель добавляют из бюретки 3 см³ спиртового раствора уксуснокислогомагния и оставляют на 3 мин, чтобы дрожжи пропитались раствором. Затем тигельпомещают на откидную дверцу муфельной печи, нагретой до темно-красного каления(не более 800°С), и поджигают спирт, после чего тигель переносят в муфельнуюпечь. Тигель охлаждают в эксикаторе и добавляют в него 2 - 3 см³ этиловогоспирта.

Озоление дрожжей проводятв течение 40 мин.

Затем тигель помещают наэлектроплитку с закрытой спиралью и поджигают спирт, после чего тигельпереносят в муфельную печь, нагретую до темно-красного каления (не более 550°С)и проводят озоление в течение 3 ч.

(Измененная редакция, Изм. № 4, 7).

3.7.4. Обработка результатов

Содержание золы (X) в процентах вычисляют по формуле:

,

где т - массанавески дрожжей, г;

т₁-масса золы в тигле после озоления навески дрожжей и прокаливания 3 см³спиртового раствора уксуснокислого магния, г;

т₂ - масса окиси магния, полученная отпрокаливания 3 см³ спиртового раствора уксуснокислого магния, г;

W - влажностьдрожжей, %.

За окончательный результат испытания принимаютсреднее арифметическое результатов двух параллельных определений.

Допускаемые расхождениямежду результатами параллельных определений не должны превышать ±0,05 %.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

3.8. Определение крупностигранулированных дрожжей

3.8.1. Определение размеров гранул

3.8.1.1. Оборудование

Для проведения испытанияприменяют микрометр.

3.8.1.2. Проведениеиспытания

Диаметр и длину каждойгранулы измеряют микрометром или штангенциркулем.

3.8.1.3. Обработкарезультатов

Диаметр (D) или длину гранул (h) в миллиметрах рассчитывают как среднюю арифметическуювеличину измерений 10 гранул по формуле:

,

где D - диаметр гранул, мм;

п - длина гранул, мм;

D₁(h₁) - D₁₀(h₁₀)^-диаметр или высота гранул, взятых для испытания, мм.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

3.8.2. Определение остатка на сите

3.8.2.1.Оборудование

Для проведения испытанияприменяют:

сито штампованное сотверстиями диаметром 3 мм;

анализатор ситовоймеханический марки АЛГ-М;

весы лабораторные спогрешностью взвешивания не более 0,01 г по ГОСТ24104.

(Измененная редакция, Изм. № 3).

3.8.2.2. Проведениеиспытания

Навеску гранулированныхдрожжей массой 100 г просеивают через сито. Просеивание производят в течение 5мин. Допускается просеивание ручным способом при 110 - 120 движениях в минуту иразмахе колебаний сита около 10 см.

После полной остановкианализатора остаток на сите взвешивают на технических весах с погрешностью неболее 0,1 г.

3.8.2.3. Обработкарезультатов

Остаток на сите (М) в процентах кнавеске, взятой для испытания, вычисляют по формуле:

,

где т - массанавески до просеивания, г;

т₁ - масса навески на сите послепросеивания, г.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

3.9. Определение содержанияметалломагнитных примесей

3.9.1.Проведение испытания - по ГОСТ 13496.9.

3.10. Определение массовой долибелка по Барштейну

Для количественногоопределения белка пользуются его способностью осаждаться солями меди или другихметаллов.

3.10.1. Оборудование, материалы и реактивы

Для проведения испытанияприменяют:

весы аналитические маркиАДВ-200 или других аналогичных марок;

ступку фарфоровую по ГОСТ9147;

стаканчик для взвешиванияпо ГОСТ25336;

фильтр обеззоленныйбумажный;

термостат;

стакан вместимостью 100см³ по ГОСТ25336;

колбу Кьельдалявместимостью 700 или 1000 см³ по ГОСТ25336;

электроплитку;

медь (II) сернокислую 5-водную по ГОСТ 4165,6 %-ный раствор;

натрия гидроксидтехнический по ГОСТ 2263, 1,25 %-ныйраствор;

кислоту серную по ГОСТ 4204, х.ч., концентрированную, плотностью 1,84 г/см³ и 0,05 моль/дм³раствор;

водорода перекись(пергидроль) по ГОСТ 10929,плотностью 1,11 г/см³, 30 %-ный раствор.

