На главную
На главную

СанПиН 1437-76 «Инструктивно-методические указания по устройству, эксплуатации и санитарному контролю плавательных бассейнов с морской водой»

Указания распространяются на проектирование, строительство, эксплуатацию и реконструкцию купально-плавательных и лечебных бассейнов с морской водой и водозаборы указанных сооружений

Обозначение: СанПиН 1437-76
Название рус.: Инструктивно-методические указания по устройству, эксплуатации и санитарному контролю плавательных бассейнов с морской водой
Статус: действующий
Дата актуализации текста: 01.10.2008
Дата добавления в базу: 01.02.2009
Дата введения в действие: 05.07.1976
Разработан: Южгипрокоммунстрой Минжилкомхоза УССР
Институт общей и коммунальной гигиены им. А.Н. Сысина АМН СССР
ВНИИ дезинфекции и стерилизации Минздрава СССР
АКХ им. К. Д. Памфилова 123371, Москва, Волоколамское шоссе, 116
Утвержден: Главный государственный санитарный врач СССР (05.07.1976)
Опубликован: Типография Минздрава СССР № 1976

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР

ИНСТРУКТИВНО-МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО УСТРОЙСТВУ, ЭКСПЛУАТАЦИИ И САНИТАРНОМУ
КОНТРОЛЮ ПЛАВАТЕЛЬНЫХ БАССЕЙНОВ
С МОРСКОЙ ВОДОЙ

Москва 1976 г.

Инструктивно-методические указанияразработаны Институтом общей и коммунальной гигиены им. А.Н. Сысина АМН СССР(В.Г. Субботин, Т. З. Артемова, Т.А. Николаева, Л.Е. Корш, Ю.Г. Талаева, Р.М.Абиева, Ю.И. Немыря, А.Ф. Скворцов), Всесоюзным НИИ дезинфекции и стерилизацииМЗ СССР (И.А. Малевская, Н.Ф. Соколова) при участии Академии коммунальногохозяйства им. К.Д. Памфилова (В.М. Иванов) и проектного института“Южгипрокоммунстрой” (П.А. Зуев, Н.Г. Венгрисинен).

УТВЕРЖДАЮ

ЗаместительГлавного

Государственного санитарного

врачаСССР

А.И. Заиченко

5июля 1976 года

№1437-76

ИНСТРУКТИВНО-МЕТОДИЧЕСКИЕУКАЗАНИЯ
ПО УСТРОЙСТВУ, ЭКСПЛУАТАЦИИ И САНИТАРНОМУ
КОНТРОЛЮ ПЛАВАТЕЛЬНЫХ БАССЕЙНОВ
С МОРСКОЙ ВОДОЙ

Настоящие указанияраспространяются на проектирование, строительство, эксплуатацию и реконструкциюкупально-плавательных и лечебных бассейнов с морской водой и водозаборыуказанных сооружений.

Указания определяют основныепринципы организации, эксплуатации и санитарного контроля плавательныхбассейнов с морской водой и предназначены для обеспечения эпидемическийбезопасности и благоприятных санитарных условий оздоровительно-лечебногоиспользования морских вод.

1. Требования кморской воде в местах водозаборов и бассейнах по санитарно-химическим исанитарно-микробиологическим показателям

1.1.Состав и свойства морской воды в местах водозаборов и бассейнах должнысоответствовать следующим общим требованиям и нормативам:

Таблица 1

ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ И НОРМАТИВЫСОСТАВА И СВОЙСТВ МОРСКОЙ ВОДЫ В МЕСТАХ ВОДОЗАБОРОВ И БАССЕЙНАХ

Показатели

Общие требования и нормативы

1

2

Плавающие примеси

Отсутствие необычных для морской воды плавающих веществ на поверхности и в толще воды (пленки, масляные пятна, включения и др. примеси)

Запах

Интенсивность необычных для морской воды запахов не должна превышать практического порога восприятия (2 балла).