3.10.2. Проведение испытания

Навеску дрожжей массой0,5 - 0,8 г, подготовленную по п. 3.6.2,взвешивают в стаканчике с крышкой на аналитических весах с погрешностью неболее 0,0002 г и осторожно переносят в лабораторный стакан вместимостью 100 см³.Стаканчик вновь взвешивают и по разнице между первым и вторым взвешиваниемопределяют массу навески, взятой для анализа.

В стакан приперемешивании вносят 30 - 50 см³ нагретой до кипениядистиллированной воды, после чего прибавляют 25 см³ 6 %-го раствора5-водной сернокислой меди (II)и затем при помешивании приливают 25 см³ 1,25 %-ного раствора гидроокисинатрия.

После отстаивания осадкажидкость сливают через фильтр, осадок промывают горячей водой до тех пор, покафильтрат, стекающий с воронки, не будет бесцветным. Осадок с фильтромподсушивают в термостате при (105 ±2)°С около 20 мин, затем помещают в колбуКьельдаля, добавляют около 20 см³ концентрированной серной кислоты,тщательно перемешивают, добавляют 5 - 10 см³ перекиси водорода иперемешивают до полного растворения дрожжей.

Сжигание пробы и отгонкуаммиака проводят по п. 3.6.2. Сжигание пробы проводят до бесцветного состоянияохлажденного раствора.

Обработка результатов -по п. 3.6.3.

3.11. Определение наличия живыхклеток продуцента

3.11.1. Оборудование, материалы и реактивы

Для проведения испытанияприменяют: термостат суховоздушный;

колбы коническиевместимостью 250 см³ по ГОСТ25336;

цилиндры вместимостью 100см³ по ГОСТ1770;

пипетки с расширеннымконцом вместимостью 1 см³;

чашки Петри по ГОСТ25336;

баню водяную;

стерилизатор;

весы лабораторные спогрешностью взвешивания не более 0,0001 г по ГОСТ24104;

шпатель металлический;

раствор физиологическийрН 5,6 или вода водопроводная стерильные;

сусло-агар.

3.11.2. Проведение испытания

В стерильную коническуюколбу вместимостью 250 см³ из пробы, отобранной по п. 3.1.3,фламбированным шпателем берут навеску продукта массой 10 г, взвешенную спогрешностью 0,001 г, заливают стерильными 90 см³ физиологическогораствора или водопроводной воды, тщательно перемешивают и инкубируют колбу притемпературе 30 - 32°С в течение 18 - 22 ч. 1 см³ суспензии из колбывносят в чашку Петри и заливают расплавленным и охлажденным до температуры 40 -45°С сусло-агаром, осторожно перемешивая. После застывания агара чашки Петри перевертываюткрышками вниз и инкубируют в термостате при температуре 36 - 38°С в течение 48ч.

3.11.3. Обработка результатов

Оценку результатовпроводят через 48 ч. Если нет роста колоний продуцента, то дается заключение оботсутствии живых клеток продуцента.

3.12. Определение общейбактериальной обсемененности

3.12.1. Оборудование, материалы и реактивы

Для проведения испытанияприменяют:

термостат суховоздушный;

колбы коническиевместимостью 250 см³ по ГОСТ25336;

цилиндры вместимостью 100см³ по ГОСТ1770;

пипетки с расширеннымконцом вместимостью 1 см³ и пипетки вместимостью 10 см³;

чашки Петри по ГОСТ25336;

пробирки стеклянные по ГОСТ25336;

раствор физиологическийрН 7,0 или воду водопроводную стерильные;

шпатель металлический;

прибор для подсчетаколоний;

агар мясо-пептонный или

агар сухой дрожжевой(АСД);

баню водяную.