Прозрачность1

Не менее 30 см по шрифту Снеллена

Окраска

Не допускается окраска морской воды в столбике воды 10 см

Биохимическая потребность воды в кислороде (БПК5)

Не должна превышать 3,0 мг/л О2 при 20 °С

Азот аммиака солевого2

Не более 0,5 мг/л

Общая соленость

Не допускается изменение естественного уровня общей солености морской воды

Вредные вещества3

Регламентируются в соответствии с перечнем разрабатываемых гигиенических нормативов для морских вод

Примечания:

1. В случаях,когда снижение прозрачности морской воды в местах водозаборов обусловлено местнымигидрофизическими, топографо-гидрогеологическими и другимиприродно-климатическими факторами, величина ее не регламентируется.

2. Содержаниев воде азота аммиака солевого определяется в бассейнах.

3.Предельнодопустимые концентрации (ПДК) вредных веществ, принятые в “Правилахохраны поверхностных вод от загрязнения сточными водами” № 1166-74, временнораспространяются на водозаборы оздоровительно-лечебного использования морскихвод впредь до разработки специальных нормативов для прибрежных вод морей.

1.2.Показатели эпидемической безопасности морской воды.

Косвенными показателямибезопасности воды в эпидемическом отношении являются: в отношении возбудителейкишечных инфекций - бактерии группы кишечных палочек и энтерококки: В отношениивозбудителей инфекций верхних дыхательных путей, кожных покровов и др. -стафилококки; общее микробное загрязнение оценивается по количеству бактерий в1 мл воды.

Морская вода плавательныхбассейнов считается безопасной в эпидемическом отношении при следующихзначениях косвенных показателей (таблица 2):

Таблица 2

ТРЕБОВАНИЯ К КАЧЕСТВУМОРСКОЙ ВОДЫ ПО САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ ПОКАЗАТЕЛЯМ

Показатели

В местах водозаборов

В бассейнах

1

2

3

Количество бактерий группы кишечных палочек в 1 л воды (коли-индекс)

не более 100

не более 100

Количество энтерококков в 1 л воды (индекс энтерококков) при дополнительных исследованиях

не более 50

не более 10

Количество стафилококков в 1 л воды, растущих на плотной элективной среде и обладающих лецитиназной активностью (индекс стафилококков)

не регламентируется

не более 20

Количество сапрофитов в 1 мл при 37°

не регламентируется

не более 100

Примечание: Возбудителиинфекционных заболеваний не должны обнаруживаться в морской воде как исходной,так и воде бассейнов при периодическом контроле и контроле по эпидпоказаниям.

2. ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЕКТИРОВАНИЮ И УСТРОЙСТВУ БАССЕЙНОВ

2.1. Требования к устройствуводозаборов.

2.1.1. Заборы морской водыдолжны быть организованы на участках моря:

а) находящихся под влияниемкаких-либо источников загрязнения - выпусков сточных вод, выносов рек,загрязнений от портов и причалов, ливневых выпусков, пляжей и др.;

б) наименее подверженныхвлиянию вторичного загрязнения при волнении моря.

Выбор места забора морскихвод и конструкции водозаборного устройства должен производиться с учетомместной санитарной ситуации и качества морской воды в зоне будущего водозабора,а также с учетом прогноза изменения состава и свойств морской воды.

При этом качество морскойводы в районе водозабора должно соответствовать требованиям п.п. 1.1. - 1.2.

Удаленность водозаборов отберега и их устройство определяются в каждом конкретном случае с учетомтребований п.п. а, б.

2.1.2. Границы зонысанитарной охраны морского водозабора определяются в соответствии со СНиП11-31-74 “Водоснабжение. Наружные сети и сооружения”. При этом ее границы поакватории во всех направлениях должны быть приняты не менее 200 м.

2.1.3. Оголовки водозаборовдолжны быть:

а) заглублены не менее чем на2 м от уровня дна, для обеспечения забора морской воды из средних слоев, вменьшей мере подверженных влиянию загрязнений;

б) снабжены решетками сразмерами отверстий предупреждающими попадание в водоводы постороннихпредметов;

в) надежно укреплены, такжекак и водоемы, во избежание поломок и подсоса воды.

2.1.4. Должнапредусматриваться замкнутая система водозаборов от оголовка до бассейна,исключающая промежуточные водоприемные колодцы, которые могут быть источникомвторичного загрязнения.

2.1.5. При возобновленииподачи морской воды в бассейны после перерыва на срок более чем 4-5 часовдолжны быть предусмотрены специальные устройства для сброса в канализациюзастойной воды из системы водоводов.

При остановке системы дляремонта и других работ, связанных с нарушением герметичности водоводов, должнабыть предусмотрена возможность промывки системы до получения соответствиякачества морской воды требованиям п.п. 1.1. - 1.2.

2.1.6. Сброс использованнойводы из ванн и после промывки фильтров производится в канализацию всоответствии с требованиями СНиП 11-Л.11-70 “Спортивные сооружения. Нормыпроектирования” и СНиП 11-32-74 “Канализация. Наружные сети и сооружения”.

2.2. Требования к очистнымсооружениям и обеззараживанию морской воды.

2.2.1. При проектировании истроительстве плавательных бассейнов с морской водой должны предусматриватьсяочистные сооружения и устройства для обеззараживания морской воды.

2.2.2. В качестве очистныхсооружений должны быть предусмотрены скорые напорные фильтры или микрофильтры.

В период постояннойэксплуатации бассейна должна производиться промывка фильтров не реже 1 раза в 3суток. Учет промывки фильтров регистрируется в специальном журналеответственным исполнителем и врачом бассейна.

2.2.3. При несоответствииморской воды требованиям п.п. 1.1. - 1.2. в качестве основного методаобеззараживания воды рекомендуется хлорирование.* **

Примечание:* По согласованию с органами санитарно-эпидемиологической службы допускаетсяприменение безреагентных способов обеззараживания морской воды и электролизныхустановок с применением дезинфектантов, получаемых при электролизе повареннойсоли или морской воды.

** При несоответствии качества морской воды требованиям п.п. 1.1. и посогласованию с органами санитарно-эпидемиологической службы допускаетсяприменение окислителей для деструкции вредных химических веществ и улучшенияорганолептических свойств воды.

Обеззараживание водыосуществляется путем введения перед фильтрами концентрированных растворовдезинфектантов.

2.2.4. Для обеззараживания водымогут быть применены газообразный хлор, двутретьосновная соль гипохлоритакальция (45 - 52% активного хлора), натриевая соль дихлоризоциануровой кислоты(55 - 59% активного хлора), гипохлорит лития (50 - 60 % активного хлора).

2.2.5. Обеззараживание морскойводы производится в соответствии с “Инструкцией по контролю за обеззараживаниемхозяйственно-питьевой воды и за дезинфекцией водопроводных сооружений хлоромпри централизованном и местном водоснабжении” № 723а-67.

Вводимая при заполнениибассейна доза хлора устанавливается опытным путем с учетом хлоропоглощаемостиморской воды. Постоянная концентрация остаточного хлора в воде ванн бассейна, впериод эксплуатации, должна поддерживаться на уровне 0,2 - 0,4 мг/л.

2.2.6. Контроль засодержанием остаточного хлора в воде обеспечивается обслуживающим персоналомбассейна каждые 2 часа с записью результатов в журнале.

2.2.7. Очистка иобеззараживание морской воды не должны ухудшать ее бальнеологических свойств.

2.3. Требования ктехнологическим схемам водообмена и санитарно-техническому оборудованию.

2.3.1. При проектировании заоснову должны быть приняты проточные схемы водообмена в бассейнах, как наиболеецелесообразные в гигиеническим отношении. Рециркуляционные схемы с многократнымиспользованием морской воды не рекомендуются.

Выбор типов сооружений(открытые, закрытые бассейны и др.) определяется конкретнымиприродно-климатическими условиями.

2.3.2.Величина водообмена в бассейнах должна определяться с учетом:

а) обеспечения соответствиякачества морской воды требованиям п.п. 1.1. - 1.2.;

б) интенсивности нагрузкикупающихся на бассейн;

в) обеспечения заданнойтемпературы воды в ванне бассейна.

Расчетные соотношения иисходные данные приведены в таблице 3.

Таблица3

ИСХОДНЫЕДАННЫЕ РАСЧЕТОВ ОБЪЕМА ВАНН БАССЕЙНОВ.
ВЕЛИЧИНЫ НАГРУЗКИ КУПАЮЩИХСЯ И КРАТНОСТИ ВОДООБМЕНА.