3.12.2. Подготовка к испытанию

3.12.2.1. Приготовлениемясо-пептонного бульона (МПБ)

500 г мяса,освобожденного от костей, жира и сухожилий, разрезают на мелкие куски или пропускаютчерез мясорубку, заливают в стеклянной или эмалированной посуде 1000 см³стерильной водопроводной воды, нагретой до 50°С, и оставляют в термостате при30°С на 6 ч, при 37°С на 2 ч или при комнатной температуре на 12 ч. Затемнастой кипятят, фильтруют через марлю или вату, фильтрат кипятят 30 мин. Послеостывания фильтрат снова фильтруют через марлю или вату, фильтрат кипятят 30мин. После остывания фильтрат снова фильтруют через вату, объем доводят водойдо 1000 см³ и к полученной мясной воде добавляют 5 г хлористогонатрия и 10 г пептона, нагревают до полного растворения пептона и соли,устанавливают рН 7,2 - 7,4 питьевой водой.

Полученный мясо-пептонныйбульон разливают в пробирки или колбы в количествах, необходимых для испытания,закрывают ватными пробками и стерилизуют в автоклаве при давлении 98,07 кПа (1кгс/см²) 20 - 30 мин.

3.12.2.2. Приготовлениемясо-пептонного агара (МПА)

Для приготовлениямясо-пептонного агара (МПА) к 1000 см³ мясо-пептонного бульонадобавляют 15 г агара, нагревают до полного растворения, проверяют рН 7,2 - 7,4,осветляют, фильтруют в горячем виде через ватно-марлевый фильтр и разливают впробирки или колбы в количествах, необходимых для испытания, закрывают ватнымипробками и стерилизуют в автоклаве при давлении 98,07 кПа (1 кгс/см²)30 мин.

Допустимая погрешностьвзвешивания мяса, пептона, соли и агара - не более 0,1%.

3.12.3. Проведение испытания

В стерильную пробирку изпробы продукта, отобранной по п. 3.1.3,фламбированным шпателем берут навеску массой 1 г, взвешенную с погрешностью неболее 0,0002 г. К навеске добавляют стерильных 9 см³физиологического раствора (рН 7,0) или водопроводной воды и тщательноперемешивают стерильной стеклянной палочкой до получения однородной суспензии.Из первого разведения 1:10 готовят следующее разведение 1:100, из которогоготовят разведение 1:1000 и т.д.

Порядок разведениявыбирают в зависимости от предполагаемой обсемененности продукта с тем, чтобына чашках развивалось 30 - 300 колоний бактерий. Для приготовления каждогоразведения используют стерильную пипетку с расширенным концом.

Посев производят издвух-трех, а в отдельных случаях и более последовательных разведений. Каждоеразведение высевают на 2 - 3 чашки Петри. По 1 см³ суспензии вносятв чашку Петри и заливают 12 - 15 см³ расплавленного и охлажденногодо 45°С мясо-пептонного или дрожжевого агара. Содержимое чашки тщательноперемешивают осторожными вращательными движениями для равномерногораспределения посевного материала.

После застывания агарачашки Петри перевертывают крышками вниз и инкубируют в термостате притемпературе 37°С в течение 48 ч.

3.12.4. Обработка результатов

Количество выросшихколоний подсчитывают в каждой чашке.

Оценку результатов производятпо посеву того разведения, в котором количество выросших колоний составляет от30 до 300. По результатам подсчета вычисляют среднее арифметическое значениечисла колоний во всех посевах этого разведения. Если в двух следующих друг задругом разведениях количество колоний на чашках находится в пределах 30 - 300,то подсчитывают количество колоний в каждом из этих разведений раздельно ивычисляют среднее арифметическое значение при условии, что полученныерезультаты не отличаются друг от друга более, чем в два раза. В противномслучае результаты посева оценивают по наибольшему разведению.

Количество бактерий в 1 гпродукта вычисляют умножением среднего арифметического значения насоответствующее разведение навески.

3.13. Определение токсичности

Метод основан наизвлечении токсических веществ из кормовых дрожжей ацетоном и введенииконцентрированного экстракта однократно в желудок белым мышам.