Объем воды в ванне на 1 купающегося человека в сутки (м3)

Объем чистой воды, подаваемой на 1 человека (м3)

Водообмен (в %) к общему объему воды в ванне

6-7

1

Не менее 20

5

1,5

Не менее 30

4

2

Не менее 50

3

2

Не менее 75

2

2

Не менее 100

1

2

Не менее 200

2.3.3. Температура морскойводы в бассейнах должна поддерживаться в соответствии с требованиями СНиП11-Л.11-70 “Спортивные сооружения. Нормы проектирования”, т.е. при открытомтипе бассейна - не более 28 °С, при закрытом типе бассейна- не более 26 °С*.

* Примечание: 1. Влечебных бассейнах и ваннах температура морской воды определяется конкретнымицелями лечебного процесса, но не должна превышать 35 °С во избежание ухудшенияорганолептических свойств воды.

2.3.4. Рекомендуемые условияводообмена (п. 2.3.2.) должны обеспечиваться в процессекупания. При этом должен быть предусмотрен слив воды через поверхностные водосливыили пенные корытца, для удаления наиболее загрязненных порций воды,поверхностной пленки и других плавающих примесей.

С учетом ночного перерыва вэксплуатации бассейна и отстоя воды в течение 12 часов; до начала купания,должно быть предусмотрено удаление придонного слоя воды и осадка путем сброса10 % от общего объема воды через донные водосливы и добавления порций свежейводы до перелива через пенные корытца.

2.3.5. При выборе типаустройства переливного желоба (пенного корытца) предпочтение должно быть отдановариантам устройств с бортами, выступающими над уровнем воды.

2.3.6. При проектированиисистем трубопроводов для подачи морской воды в бассейны должны бытьпредусмотрены:

а) специальные отводы икраны для отбора проб на анализ исходной морской воды, воды после очистныхсооружений и обеззараживающих установок, а также после нагрева;

б) водомеры, позволяющиеучитывать количество морской воды, подаваемой в ванну бассейна;

в) термометры для контролятемпературы воды, подаваемой в бассейн и температуры нагрева воды наводонагревательных установках.

2.3.7. Основные требования кустройству бассейнов (месторасположение, требования к земельным участкам,планировочным решениям зданий и сооружений, естественному и искусственномуосвещению; противопожарные требования, санитарно-технические устройства, в томчисле отопление, вентиляция, водоснабжение и канализация) должнысоответствовать СНиП II-Л.11-70 “Спортивные сооружения. Нормы проектирования”.

3. Требования ксанитарному режиму бассейнов

3.1. Регламентация нагрузкикупающихся в бассейнах осуществляется в соответствии с принятой в проектерасчетной нагрузкой согласно п. 2.3.2.

3.2. Единовременнаяпропускная способность бассейнов определяется исходя из размеров поверхностизеркала воды (не менее 7 м2 поверхности на человека).

3.3. Периодически долженпроводиться санитарный день, в течение которого производится полный слив водыиз бассейна, санитарная обработка ванны, включающая механическую чистку, мытье,дезинфекцию и промывание водопроводной водой.

3.4. Периодичностьсанитарных дней определяется в каждом конкретном случае органамисанитарно-эпидемиологической службы, с учетом нагрузки купающихся,интенсивности водообмена, качества морской воды в бассейне, санитарной ситуацииводозабора и других факторов, но не реже 1 раза в месяц.

3.5. Все помещения бассейнадолжны ежедневно подвергаться тщательной уборке.

В зале бассейна стены должныпротираться не реже 3-х раз в неделю; в санитарный день стены и полы следуетобмывать сильной струей водопроводной воды из шланга. При этом должно бытьисключено попадание сливной воды в ванну бассейна.

В подсобных помещениях,помимо ежедневной влажной уборки не реже 2-х раз в неделю, необходимопроизводить мытье полов горячей водой, промывку мебели в раздевальных комнатахи т.п.

3.6. Дезинфекцию бассейнапроводят при каждом опорожнении ванны. При наличии эпидпоказаний, бассейндолжен быть закрыт для проведения обеззараживания ванны, независимо от срокапроведения предыдущей дезинфекции.

До проведения дезинфекцииванну бассейна тщательно чистят щетками и моют мыльно-содовым раствором споследующим смыванием горячей водой из шланга.

Для дезинфекции ванныприменяют 5 % раствор хлорамина (Б или ХБ) или 2-2,5 % осветленный растворхлорной извести (температура 18 - 22°) при двухкратном орошении снормой расхода 0,6 - 0,8 л/м2. Смыв дезинфицирующего растворапроизводят не ранее чем через час после нанесения.