3.13.1. Оборудование, материалы и реактивы

Для проведения испытанияприменяют: весы технические;

размельчитель кормов;

колбы с притертой пробкойвместимостью 500 см³;

шуттель-аппарат;

фильтры бумажные («белаялента»);

чашки выпарительные по ГОСТ9147;

баню водяную;

шприц вместимостью 1 см³с тупыми углами;

ацетон, х. ч., по ГОСТ 2603;

масло растительное;

мышей белых массой 20 -25 г.

3.13.2. Подготовка к испытанию

Навеску дрожжей массой100 г, взвешенную на технических весах с погрешностью не более 0,1 г, помещаютв колбу с притертой пробкой, заливают 300 см³ ацетона и экстрагируютпри встряхивании на шуттель-аппарате в течение 2 - 3 ч, а при отсутствиишуттель-аппарата навеску исследуемого продукта заливают ацетоном и оставляютпри комнатной температуре на 24 ч, периодически встряхивая. Экстракт фильтруютчерез бумажный фильтр в выпарительные чашки, добавляют в него 2,5 см³растительного масла, выпаривают ацетон на водяной бане при температуре 45 -50°С в вытяжном шкафу до исчезновения запаха ацетона.

3.13.3. Проведение испытания

Для опыта берут 5 белыхмышей массой по 20 - 25 г, выдерживают без корма 4 - 5 ч, после чего с помощьюшприца с тупой иглой (3 - 4 см длины) вводят однократно через рот в желудок 0,5см³ экстракта. Наблюдают за мышами в течение 3 сут, не ограничиваяих в кормлении и питье. В случае отсутствия падежа мышей убивают (эфиром) ивскрывают.

В качестве контроля 5мышам вводят растительное масло, которое использовалось для разведенияэкстракта.

3.13.4. Обработка результатов

Гибель всех или хотя быодной мыши и обнаружение на вскрытии катарального воспаления желудочно-кишечноготракта, дегенерации печени, почек, кровоизлияний во внутренних органахуказывает на токсичность исследованных кормовых средств.

Нетоксичные кормовыесредства не вызывают гибели мышей и на вскрытии патологических изменений необнаруживают.

При отсутствии гибелимышей и наличии на вскрытии катарального воспаления кишечника исследованиеповторяют. Если при повторном исследовании нет гибели мышей, то кормовыесредства считают нетоксичными.

(Измененная редакция, Изм. № 4).

4. УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ ИХРАНЕНИЕ

4.1. Упаковка, маркировка,транспортирование и хранение - по ГОСТ26498 со следующим дополнением: при отгрузке гранулированных дрожжей накаждое транспортное место прикрепляют бирку с указанием наименованияпредприятия-изготовителя или его товарного знака, наименования продукта, номерапартии, даты изготовления, обозначения нормативно-технического документа.

Разд. 4. (Измененная редакция, Изм. № 7).

5. ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ

5.1. Кормовые дрожжидолжны быть приняты отделом технического контроля предприятия-изготовителя.

Изготовитель гарантируетсоответствие кормовых дрожжей требованиям настоящего стандарта при соблюденииусловий транспортирования и хранения.

(Измененная редакция, Изм. № 3).

5.2. Гарантийный срокхранения кормовых дрожжей - шесть месяцев со дня изготовления.

ГОСТ 20083-74 С. 11

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕНГлавным управлением микробиологической промышленности при Совете Министров СССР

РАЗРАБОТЧИКИ

И.С. Воропаев,Л.П. Выродова, К.П. Шулакова

2. УТВЕРЖДЕН ИВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета стандартов СоветаМинистров СССР от 20.08.74 № 2020

3. ВВЕДЕНВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕНОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

5. Ограничениесрока действия снято по протоколу № 2-92 Межгосударственного Совета по стандартизации,метрологии и сертификации (ИУС 2-93)

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ с Изменениями № 2, 3, 4, 5, 6, 7,утвержденными в мае 1976 г., августе 1983 г., ноябре 1984 г., январе 1986 г.,августе 1986 г., декабре 1989 г. (ИУС 6-76, 9-83, 2-85, 5-86, 11-86, 3-90)