3.7.Текущую дезинфекцию в помещениях бассейна осуществляют одновременно с ихежедневной уборкой. Дезинфекции подлежат: обходные дорожки, полы, скамейки,коврики, дверные ручки, поручни. Дезинфекцию проводят протирая ветошью,смоченной 0,2 - 0,3 % осветленным раствором хлорной извести, 0,5 - 1 %раствором хлорамина или 3 % раствором ниртана.

3.8. Периодическуюдезинфекцию стен (до уровня не менее 2 м), полов в зале бассейна и подсобныхпомещений, а также предметов, указанных в п. 3.7. проводят как заключительнуюстадию генеральной уборки, используя растворы, перечисленные в п. 3.7. всанитарные дни, когда опорожняется ванна.

3.9. Хранение запасовдезвеществ, приготовление рабочих растворов дезинфектантов и работа с нимипроизводится в соответствии с “Инструкцией по контролю за обеззараживаниемхозяйственно-питьевой воды и за дезинфекцией водопроводных сооружений хлоромпри централизованном и местном водоснабжении” № 723а-67 и “Инструкцией поприменению двутретиосновной соли гипохлорита кальция для дезинфекции № 826а-69.

3.10. Правила пользованиябассейнами должны предусматривать:

а) общий медицинский осмотри обследование на туберкулез обслуживающего персонала и тренеров припоступлении на работу и в дальнейшем не реже 1 раза в год;

б) обследование накожно-венерические заболевания обслуживающего персонала и тренеров (осмотрдерматовенерологом, исследование крови на РВ и мазка на гонококк) припоступлении на работу, с последующим осмотром дерматовенерологом иисследованием мазка на гонококк не реже 1 раза в квартал и анализом крови на РВне реже 1 раза в год;

в) купание только вкупальных костюмах (купальники, плавки, шапочка), которые после каждогоупотребления подлежат стирке. Непосредственно перед одеванием после душа,купальный костюм должен быть промыт горячей водой в душевой;

г) обязательную дезинфекцию,стирку, глажение после купания костюмов, выдаваемых напрокат и выдачу их взапломбированном виде;

д) запрещение посещениябассейна лицам с кожными и грибковыми заболеваниями;

е) повторный медицинскийосмотр лиц, пользующихся бассейном не реже одного раза в квартал;

ж) запрещение входа вбассейн лиц в обычной одежде и обуви.

3.11. Правила личной гигиеныкупающихся должны предусматривать:

а) обязательное прохождениемедицинского осмотра;

б) обязательный душ с мыломбез купальника и плавок;

в) проточный ножной душ привыходе из душевых кабин к ванне бассейна.

Посетители бассейна должныбыть ознакомлены с правилами посещения бассейна и купания в нем.

Выполнение правилпользования бассейнами и соблюдение правил личной гигиены купающимися, должнострого контролироваться обслуживающим персоналом бассейна.

4. Организацияконтроля качества морской воды в бассейнах

4.1. Контроль качества морскойводы в бассейнах должен осуществляться организацией, эксплуатирующей бассейн.Данные лабораторного анализа воды должны регистрироваться в специальномжурнале.

4.2. Контролю подлежит водав местах водозабора, в процессе ее очистки и обеззараживания, передпоступлением в бассейн и в ванне бассейна.

4.3. Частота и объеманализов и места отбора проб при осуществлении текущего контроля, определяютсяв соответствии с таблицей 4.

Таблица4

ЧАСТОТА ОТБОРАПРОБ И ОБЪЕМ АНАЛИЗОВ

Место отбора

Периодичность

Показатели

В бассейне (на сливе)

Не реже 2-х раз в неделю

Плавающие примеси, запахи, прозрачность, окраска (цветность), азот солевого аммиака, коли-индекс, индекс стафилококков, общее количество бактерий в 1 мл

В водоводах перед подачей морской воды в бассейн при водообмене

Не реже 2-х раз в неделю

Коли-индекс, запах, прозрачность, окраска (цветность)

Единовременно:
в местах водозабора, на этапах очистки и обеззараживания, перед подачей морской воды в бассейны и в ванне бассейна

Не реже 2-х раз в месяц

По всем показателям, указанным в п.п. 1.1. - 1.2.*

*Примечание:

а) Индексстафилококков следует определять только в воде бассейнов.

б) Контроль за температурой воды в бассейне должен осуществлятьсячерез каждые 2 часа в период эксплуатации.

4.4. В момент заполнениябассейна должен быть произведен анализ исходной воды и воды в заполненномбассейне до купания, для определения соответствия ее состава и свойствтребованиям, изложенным в пп. 1.1. - 1.2.

4.5. Для контроля работыочистных сооружений пробы следует отбирать непосредственно из водоводов и послеочистных сооружений из специально оборудованных для этих целей отводов икранов. Отбор проб следует производить с таким расчетом, чтобы отобратьнаиболее загрязненные порции воды (на сливе и в конце утреннего купания или вконце рабочего дня, когда вода в бассейне хорошо перемешана).

При обнаружениибактериального загрязнения свыше нормативных величин, приведенных в п. 1.2.(таблица 2),с целью выявления причин загрязнения повторно производится отбор проб сдополнительным определением индекса энтерококков и показателей наличия свежегофекального загрязнения (качественно).

4.6. Органамисанитарно-эпидемиологической службы периодически (не реже 1 раза в квартал) ичаще по эпидпоказаниям осуществляется контроль за качеством морской воды вместах водозаборов, перед поступлением воды в бассейны (после очистки иобеззараживания) и в ваннах бассейнов.

4.7. Пробы воды длябактериологического анализа отбирают с соблюдением правил стерильности согласноГОСТ18963-73.

Пробы воды для химическогоанализа отбирают в чисто вымытые, сполоснутые дистиллированной водой ивысушенные стеклянные емкости.

4.8. Отбор проб воды длябактериологического анализа производится из кранов на трубопроводах послепредварительной стерилизации кранов обжиганием пламенем горящего тампона,смоченного спиртом и последующего спуска воды в течение 5-10 мин.

4.9. Отобранные пробы должнысопровождаться документом, содержащим:

- точное наименование местаотбора пробы;

- дату отбора пробы суказанием года, месяца, числа и часа;

- температуру отобраннойводы;

- количество человек,искупавшихся за время после санитарного дня и смены воды в бассейне;

- внешний вид воды вбассейне, окраска (цветность), прозрачность, опалесценция и т.п.;

- особые обстоятельства,имевшие место при отборе и транспортировке проб воды.

Сопроводительный документдолжен быть подписан лицом, отбиравшим пробы, с указанием места работы идолжности.

4.10. Бактериологическийанализ отобранной пробы должен быть произведен не позднее чем через час послеотбора. При невозможности исследования пробы на месте, допускаетсятранспортировка проб в пределах 1 - 3 часов.

Санитарно-химическиеисследования должны быть выполнены в течение 8 часов с момента отбора.

4.11. Коли-индекс и общееколичество сапрофитов в 1 мл определяют в соответствии с ГОСТ18963-73 “Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа”.Методы определения индексов энтерококков и стафилококков приведены вприложении.

Патогенные микроорганизмыопределяют в соответствии с “Инструктивно-методическими указаниями пообнаружению в воде возбудителей кишечных инфекций бактериальной и вируснойприроды” № 1150-74.

4.12. Санитарно-химическиеисследования производят методами, принятыми для анализа морских ивысокоминерализованных вод.

Приложение

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕЦИТИНАЗОАКТИВНЫХ СТАФИЛОКОККОВ

Сущность метода заключаетсяв концентрировании бактерий из определенного объема анализируемой воды намембранные фильтры, выращивании их при 37±0,5 °С на желточно-молочно-солевом агаре (ЖМСА) сполимиксином, подсчете лецитиназоактивных стафилококков.

Через мембранные фильтрыпрофильтровывают 50 мл воды с таким расчетом, чтобы выросли изолированныеколонии (например, 5 мл, 20 мл, 25 мл). Фильтры помещают на ЖМСА сполимиксином, не содержащий на поверхности следов влаги, выращивают при 37±0,5 °С 20-24 часа. На эту средупри большом загрязнении стафилококками можно делать прямые посевы 1 мл именьших объемов.

Подсчитывают количествовыпуклых блестящих колоний, которые образовали характерный пигмент (золотистый,палевый, лимонно-желтый, реже белый) и радужную зону вокруг.

При необходимостиподтвердить наличие стафилококков, обладающих лецитиназной активностью,подозрительные колонии пересевают “пятнами” на чашки, разделенные на квадраты,со средой того же состава, отмечают пигментообразование, радужную зонуразложения желтка и зону помутнения, характерную для стафилококков форму клетокпри микроскопировании.

При отсутствии мембранныхфильтров можно определить стафилококки титрационным методом, используя вкачестве среды накопления солевой бульон. Схема посева должна соответствоватьтаблице 1 ГОСТ 18693-73, по которой определяют индекс стафилококков. Высев изсред накопления делают на ЖМСА с полимиксином, отмечая наличиелецитиназоактивных стафилококков.

Желточно-молочно-солевойагар (ЖМСА).

Сухой питательный агар - 55г.

(дагестанского НИИ питательных сред).

Натрий хлористый - 90 г.

Дистиллированная вода до1000 мл.

Расплавляют при нагревании,разливают мерно в сосуды и стерилизуют при 120±2 °С (1,1 кгс/см2) 20 мин.

Перед употреблением, врасплавленный и охлажденный до 50-55° солевой агар добавляют (из расчетана 100 мл среды) стерильное обезжиренное молоко - 6 мл.

Один яичный желток,тщательно смешанный с 50 мл физиологического раствора с помощью стеклянных бус- 10 мл.

Полимиксин М (растворхранить не более 14 дней) - 30000 ЕД.

Тщательно смешивают и разливаютв чашки Петри толстым слоем по 20-25 мл для выращивания бактерий на мембранныхфильтрах и тонким слоем по 15 мл для подтверждающего этапа.

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНТЕРОКОККОВ В МОРСКОЙ ВОДЕ

Индекс энтерококков можетбыть определен методом мембранных фильтров или титрационным методом.

Методмембранных фильтров

Сущность метода заключаетсяв концентрировании бактерий из определенного объема анализируемой воды намембранный фильтр, выращивании их на элективных средах при 37±0,5 °С, дифференцированиивыросших колоний и подсчете количества энтерококков.

Через мембранные фильтрыпрофильтровывают:

- при исследовании водыбассейна - не менее 100 мл;

- при исследовании воды уводозабора - не менее 20 мл, с таким расчетом, чтобы на каждом из фильтроввыросли изолированные колонии в количестве не более 50. При выборе объемаориентируются на результаты предыдущих исследований. (Например, для водыбассейнов могут быть выбраны следующие объемы: 10, 40, 50 мл; для воды уводозабора - 1, 5, 15 мл).

Фильтры помещают на элективнуюсреду (Сланеца - Бертли или Турчинского) и выращивают при 37±0,5 °С 24 часа.

Учетрезультатов

Подсчитывают колонии разнойокраски и величины. По 3-4 колонии каждого типа пересевают секторами на чешки сподтверждающей средой (по 8-10 секторов на одну чашку). Рост на этой среде ихарактерная морфология клеток при микроскопии (полиморфные, как правило, слегкавытянутые диплококки) позволяет отнести такого типа колонии к энтерококкам. Длявычисления индекса энтерококков количество таких колоний в исследуемом объектеумножают на 1000 мл и делят на этот объем, соблюдая условия, оговоренные в п.4.2.13 ГОСТа 18963-73 при вычислении коли-индекса.

Обильный рост колоний,редуцирующих ТТХ, т.е. с малиново-вишневым оттенком, свидетельствуют о наличиив воде Str. faecalis - показателя свежего фекального загрязнения.

При работе на средеТурчинского после выращивания колоний непосредственно на мембранном фильтревыполняют каталазный тест путем нанесения петлей капли перекиси водорода нанесколько колоний каждого типа. При образовании пузырьков газа такие колонии изучета исключают. Пересевают на подтверждающую среду только колонии, необладающие каталазной активностью.

СредаСланеца-Бертли (модификация)

Сухой питательный агар - 40г.

(Дагестанского НИИпитательных сред)

Калий фосфорнокислыйоднозамещенный - 4 г.

Дистиллированная вода - до1000 мл.

Расплавить при нагревании,установить рН 7,0, разлить мерно в сосуды, стерилизовать при 120±2 °С (1,1 кгс/см2)20 мин.

Перед употреблением врасплавленный и слегка остуженный агар добавить из расчета на 100 мл среды:

Глюкозы - 0,4 г.

Азид натрия - 0,04 г.

ТТХ (1 % водный раствор) - 1мл.

Полимиксин М

(срок хранения раствора неболее 14 дней) - 30000 ед.

Тщательно смешать, исправитьрН - 6,9, разлить в чашки толстым слоем по 20-25 мл. Хранить в холодильнике неболее 3-х суток.

СредаТурчинского

Дистиллированная вода - 600мл.

Желчь крупного рогатогоскота - 400 мл.

Сухой питательный агарДагестанского НИИ питательных сред - 35-40г.

Калий фосфорнокислыйдвузамещенный - 5 г.

Калий фосфорнокислыйоднозамещенный - 5 г.

Натрий-аммонийфосфорнокислый - 5 г.

Расплавить при нагревании,установить рН 7,2 - 7,4, разлить мерно в сосуды, простерилизовать при 120±2 °С (1,1 кгс/см2)20 мин.

Перед употреблением врасплавленный и слегка охлажденный агар добавить из расчета на 100 мл среды:

Глюкозы - 0,5 г.

ТТХ (1 % водный раствор) - 1мл.

1 % водный растворметиленового синего

(хранить не более 14 дней) -0,6 мл

Полимиксин - 30000 ед.

Фурациллин (0,1 % спиртовойраствор) - 1,2 мл.

Тщательно смешать, разлить вчашки толстым слоем по 20-25 мл. Хранить в холодильнике не более 3-х суток.

Подтверждающаясреда

Сухой питательный агарДагестанского НИИ питательных сред - 50 г.

Натрий хлористый - 65 г.

Вода дистиллированная - 1000мл.

Расплавить при нагревании,установить рН 6,2 разлить мерно в сосуды, простерилизовать при 120±2 °С (1,1 кгс/см2)30 мин.

Перед употреблением врастопленный агар добавить из расчета на 100 мл среды:

Глюкозы - 1 г.

ТТХ (1 % водный раствор) - 1мл.

Кристаллических фиолетовый(0,01 % водный раствор) - 1,25 мл.

Полимиксин - 30000 ед.

Тщательно смешать, разлить вчашки. Хранить в холодильнике не более 3-х суток.

Титрационныйметод

Титрационный метод менее точен,чем метод мембранных фильтров, однако при их отсутствии может быть рекомендовандля использования.

Для определения количестваэнтерококков можно воспользоваться посевами в глюкозо-пептонную средунакопления, которые были сделаны для определения бактерий группы кишечныхпалочек. (Глюкозо-пептонную среду в этих случаях следует готовить безиндикатора бромтимолблау).

Из сосудов, где отмеченыпризнаки роста, делают высев одновременно на среду Эндо и на сектора средыСланеца-Бертли, (по 6 секторов). Рост на секторах среды Сланеца-Бертлиуказывает на наличие энтерококков. При необходимости наличие энтерококковподтверждают микроскопией выросших колоний.

Индекс энтерококковрассчитывают по таблице 1 ГОСТ18963-73.

При отсутствии азида натриядопустимо использовать в качестве подтверждающих другие среды (Туринского,молочно-ингибиторную). Среды без азида натрия менее элективны в отношениипосторонней кокковой микрофлоры, поэтому необходима более тщательнаяидентификация выросших колоний (Каталазный тест и микроскопия).

На сектора необходимо делатьмассивный высев большой петли материала из сред накопления. В то же время, кконцу штриха должны быть получены изолированные колонии, иначе более грубыйрост посторонних бактерий будет маскировать единичные нежные колонииэнтерококков.

Каталазный тест можновыполнять на предметном стекле, нанося испытуемую культуру большой точкой.Слегка подсушив препарат на воздухе, накапывают петлей перекись водорода.Положительный каталазный тест отмечают при образовании пузырьков газа,наблюдаемых с лупой или с помощью вогнутого зеркала.

СОДЕРЖАНИЕ

 

15
Мне нравится
Комментировать Добавить в закладки

Комментарии могут оставлять только зарегистрированные пользователи.

Пожалуйста зарегистрируйтесь или авторизуйтесь на сайте.